ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法检测家用电器防霉性能的方法技术

本发明专利技术涉及一种家用电器防霉性能的检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及孢子液制备；OD值‑活菌含量对数值lgCB标曲建立；ATP浓度对数值lgCA‑相对荧光强度对数值lgIA标曲建立及接种菌液活菌CA标定；样品接种、培养及洗脱回收；回收液IA测定及其活菌ATP浓度CA和TA推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的家用电器防霉性能进行精准定量测试。本发明专利技术规定洗脱回收接触0h及培养48h后的对照样品和抗菌样品，测定回收液IA并以lgIA表征和计算R或A。本发明专利技术研发的家用电器防霉性能检测的ATP生物荧光lgCA‑lgIA标准曲线法，将以科学先进的检测技术支撑产品质量提升。

Standard Curve Method of ATP Biofluorescence lgCA-lgIA for Testing Anti-mildew Performance of Household Appliances

【技术实现步骤摘要】
ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法检测家用电器防霉性能的方法
本专利技术涉及家用电器的防霉性能测试方法，具体是一种应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的家用电器防霉性能进行精准定量检测的ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法，属于家用电器抗菌功能检测

技术介绍
多年来，我国家电产业的创新效率和市场效益不容小觑，伴随着人们健康环保意识的增强，消费者对家电产品的抗菌需求日新月异；上世纪末抗菌家电应运而生，现阶段，抗菌技术在家电行业的应用和普及势不可挡，抗菌功能已成为家电产品一个极具特色的“卖点”；因此，相关标准化要求逐渐提上日程。目前，国内外抗菌材料性能检测技术体系主要针对细菌和真菌，其中防霉检测方法基本源自美标、日标和欧标，所涉标准主要包括基于土埋培养法、琼脂平板法和湿室培养法的ISO846:1997《塑料制品的抗菌培养评估》、DIN53793《抗菌高分子材料的抗真菌测定方法》等。我国侧重于平皿培养法和悬挂法，先后制定实施GB/T1741-2007《漆膜耐霉菌性测定法》、GB/T24346-2009《纺织品防霉性能的评价》、FZ/T60030-2009《家用纺织品防霉性能测试方法》、GB/T24128-2009《塑料防霉性能试验方法》、QB/T4199-2011《家用电器防霉性能测试方法》、HG/T4301-2012《家用电器防霉性能测试方法》、LY/T2230-2013《人造板防霉性能评价》等标准。总体而言，现有防霉性能检测方法在
技术实现思路
和实际应用中存在以下共性问题：一是由于霉菌孢子生长过程中形成的菌丝体无法准确计数，只能进行定性判定，无法定量测试；二是因霉菌生长周期较长，培养时间至少2周～4周，导致测试周期较长，时间及经济成本高；三是实验过程繁琐，技术难度较高；相关操作受人为因素影响大，使得测试误差大，缺乏可比性。近年来，在国际细菌检测
ATP荧光分析法发展日益成熟，与传统平皿法相比检测结果相关性为98％，准确度高且可实现快速检测。受需求牵引，国外抗菌材料性能检测技术研究领域针对当前定量化、快速化和简易化发展趋势，已借鉴ATP荧光分析原理制定ISO20743:2007-2013《Textiles-Determinationofantibacterialactivityoftextileproducts(纺织品-抗菌整理纺织品的抗细菌性能测定)》和ISO13629-1:2012《Textiles-Determinationofantifungalactivityoftextileproducts.Part1Luminescence(纺织品-抗菌整理纺织品的防霉性能测定)》，规定了以样品接种后ATP含量变化表征抗细/霉菌性能的荧光测定法，但其仅适用于具有吸水性且对照样细/霉菌增长值＞0的纺织或微孔材料，在活菌回收方式、试验有效条件等关键技术方面不适用于具有非吸水性硬质表面且对照样霉菌增长值＜0的塑料、玻璃等家用电器部件材料，同时未提供测量不确定度评估。另外，该标准方法相关抗菌性能表征参数较为单一，仅涉及抗菌活性值A，而我国则惯用抗菌率R。因此，为抵御国外技术壁垒，规范国内市场秩序，推动产业转型升级，亟待研究科学先进、准确性和重现性高、简便易行的抗菌家电性能测试技术。本专利技术路线设计接轨国际，检测方法属全球首创，可有效填补国内外相关
空白。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的家用电器防霉性能进行检测的ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法，能够解决家用电器乃至其他产品领域抗菌材料及制品防霉性能精准定量测试问题。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种家用电器防霉性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及孢子悬液制备；(4)OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线建立；(5)ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定；(6)样品接种、培养及洗脱回收；(7)回收液相对荧光强度值IA测定；(8)回收液活菌ATP浓度CA和TA推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的家用电器防霉性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值IA测定中：明确对照样品和抗菌样品的制备、尺寸、数量及前处理要求，将霉菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜霉菌孢子培养物制备孢子悬液；应用MTT比色分析法建立OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线，推导得出曲线的线性方程式Y＝a0X+b0及相关系数R02；并对不同稀释度的孢子悬液进行活菌含量CB标定。然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10-8mol/L、7.0×10-7mol/L、7.0×10-6mol/L和2.1×10-9mol/L、2.1×10-8mol/L、2.1×10-7mol/L，测定其相对荧光强度值IA；绘制两条相应浓度的lgCA-lgIA标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝aA0X+bA0(高浓度)、Y＝aAX+bA(低浓度)和线性相关系数RA02(高浓度)、RA2(低浓度)。同时，用察氏培养液对活菌含量CB为1.0×108CFU/mL～5.0×108CFU/mL的霉菌混合孢子液进行连续10倍梯度稀释，测定其相对荧光强度值IA，并根据高浓度标准曲线方程式Y＝aA0X+bA0推算相应的活菌ATP浓度CA；经调整得到CA范围为5.0×10-7mol/L～9.0×10-7mol/L的接种菌液。然后，向各组样品待测表面分别滴加0.3mL接种菌液，立即用4.6mL洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收，测定回收液的相对荧光强度值IAC0ij、IAT0ij，根据低浓度标准曲线方程式Y＝aAX+bA推算其活菌ATP浓度CAOij和TAOij。同时，将6组密封于无菌平皿内的对照样品及抗菌样品在(28±2)℃、(95±2)％RH的条件下培养48h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式洗脱回收表面残留菌并测定回收液的相对荧光强度值IACtij、IATtij，推算相应的活菌ATP浓度CAtij和TAtij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据ATP低浓度标准曲线lgCA-lgIA的线性方程式Y＝aAX+bA，以0h接触及经48h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经48h培养后的霉菌增长值Fij、Gij以及抗菌率Rij和抗菌活性值Aij；对每组样品的Rij和Aij取算术平均值得到相应的Ri和Ai；每批家用电器样品的抗菌率R和抗菌活性值A为其三组样品Ri和Ai的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定防霉性能分级判定标准；当某组(件)抗菌家用电器样品的抗菌率Ri(Rij)或抗菌活性值Ai(Aij)与其他两组(四件)样品的防霉性能相比至少相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种家用电器防霉性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及孢子悬液制备；(4)OD值‑活菌含量对数值lgCB标准曲线建立；(5)ATP浓度对数值lgCA‑相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定；(6)样品接种、培养及洗脱回收；(7)回收液相对荧光强度值IA测定；(8)回收液活菌ATP浓度CA和TA推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的家用电器防霉性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgCA‑lgIA标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值IA测定中：明确对照样品和抗菌样品的制备、尺寸、数量及前处理要求，将霉菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜霉菌孢子培养物制备孢子悬液；应用MTT比色分析法建立OD值‑活菌含量对数值lgCB标准曲线，推导得出曲线的线性方程式Y＝a0X+b0及相关系数R0

【技术特征摘要】
1.一种家用电器防霉性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及孢子悬液制备；(4)OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线建立；(5)ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定；(6)样品接种、培养及洗脱回收；(7)回收液相对荧光强度值IA测定；(8)回收液活菌ATP浓度CA和TA推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的家用电器防霉性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值IA测定中：明确对照样品和抗菌样品的制备、尺寸、数量及前处理要求，将霉菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜霉菌孢子培养物制备孢子悬液；应用MTT比色分析法建立OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线，推导得出曲线的线性方程式Y＝a0X+b0及相关系数R02；并对不同稀释度的孢子悬液进行活菌含量CB标定，然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10-8mol/L、7.0×10-7mol/L、7.0×10-6mol/L和2.1×10-9mol/L、2.1×10-8mol/L、2.1×10-7mol/L，测定其相对荧光强度值IA；绘制两条相应浓度的lgCA-lgIA标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝aA0X+bA0(高浓度)、Y＝aAX+bA(低浓度)和线性相关系数RA02(高浓度)、RA2(低浓度)，同时，用察氏培养液对活菌含量CB为1.0×108CFU/mL～5.0×108CFU/mL的霉菌混合孢子液进行连续10倍梯度稀释，测定其相对荧光强度值IA，并根据高浓度标准曲线方程式Y＝aA0X+bA0推算相应的活菌ATP浓度CA；经调整得到CA范围为5.0×10-7mol/L～9.0×10-7mol/L的接种菌液，然后，向各组样品待测表面分别滴加0.3mL接种菌液，立即用4.6mL洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收，测定回收液的相对荧光强度值IAC0ij、IAT0ij，根据低浓度标准曲线方程式Y＝aAX+bA推算其活菌ATP浓度CAOij和TAOij，同时，将6组密封于无菌平皿内的对照样品及抗菌样品在(28±2)℃、(95±2)％RH的条件下培养48h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式洗脱回收表面残留菌并测定回收液的相对荧光强度值IACtij、IATtij，推算相应的活菌ATP浓度CAtij和TAtij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据ATP低浓度标准曲线lgCA-lgIA的线性方程式Y＝aAX+bA，以0h接触及经48h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经48h培养后的霉菌增长值Fij、Gij以及抗菌率Rij和抗菌活性值Aij；对每组样品的Rij和Aij取算术平均值得到相应的Ri和Ai；每批家用电器样品的抗菌率R和抗菌活性值A为其三组样品Ri和Ai的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定防霉性能分级判定标准；当某组(件)抗菌家用电器样品的抗菌率Ri(Rij)或抗菌活性值Ai(Aij)与其他两组(四件)样品的防霉性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgCA─lgIA标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后两组(件)抗菌家用电器样品防霉性能水平相同，则弃之；取另外两组(四件)剩余样品抗菌率Ri(Rij)或抗菌活性值Ai(Aij)的算术平均值作为该批次(组)抗菌家用电器样品防霉性能的评价结果。2.根据权利要求1所述的家用电器防霉性能的检测方法，其特征在于，所述的样品制备及前处理，按下述步骤进行：(1)对照样品：由卫生级高密度聚乙烯(HDPE)注射成型，尺寸为(50±2)mm×(50±2)mm，厚度不大于5mm；每个菌种试验使用6组样品，其中0h接触和48h培养试验各用3组，每组5件样品；(2)抗菌样品：抗菌样品为由相关家电的抗菌部件或同质材料按照相同工艺制备的待检样品(如受部件形状所限,无法直接制成试验样品,则可采用与其相同的原材料和加工方法制备试验样品),其尺寸、厚度和数量与对照样品相同，每组待测样品选择一组对照样品作为参照物并有效标识；本专利方法所涉家用电器为器具上或使用说明书中明示具有抗细菌功能、在家庭及类似场合使用的家电产品，主要包括冰箱的内胆、门衬、果菜盒、瓶筐、门把、门封条；空调的进风栅、风向板、接水盒、过滤网(铝、不锈钢等非吸水性材质)；洗衣机的外桶、内桶、进水管以及波轮洗衣机的波轮和滚筒洗衣机的窗衬；消毒柜的塑料内胆、门衬、把手、隔板、面板和门封条；吸尘器的机身外壳、软管组件、吸头(长头、短头、地毯刷；不含集尘袋)；热水器的开关和喷头；微波炉的炉腔、门体、门框、开关和旋钮；冷柜的塑料内胆、门衬、把手和门封条；空气杀菌解毒机的开关、按键、面板和内部塑料部件；杀菌加湿器的开关、按键、面板和内部塑料部件及储水盒；洗碗机的塑料内胆、门衬、门封条、按键(开关)和金属外壳的表面涂层；饮水机的龙头开关、外部接水盒、大顶盖及电源开关等各种按键以及聪明头、聪明座、内部水桶、出水管、出水龙头；遥控器的按键、外壳；(3)样品前处理：实验前将对照样品和抗菌样品在75％的乙醇溶液中浸泡2min(不适用乙醇消毒者可直接用无菌水冲洗)，并在超净工作台上用无菌水充分清洗样品以去除乙醇；自然干燥后将样品待测表面向上放入无菌平皿中备用。3.根据权利要求1所述的家用电器防霉性能的检测方法，其特征在于，所述的设备选型及试剂、培养基配制，按下述步骤进行：(1)通用要求：试验用分析纯试剂及符合GB/T6682-2008规定的三级水(蒸馏水或去离子水)，实验室具备二级生物安全资质，人员具有正规微生物实验室工作经验；(2)仪器设备：二级生物安全柜或洁净等级不低于100的超净工作台；含ATP荧光光度计、专用试管等的ATP生物荧光快速检测系统，ATP荧光光度计波长量程300nm～650nm，ATP浓度检测范围10-11mol/L～10-6mol/L；波长范围400nm～760nm，读数范围(0.0～4.0)Abs的酶标仪；放大倍数40×～400×的生物光学显微镜；(25～30)℃±1℃、(20～95)％RH±2％RH的恒温恒湿培养箱；46℃±1℃的恒温水浴箱；转速≥8000r/min的离心机及配套离心管；转速(500～3000)r/min的旋涡振荡器；(121±2)℃、(103±5)kPa的压力蒸汽灭菌器；-20℃～-80℃的低温冰箱；0℃～10℃的冷藏箱；感量0.001g的电子天平；频率(30～50)kHz的超声波清洗器；精度±0.1(25℃)的pH计；电炉；(3)材料器具：血球计数板及专用盖玻片；1mL、10mL的无菌刻度吸管；0.05mL、0.1mL、0.2mL、1mL、5mL、10mL(计量误差小于1％)的单道可变量程移液枪和无菌移液枪头；孔径不大于0.45μm的针头式过滤器；容量100mL、250mL、500mL的无菌锥形瓶及瓶塞；96孔平底培养板；直径90mm的无菌培养皿；玻璃漏斗；无菌旋塞试管；直径不大于4mm的接种环；L棒；直径5mm的玻璃珠；酒精灯；灭菌镊子；医用胶带；用于生化检测的药棉和纱布；无菌滤纸；的温度计；精度0.01s的秒表；(4)试剂：75％的乙醇溶液；5mg/mL、pH值7.4的MTT(四甲基偶氮唑盐)溶液(0.45μm滤膜过滤除菌，4℃～6℃避光保存15d)；以下试剂分装后121℃高压灭菌30min，5℃～10℃存放30d：85％的生理盐水；N一甲基乙磺酸、吐温80、二辛磺化丁二酸钠任选一种，配制成0.05％的润湿剂水溶液；(5)培养基/液(可用市售培养基/液)：所配培养基/液分装后121℃高压灭菌30min，2℃～8℃存放30d；察氏培养液(霉菌孢子液制备、菌悬液稀释及样品洗脱用)：将2g硝酸钠、1g磷酸氢二钾、0.5g氯化钾、0.5g硫酸镁、0.01g硫酸亚铁、30g蔗糖加热溶解于1000mL含0.05％润湿剂的水溶液中，调节pH至6.0～6.5(25℃)；马铃薯一葡萄糖培养基(霉菌孢子菌种活化及其菌落总数平板计数用):将300g新鲜马铃薯去皮切块，在1000mL水中煮沸20min～30min；过滤取汁，向滤液中加入20g葡萄糖、0.1g氯霉素、20g琼脂后定容至1000mL；(6)ATP荧光反应试剂(或用市售试剂)：除磷酸盐缓冲溶液外，所配ATP荧光反应试剂-20℃～-70℃保存，6个月内使用；稀释缓冲溶液：0.005mol/L且含0.037％蔗糖的磷酸氢二钠溶液，调节pH至7.2±0.2；121℃高压灭菌15min，2℃～8℃存放30d；ATP荧光试剂缓冲溶液：将1117mg三羟甲基氨基甲烷、183mg乙二胺四乙酸二钠、808mg乙酸镁、6.7mg二巯基苏糖醇、25000mg的β-环糊精和925mg葡萄糖加热溶解于250mL水中，调节pH至7.5±0.2；8h内使用；ATP裂解液：将4.6国际单位/ml的三磷酸腺苷双磷酸酶(EC:3.6.1.5)和46国际单位/ml的磷酸腺苷脱氨酶(EC:3.5.4.6或EC:3.5.4.17)、37mg蔗糖、20mg牛血清蛋白溶解于10mL浓度为0.05mol/L的2-吗啉乙磺酸缓冲溶液中，调节pH至6.0±0.5，8h内使用(1mL裂解液在15min内可将沙氏培养液中的ATP浓度降至10-11mol/L以下)；ATP提取液：将45mg三羟甲基氨基甲烷加热溶解于9.8ml水中，与0.2ml浓度为10％的苯扎氯铵溶液混匀后，调节pH至12.0±0.5(霉菌细胞ATP提取效率不低于80％)；ATP荧光试剂：将0.7mg荧光素酶、12.6mg的D-荧光素、56mg牛血清蛋白溶解于30mL的ATP荧光试剂缓冲溶液，混匀后室温静置15min，3h内使用。4.根据权利要求1所述的家用电器防霉性能的检测方法，其特征在于，所述的菌种保藏、活化及孢子悬液制备，按下述步骤进行：(1)试验菌种：黑曲霉ATCC16404；球毛壳霉ATCC6205；产黄青霉ATCC9179(或由国家微生物菌种保藏中心提供并可溯源的其他菌种)；(2)菌种保藏：以无菌操作将霉菌试验菌种接种于马铃薯—葡萄糖培养基斜面并标明日期，28℃～30℃培养至斜面长满霉菌孢子(7d～14d)；3℃～10℃保藏4个月；(3)菌种活化：用接种环刮取保藏菌孢子，接种马铃薯—葡萄糖培养基斜面，28℃～30℃培养7d～14d直至生成大量孢子，制备孢子悬浮液前不得拔出霉菌菌种试管塞，每支试管打开后只供制备一次孢子液，每次均使用新培养的霉菌孢子制备悬液；(4)孢子悬液制备：向菌种试管中加入10mL的无菌水，用接种环轻刮培养基表面的新鲜霉菌孢子，将洗出的孢子原液注入装有15粒玻璃珠和45mL察氏培养液的无菌加塞锥形瓶中，3000r/min振摇试管2min，打散孢子团，混匀孢子液，然后，将覆有无菌药棉或八层纱布的玻璃漏斗置于锥形瓶上，过滤孢子悬浮液除去菌丝和培养基碎片；将滤液移至灭菌离心管中，室温下8000r/min分离处理至少10min，去上清液；再用50mL察氏培养液清洗孢子沉淀物并离心，重复清洗3次后，用察氏培养液稀释离心后的孢子沉淀物，每种试验霉菌均按照上述方法制备孢子悬液，将各试验菌种的孢子液等体积混合；0℃～7℃存放，4d内使用。5.根据权利要求1所述的家用电器防霉性能的检测方法，其特征在于，所述的OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线建立及接种孢子液CB标定，按下述步骤进行：(1)菌液OD值测定：采用血球计数板对混合孢子悬液的孢子总量进行初筛，用察氏培养液对浓度为6.0×108CFU/mL的混合孢子液进行1:10、1:15、1:20系列稀释，并以培养液作为空白对照样液，对酶标仪进行调零校正，然后，将100μL上述不同稀释度的孢子液分别注入96孔平底培养板，每个稀释度做3个复孔；向每孔滴加20μL的MTT溶液，(28±1)℃、(95±2)％RH培养30min后；在560nm～610nm波长范围内扫描最大吸收峰，确定最大吸收波长；测定各孔混和溶液的活菌OD值，不同稀释度孢子悬液的活菌OD值为其3个复孔OD测定值的算术平均值，同时，参照国标GB4789.15-2016规定的方法，对上述混合孢子悬液进行适当稀释后，在(28±1)℃培养3d，并对平皿进行菌落计数，标定其活菌含量CB；(2)OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线建立及接种孢子液CB标定：以不同稀释度孢子悬液的活菌OD值作为纵坐标，以其活菌含量对数值lgCB为横坐标，绘制OD值-lgCB标准曲线；应用最小二乘拟合法推导得出曲线的线性方程式Y＝a0X+b0及相关系数R02，当R02≥0.98、置信水平≥0.95时，按照本专利方法测得的孢子液活菌含量CB有效。6.根据权利要求1所述的家用电器防霉性能的检测方法，其特征在于，所述的ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定，按下述步骤进行：(1)ATP标准系列溶液的确定及其测试样制备：ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10-8mol/L、7.0×10-7mol/L、7.0×10-6mol/L和2.1×10-9mol/L、2.1×10-8mol/L、2.1×10-7mol/L，然后，用灭菌移液枪将0.1mL上述ATP标准溶液分别移至三只无菌试管中，依次滴加0.05mL无菌水和0.35mL生理盐水溶液并混匀，作为一级ATP标准溶液测试样；再将0.1mL一级ATP标准溶液测试样分别移至三支无菌试管中，各滴加0.4mL生理盐水并混匀，作为二级ATP标准溶液测试样；并用灭菌移液枪将0.1mL不同浓度的二级ATP标准溶液测试样分别移至三支仪器专用无菌试管中，作为ATP标准溶液测试平行样；(2)空白本底值校准：用灭菌移液枪将0.1mL含0.05％润湿剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文杰，周波，翁晓伟，鲁学军，靳慧达，
申请(专利权)人：李文杰，
类型：发明
国别省市：河北,13