载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于制剂技术领域，具体涉及一种温敏壳聚糖水凝胶的制备方法及其制备得到的载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶和其在面膜方面的应用。所述温敏壳聚糖水凝胶载PDGF，包括PDGF‑PLGA微球的制备、水凝胶的制备。所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶易使用易操作，无病原体且生物相容性好；透明程度高，有利于观察创面愈合的情况，将所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶应用到面膜中，可以更好的涂覆面膜以及促进所含有效的活性物质吸收。

Temperature-sensitive chitosan hydrogels loaded with PDGF microspheres and their preparation methods and Applications

【技术实现步骤摘要】
载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶及其制备方法和应用
本专利技术属于制剂
，具体涉及一种温敏壳聚糖水凝胶的制备方法及其制备得到的载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶和其在面膜方面的应用。
技术介绍
温敏性水凝胶是一种聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖和β-甘油磷酸钠的共聚物，其在低温下为液态，高温时凝聚，这种状态的变化随温度可逆。它同时具有聚合材料的多种特征，如网络结构和高含水量，目前广泛的运用于医药生命科学等多种领域，包括但不仅限于3D培养、组织工程和药物传送这些。创面愈合是一个复杂的过程，需要依靠修复细胞、炎性细胞、细胞外基质、多种生长因子和细胞因子协同作用来重建受损的组织，且各种因素间相互联系和相互作用，是时间与空间上高度协调的整合过程。自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，被称为“Ⅱ型程序性细胞死亡”，是生物降解胞内蛋白，完成细胞器转化，保持内部环境稳定的重要方式。损伤激活自噬，自噬与血管新生和组织损伤后修复密切相关。在近年的研究中，发现自噬与LC3有关，在自噬体完全形成后，除了部分与自噬体膜腔面结合的LC3-Ⅱ外，大部分的Atg蛋白会被回收至包浆中。最后自噬体与溶酶体融合，形成自噬体溶酶体，由此降解LC3-Ⅱ和被包入其中的物质。在不少创伤疾病中，抑制自噬有利于恢复。对于创面的修复，目前的一些产品或制剂还存在很多缺陷，比如生物相容性不好、有轻微毒性，含有病原体致使创面发生新的病变，或者遮盖了创面不易进行愈合观察以及修复效果不佳等等。因此，为克服这些缺陷，提供一种更优的创面修复制剂很有必要，基于此目的，本专利技术提出一种载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶的制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下方案：一种温敏壳聚糖水凝胶的制备方法，所述温敏壳聚糖水凝胶载PDGF，所述制备方法包括以下步骤：1)PDGF-PLGA微球的制备：将PLGA溶于DCM，PDGF溶于PBS，二者混合乳化成初乳，初乳迅速加入到蒸馏水中，机械搅拌，固化，然后过滤清洗，冻干得所述微球，备用；2)水凝胶的制备：将壳聚糖溶于水中，加入乳酸，充分搅拌溶解，然后放入冰浴中预冷，将提前预冷的β-甘油磷酸钠加入到壳聚糖溶液中，充分搅拌混匀后备用；3)将步骤1)的PDGF-PLGA微球与步骤2)的水凝胶混合均匀记得所述的温敏壳聚糖水凝胶。进一步，步骤1)所述蒸馏水可替换为0.1％甲基纤维素或1％聚乙烯醇。优选为蒸馏水。进一步，步骤2)所述乳酸可替换为盐酸或醋酸。优选为乳酸。进一步，步骤2)所述β-甘油磷酸钠的终浓度质量体积比为5％～15％。优选为，β-甘油磷酸钠的终浓度质量体积比为7.5％。某些实施例中，温敏壳聚糖水凝胶的制备方法为：将40mgPLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)溶于2.5mlDCM(二氯甲烷)中，将20ugPDGF溶于PBS中，二者混合乳化6000rpm，2min成初乳，初乳迅速加入到200ml蒸馏水中，机械搅拌400rpm，固化，然后过滤清洗，冻干得微球，备用。壳聚糖温敏水凝胶的制备：将2％壳聚糖溶于水中，加入一定量的乳酸，充分搅拌溶解，然后放入冰浴中预冷半小时，将提前预冷的β-甘油磷酸钠加入到壳聚糖溶液中，其终浓度为5％～15％，充分搅拌混匀后备用，最后将二者混合即得载PDGF微球的温敏水凝胶。本专利技术的目的之二在于提供一种载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶，所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶由上述方法制备得到(图8)。所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶因温敏特性比普通制剂易操作，且无毒、具有良好的生物相容性，无病原体，还具有很好的透明度，有利于细胞的观察。本专利技术的目的之三在于提供一种促进伤口愈合的药物，该药物可用于促进创面愈合，且该药物无毒、具有良好的生物相容性。为实现上述目的，本专利技术采用以下方案：所述药物包含了所述的载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶。进一步，所述药物可通过抑制自噬来促进创面愈合。进一步，所述药物可通过抑制LC3Ⅰ/Ⅱ来抑制自噬。如图1所示，在创面使用了所述的载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶或所述促进伤口愈合的药物后能促进胶原蛋白沉积、肉芽颗粒组织形成，从而促进创面愈合。本专利技术的目的之四在于提供一种所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶及其制备方法的应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下方案：所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶及其制备方法在制备温敏壳聚糖水凝胶面膜中的应用。进一步，所述温敏壳聚糖水凝胶面膜中包含但不限于PDGF这一种有效活性成分。目前市面上的面膜主要为膏状面膜、贴装面膜、水凝胶面膜(非温敏型)，而贴装面膜和水凝胶面膜(非温敏型)在使用时，需要平躺，较为占用时间且影响活动，膏状面膜大多较难涂覆均匀，存在效果不佳或过度浪费的情况。因此，介于温敏壳聚糖水凝胶的温敏特性，在未使用的状态下是水状，涂覆到肌肤上便会因温度升高，形成一层温敏水凝胶膜，经过实验证明，温敏水凝胶膜更能使所载有效活性成分到达肌肤。PDGF作为祛皱抗衰的极品良药有三大针对行医学原理：(1)促进皮下血管形成，修复皮下血液微循环系统，为皮肤提供充足营养。皮肤衰老一个重要的原因就是皮下血管萎缩，从而导致皮肤供血不足，故细胞缺乏营养，致使皱纹的产生。许多生长因子参与血管生成的生理调节。它们各自在其中起至关紧要作用。其中PDGF的再生血管功能对于延缓衰老有明显疗效。(2)促进胶原蛋白的合成，更有效延缓衰老。补充胶原蛋白几乎是现在每个爱美人士都知道的常识。然而，如何让人体更充分的吸收胶原蛋白一直是个难解之题。经美国南加州大学凯克医学院的研究人员观察到，PDGF可以成功促进胶原蛋白的生成。通过PDGF生成的胶原蛋白比直接涂抹或食用胶原蛋白更能有效延缓皮肤衰老。(3)PDGF是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，促进纤维母细胞的生成，从而使皱纹自然长平。本专利技术的有益效果在于：1)所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶易使用易操作，无病原体且生物相容性好；2)所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶透明程度高，用于创面愈合，有利于观察创面愈合的情况；3)将所述载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶应用到面膜中，可以更好的涂覆面膜以及促进所含有效的活性物质吸收。附图说明图1载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶促进创面愈合的示意图。图2PDGF-PLGA微球的SEM图。图3PDGF-PLGA微球的粒径分布图。图4载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶的SEM图。图5β-甘油磷酸钠含量对凝胶时间和pH的影响。图6载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶的释放率。图7载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶的体内降解性。图8载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶的温敏实验。图9载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶对HUVEC细胞无毒性。图10载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶对3T3细胞无毒性。图11载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶有效促进内皮和成纤维细胞的迁移。图12载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶有效促进HUVEC细胞的增殖。图13载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶有效促进3T3细胞的增殖。图14载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶有效促进创面愈合。图15载PDGF微球的温敏壳聚糖水凝胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种温敏壳聚糖水凝胶的制备方法，其特征在于，所述温敏壳聚糖水凝胶载PDGF，所述制备方法包括以下步骤：1)PDGF‑PLGA微球的制备：将PLGA溶于DCM，PDGF溶于PBS，二者混合乳化成初乳，初乳迅速加入到蒸馏水中，机械搅拌，固化，然后过滤清洗，冻干得所述微球，备用；2)水凝胶的制备：将壳聚糖溶于水中，加入乳酸，充分搅拌溶解，然后放入冰浴中预冷，将提前预冷的β‑甘油磷酸钠加入到壳聚糖溶液中，充分搅拌混匀后备用；3)将步骤1)的PDGF‑PLGA微球与步骤2)的水凝胶混合均匀记得所述的载PDGF‑PLGA微球温敏壳聚糖水凝胶。

【技术特征摘要】
1.一种温敏壳聚糖水凝胶的制备方法，其特征在于，所述温敏壳聚糖水凝胶载PDGF，所述制备方法包括以下步骤：1)PDGF-PLGA微球的制备：将PLGA溶于DCM，PDGF溶于PBS，二者混合乳化成初乳，初乳迅速加入到蒸馏水中，机械搅拌，固化，然后过滤清洗，冻干得所述微球，备用；2)水凝胶的制备：将壳聚糖溶于水中，加入乳酸，充分搅拌溶解，然后放入冰浴中预冷，将提前预冷的β-甘油磷酸钠加入到壳聚糖溶液中，充分搅拌混匀后备用；3)将步骤1)的PDGF-PLGA微球与步骤2)的水凝胶混合均匀记得所述的载PDGF-PLGA微球温敏壳聚糖水凝胶。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述蒸馏水可替换为0.1％甲基纤维素或1％聚乙烯醇。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：许可，张宏宇，肖健，贾尝，吴艳青，叶露霞，安宁晨，张海娟，章琪露，
申请(专利权)人：温州大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33