含有IgG结合肽的固相载体以及IgG的分离方法技术

本发明专利技术的问题在于，提供一种能用于IgG纯化，并且稳定性、例如碱稳定性优异的IgG结合肽等。另外，本发明专利技术的问题在于，提供一种使用上述IgG结合肽来纯化IgG的方法等。具体而言，本发明专利技术涉及含有IgG结合肽的固相载体、含有该固相载体的IgG分离用柱、含有该固相载体或者柱的试剂盒、以及使用该固相载体或者柱的IgG的纯化方法等。

Solid-phase carrier containing IgG-binding peptide and separation method of IgG

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有IgG结合肽的固相载体以及IgG的分离方法
本专利技术涉及含有IgG结合肽的固相载体、含有该固相载体的IgG分离用柱、含有该固相载体或者柱的试剂盒、以及使用该固相载体或者柱的IgG的纯化方法等。
技术介绍
IgG抗体是目前最受关注的生物药品之一。近年来，以IgG抗体为中心的抗体药物利用于医药领域，工业上、制药上的利用中的重要性越来越高。在抗体的纯化中，蛋白A柱起到核心的作用，许多抗体药物的制造商引入了以该柱为中心的纯化系统。然而，该蛋白A柱被指出了若干的问题点。一个是蛋白A混入到纯化抗体中的问题。蛋白A是源自细菌的蛋白质，人体给药后的免疫原性高，还担心内毒素的混入。作为IgG之类的药品的纯化所使用的亲和配体，为了不发生不合适的物质的混入，对作为配体的蛋白A要求高纯化度，这成为提高利用于药品纯化的蛋白A柱的成本的主要原因。因此，期待开发代替蛋白A的新的亲和柱。本专利技术人等此前报告了可以利用由二硫键环化后的含有特定序列的肽配体来纯化IgG(专利文献1)，但本肽配体存在因反复进行碱溶液清洗而使亲和性降低的问题。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2013/027796
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的问题在于，提供一种能用于IgG纯化，并且稳定性、例如碱稳定性优异的IgG结合肽等。另外，本专利技术的问题在于，提供一种使用上述IgG结合肽来纯化IgG的方法等。技术方案本专利技术人发现了如下事实，从而完成了本申请专利技术：通过利用具有特定结构的接头对肽中的半胱氨酸残基中的硫醚基进行交联，肽的稳定性显著改善。因此，本专利技术包含以下方案。(1)一种固相载体，其固定化了具有能够与人IgG结合的特征的肽，所述肽含有下述式I所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-(X2)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3)(I)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，并且，W为色氨酸残基，)并且所述肽的外侧的2个半胱氨酸残基中的硫醚基由选自由下式所示的接头构成的组中的接头连结，[化1]R3SD在此，R为取代或未取代的C1～C6烷基。(2)根据(1)所述的固相载体，其中，所述肽含有下述式II所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3)(II)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，W为色氨酸残基，Xaa3为丙氨酸残基、丝氨酸残基或者苏氨酸残基，并且，Xaa4为酪氨酸残基或者色氨酸残基。)(3)根据(1)或(2)所述的固相载体，其中，所述肽含有下述式III所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-A-Y-H-(Xaa1)-G-E-L-V-W-C-(X1-3)(III)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，A为丙氨酸残基，Y为酪氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，E为谷氨酸残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，并且，W为色氨酸残基。)(4)根据(1)～(3)中任一项所述的固相载体，其中，采用了17个氨基酸残基的情况下的、所述肽的从N末端起第1～3、15～17个各氨基酸残基为：第1个氨基酸残基＝S、G、F或者无；第2个氨基酸残基＝D、G、A、S、P、高半胱氨酸或者无；第3个氨基酸残基＝S、D、T、N、E或者R；第15个氨基酸残基＝S、T或者D；第16个氨基酸残基＝H、G、Y、T、N、D、F、高半胱氨酸或者无；第17个氨基酸残基＝Y、F、H、M或者无。(5)根据(4)所述的固相载体，其中，所述肽由以下1)～14)中的任一种氨基酸序列构成，其中，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，Xaa2为高半胱氨酸，1)DCAYH(Xaa1)GELVWCT(SEQIDNO：1)2)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：2)3)RCAYH(Xaa1)GELVWCS(SEQIDNO：3)4)GPRCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(SEQIDNO：4)5)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：5)6)GDDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：6)7)GPSCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：7)8)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(SEQIDNO：8)9)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTHH(SEQIDNO：9)10)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(SEQIDNO：10)11)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(SEQIDNO：11)12)SDDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(SEQIDNO：12)13)RGNCAYH(Xaa1)GQLVWCTYH(SEQIDNO：13)14)G(Xaa2)DCAYH(Xaa1)GELVWCT(Xaa2)H(SEQIDNO：14)。(6)根据(1)或(2)所述的固相载体，其中，所述肽含有下述式IV所示的、由13个氨基酸残基构成的氨基酸序列，D-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-T(IV)(式中，D为天冬氨酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，W为色氨酸残基，T为苏氨酸残基，Xaa3为丙氨酸残基或者苏氨酸残基，并且，Xaa4为酪氨酸残基或者色氨酸残基。)(7)根据(6)所述的固相载体，其中，所述肽由以下1)～4)中的任一种氨基酸序列构成，其中，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，1)DCTYH(Xaa1)GNLVWCT(SEQIDNO：15)2)DCAYH(Xaa1)GNLVWCT(SEQIDNO：16)3)DCTYH(Xaa1)GELVWCT(SEQIDNO：17)4)DCAWH(Xaa1)GELVWCT(SEQIDNO：18)。(8)一种固相载体，其固定化了具有能够与人IgG结合的特征的肽，所述肽含有下述式V所示的、由13个氨基酸残基构成的氨基酸序列，D-C-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa1)-G-(Xaa5)-L-(Xaa6)-W-C-T(V)(式中，D为天冬氨酸残基，C为半胱氨酸残基，G为甘氨酸残基，L为亮氨酸残基，W为色氨酸残基，T为苏氨酸残基，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种固相载体，其固定化了具有能够与人IgG结合的特征的肽，所述肽含有下述式I所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1‑3)‑C‑(X2)‑H‑(Xaa1)‑G‑(Xaa2)‑L‑V‑W‑C‑(X1‑3)     (I)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，并且，W为色氨酸残基，)并且所述肽的外侧的2个半胱氨酸残基中的硫醚基由选自由下式所示的接头构成的组中的接头连结，[化1]

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.18 JP 2016-2254831.一种固相载体，其固定化了具有能够与人IgG结合的特征的肽，所述肽含有下述式I所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-(X2)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3)(I)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，并且，W为色氨酸残基，)并且所述肽的外侧的2个半胱氨酸残基中的硫醚基由选自由下式所示的接头构成的组中的接头连结，[化1]以及在此，R为取代或未取代的C1～C6烷基。2.根据权利要求1所述的固相载体，其中，所述肽含有下述式II所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3)(II)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，Xaa2为谷氨酸残基或者天冬酰胺残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，W为色氨酸残基，Xaa3为丙氨酸残基、丝氨酸残基或者苏氨酸残基，并且，Xaa4为酪氨酸残基或者色氨酸残基。)3.根据权利要求1或2所述的固相载体，其中，所述肽含有下述式III所示的、由13～17个氨基酸残基构成的氨基酸序列，(X1-3)-C-A-Y-H-(Xaa1)-G-E-L-V-W-C-(X1-3)(III)(式中，X各自独立地为半胱氨酸以外的任意氨基酸残基，C为半胱氨酸残基，A为丙氨酸残基，Y为酪氨酸残基，H为组氨酸残基，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，G为甘氨酸残基，E为谷氨酸残基，L为亮氨酸残基，V为缬氨酸残基，并且，W为色氨酸残基。)4.根据权利要求1至3中任一项所述的固相载体，其中，采用了17个氨基酸残基的情况下的、所述肽的从N末端起第1～3、15～17个各氨基酸残基为：第1个氨基酸残基＝S、G、F或者无；第2个氨基酸残基＝D、G、A、S、P、高半胱氨酸或者无；第3个氨基酸残基＝S、D、T、N、E或者R；第15个氨基酸残基＝S、T或者D；第16个氨基酸残基＝H、G、Y、T、N、D、F、高半胱氨酸或者无；第17个氨基酸残基＝Y、F、H、M或者无。5.根据权利要求4所述的固相载体，其中，所述肽由以下1)～14)中的任一种氨基酸序列构成，其中，Xaa1为精氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基或天冬酰胺残基、或者它们的衍生物，Xaa2为高半胱氨酸，1)DCAYH(Xaa1)GELVWCT(SEQIDNO：1)2)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：2)3)RCAYH(Xaa1)GELVWCS(SEQIDNO：3)4)GPRCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(SEQIDNO：4)5)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：5)6)GDDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：6)7)GPSCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(SEQIDNO：7)8)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(SEQIDNO：8)9)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTHH(SEQIDNO：9)10)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(SEQIDNO：10)11)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTF...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊东祐二，内村诚一，
申请(专利权)人：国立大学法人鹿儿岛大学，株式会社大赛璐，
类型：发明
国别省市：日本,JP