一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法，本发明专利技术的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液是向1L无菌蒸馏水中，依次加入0.003~0.005g的氧化胆碱样品的制备、1~2g的氨基酸样品、10~12g的无机盐、0.003~0.005g的偏多酸钙、0.003~0.005g的叶酸、0.007~0.0075g的肌醇、0.003~0.005g的烟酰胺、0.003~0.005g的吡哆醇、0.0003~0.0005g的核黄素、0.003~0.005g的硫胺素、4~5g的葡萄糖样品和0.01~0.02g的酚红混合均匀即得一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，本发明专利技术的诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液可以诱导脂肪干细胞快速的分化。

A Complete Culture Medium for Inducing Chondrogenesis of Adipose Stem Cells and Its Preparation Method

【技术实现步骤摘要】
一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法
本专利技术涉及细胞培养领域，具体涉及一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法。
技术介绍
目前，在研究间充质干细胞的领域里，主要的对象还是骨髓间充质干细胞，并已初步形成了分离和培养的方法，但是大量培养骨髓间充质干细胞受到了一定的限制。尤其是在软骨组织工程研究中，因骨髓间充质干细胞的分离和培养难度，限制了其成为良好的组织工程种子细胞来源。所以，最近人们将研究转向脂肪来源的干细胞的研究中，发现该细胞具有很强的增殖和分化能力，也较容易分离与培养。在临床研究中，脂肪干细胞在细胞移植及组织工程等方面也有着广泛的应用前景。完全培养基（Completemedium）这是一种在基本培养基内加入一些富含氨基酸、维生素和碱基之类的天然物质，即加入生长因子而制成的各种营养基，可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要，是微生物学上常用的一种培养基。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。但是专门用于诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养基目前还未见报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液及制备方法，本专利技术的诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液可以诱导脂肪干细胞较好的分化，具体的
技术实现思路
如下：本专利技术提供了一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其技术点在于：1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：无机盐10~12g氨基酸1~2g偏多酸钙0.003~0.005g氧化胆碱0.003~0.005g叶酸0.003~0.005g肌醇0.007~0.0075g烟酰胺0.003~0.005g吡哆醇0.003~0.005g核黄素0.0003~0.0005g硫胺素0.003~0.005g葡萄糖4~5g酚红0.01~0.02g。在本专利技术的有的实施例中，所述的无机盐选自氯化钙、氯化钾、硫酸镁、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、硝酸钾和硝酸铁中的一种或几种混合物。在本专利技术的有的实施例中，所述的氨基酸选自L-精氨酸、L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸和L-丝氨酸中的一种或几种混合物。在本专利技术的有的实施例中，所述的葡萄糖为α-D-呋喃葡萄糖、-D-呋喃葡萄糖、α-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖中的一种或者几种。本专利技术的另外一个目的在于提供一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法，其技术点在于：所述的诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法如下：S1葡萄糖样品的制备：将10g葡萄糖粉末溶于33.3mL生理盐水中，震荡均匀，通过微孔滤膜过滤除菌，得浓度为300mg/mL葡萄糖样分装成1mL/支；S2氧化胆碱样品的制备：将10g氧化胆碱粉末溶解于10mL超纯水，通过微孔滤膜过滤除菌，放置于4℃温度下密封保存，得到浓度为1g/mL的氧化胆碱样品备用；S3氨基酸样品的制备：将5g氨基酸粉末溶解于200mL超纯水中，震荡混匀，通过微孔滤膜过滤除菌，配制成浓度为25mg/mL浓缩存储液，分装冻存；S4完全培养液的制备：向无菌蒸馏水中，依次加入步骤（2）中制备得到的氧化胆碱样品的制备、步骤（3）中制备得到的氨基酸样品、无机盐、偏多酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、硫胺素、步骤（1）中制备得到的葡萄糖样品和酚红，混合均匀。在本专利技术的有的实施例中，所述的步骤（1）中震荡时间为30~60s，所述震荡的速度为1800~1850rpm。在本专利技术的有的实施例中，所述的步骤（3）中震荡时间为20~40min，震荡速度为145~155rpm。本专利技术的有益效果：（1）.本专利技术的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液中含有无机盐，其中无机盐对组织和细胞的结构很重要，硬组织如骨骼和牙齿，大部分是由钙、磷和镁组成，而软组织含钾较多（2）.本专利技术的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液中含有氨基酸，氨基酸氨基酸是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。（3）.本专利技术的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液中含有氧化胆碱，氧化胆碱是维生素B的一种，氧化胆碱可以促进肝，肾的脂肪代谢，氧化胆碱还是机体合成乙酰胆碱的基础，从而影响神经信号的传递，另外氧化胆碱也是体内蛋氨酸合成所需的甲基源之一。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以使本领域的技术人员能够更好的理解本专利技术的优点和特征，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚的界定。本专利技术所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其中1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：无机盐11g氨基酸1.5g偏多酸钙0.004g氧化胆碱0.004g叶酸0.004g肌醇0.00725g烟酰胺0.004g吡哆醇0.004g核黄素0.0004g硫胺素0.004g葡萄糖4.5g酚红0.015g。其中无机盐为氯化钙、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、硝酸钾和硝酸铁。其中氨基酸为L-精氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸和L-丝氨酸。其中葡萄糖为-D-呋喃葡萄糖、α-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖。按照上述步骤本专利技术的诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液的制备方法如下：S1葡萄糖样品的制备：将10g葡萄糖粉末溶于33.3mL生理盐水中，震荡均匀，震荡时间为45s，震荡的速度为1825rpm，通过微孔滤膜过滤除菌，得浓度为300mg/mL葡萄糖样分装成1mL/支；S2氧化胆碱样品的制备：将10g氧化胆碱粉末溶解于10mL超纯水，通过微孔滤膜过滤除菌，放置于4℃温度下密封保存，得到浓度为1g/mL的氧化胆碱样品备用；S3氨基酸样品的制备：将5g氨基酸粉末溶解于200mL超纯水中，震荡混匀，震荡时间为30min，震荡速度为150rpm，通过微孔滤膜过滤除菌，配制成浓度为25mg/mL浓缩存储液，分装冻存；S4完全培养液的制备：向无菌蒸馏水中，依次加入步骤（2）中制备得到的氧化胆碱样品的制备、步骤（3）中制备得到的氨基酸样品、无机盐、偏多酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、硫胺素、步骤（1）中制备得到的葡萄糖样品和酚红，混合均匀。实施例2：一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其中1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：无机盐12g氨基酸2g偏多酸钙0.005g氧化胆碱0.005g叶酸0.003g肌醇0.007g烟酰胺0.003g吡哆醇0.003g核黄素0.0003g硫胺素0.003g葡萄糖4g酚红0.01g。其中无机盐为氯化钙、氯化钾、硫酸镁、氯化钠、碳酸氢钠和硝酸铁。其中氨基酸为L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸和L-丝氨酸。其中葡萄糖为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：无机盐    10~12g氨基酸    1~2g偏多酸钙  0.003~0.005g氧化胆碱  0.003~0.005g叶酸      0.003~0.005g肌醇      0.007~0.0075g烟酰胺    0.003~0.005g吡哆醇    0.003~0.005g核黄素    0.0003~0.0005g硫胺素    0.003~0.005g葡萄糖    4~5g酚红      0.01~0.02g。

【技术特征摘要】
1.一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：1L诱导脂肪干细胞成软骨分化的培养液由下列物质配制而成：无机盐10~12g氨基酸1~2g偏多酸钙0.003~0.005g氧化胆碱0.003~0.005g叶酸0.003~0.005g肌醇0.007~0.0075g烟酰胺0.003~0.005g吡哆醇0.003~0.005g核黄素0.0003~0.0005g硫胺素0.003~0.005g葡萄糖4~5g酚红0.01~0.02g。2.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的无机盐选自氯化钙、氯化钾、硫酸镁、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、硝酸钾和硝酸铁中的一种或几种混合物。3.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的氨基酸选自L-精氨酸、L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸和L-丝氨酸中的一种或几种混合物。4.根据权利要求1所述的一种诱导脂肪干细胞成软骨分化的完全培养液，其特征在于：所述的葡萄糖为α-D-呋喃葡萄糖、-D-呋喃葡萄糖、α-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖中的一种或者几种。5.一种诱导脂肪干细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨慧慧，
申请(专利权)人：杨慧慧，
类型：发明
国别省市：安徽,34