抗GP73单克隆抗体和获得抗GP73单克隆抗体的方法技术

本发明专利技术涉及抗GP73单克隆抗体和获得抗GP73单克隆抗体的方法。本文公开了抗体和使用所述抗体检测样品中高尔基体蛋白73（GP73）和岩藻糖基化GP73的方法。

Anti-GP73 Monoclonal Antibody and the Method of Obtaining Anti-GP73 Monoclonal Antibody

【技术实现步骤摘要】
抗GP73单克隆抗体和获得抗GP73单克隆抗体的方法本申请是国际申请日为2014年3月14日的国际申请PCT/US2014/028725进入中国、申请号为201480024760.4的题为“抗GP73单克隆抗体和获得抗GP73单克隆抗体的方法”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及GP73，特别是抗GP73单克隆抗体，涉及使用至少一种抗体（例如，单克隆抗体）的测定法（诸如免疫测定法），以及相关的氨基酸和核酸序列和载体和包含所述载体的宿主细胞。
技术介绍
高尔基体蛋白73（“GP73”）是73kd驻留高尔基体膜蛋白。GP73是II型跨膜蛋白，并具有单一N-末端跨膜结构域和位于高尔基体的腔表面上的广泛的C端卷曲螺旋结构域。GP73已证明在病毒和非病毒性慢性肝病的肝细胞中上调，这表明该蛋白可能参与肝细胞的细胞疾病应答。另外，GP73水平在肝癌患者中比在健康个体中高。已在四分之三的来自肝细胞癌（HCC）患者的分泌的GP73中发现岩藻糖基化。早期的研究表明，GP73和岩藻糖基化的GP73对肝脏疾病的早期诊断可能是比当前标志物诸如α-甲胎蛋白（AFP）更可靠的生物标志物，其具有产生假阳性结果的缺点，因为AFP在很多情况下产生，包括其它肝脏疾病。此外，AFP不存在于所有的HCC患者中。此外，先前已知的抗GP73抗体，14H4-23单克隆抗体（由DrexelUniversitySchoolofMedicine的AnandMehta博士提供），对于GP73分子上的岩藻糖糖部分存在或不存在是不敏感的。鉴于上述情况，本公开的一个目标是提供抗GP73单克隆抗体，其对于GP73分子上的岩藻糖糖部分存在或不存在是敏感的，并结合GP73的岩藻糖基化形式，或者可选地，对于GP73分子上的岩藻糖糖部分存在或不存在是不敏感的，但具有足以用在检测GP73和/或岩藻糖基化的GP73的免疫测定法中的结合亲和力。这个和其它的目的和优点，以及创造性特征，根据本文所提供的详细描述将将变得显而易见。
技术实现思路
本专利技术涉及能够结合VSQENPEMEGPERDQLVIPDGQEEEQEAAGEGR（hGP73307-339）（SEQIDNO：101）的氨基酸序列中表位的分离的抗体或其抗体片段。所述分离的抗体或抗体片段选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。分离的抗体或抗体片段是人的。所述分离的抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及能够结合EQVVEDRPVGGR(hGP73276-287)(SEQIDNO:102)的氨基酸序列中表位的分离的抗体或其抗体片段。所述分离的抗体或抗体片段选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。分离的抗体或抗体是人的。所述分离的抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及能够结合LRGEDDYNMDENEAESETDK(hGP73344-363)(SEQIDNO:103)的氨基酸序列中表位的分离的抗体或其抗体片段。所述抗体选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。所述抗体或抗体片段是人的。所述抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及能够结合ELKKNEFQGELEKQREQLDKIQSSHNFQLESVNK(hGP7363-96)(SEQIDNO:104)的氨基酸序列中表位的分离的抗体或其抗体片段。所述抗体选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。所述抗体或抗体片段是人的。所述抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及分离的抗体或其抗体片段，其免疫特异性结合高尔基体蛋白73（“GP73”），其中所述抗体或抗体片段对GP73的结合对于GP73的岩藻糖基化是敏感的。所述抗体选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。所述抗体或抗体片段是人的。所述抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及分离的抗体或其抗体片段，其免疫特异性结合高尔基体蛋白73（“GP73”），其中所述抗体或抗体片段对GP73的结合对于GP73的岩藻糖基化是不敏感的。所述抗体选自人类抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、TVD、Fab'、双特异性抗体、F（ab'）2和Fv。所述抗体或抗体片段是人的。所述抗体或抗体片段包括选自人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgG1恒定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。本专利技术涉及结合高尔基体蛋白73（“GP73”）的分离的抗体或其抗体片段，其中所述抗体包含选自下列的结构域或区域：（a）包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的可变重结构域区，（b）包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的可变轻结构域区，（c）包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的可变重结构域区，（d）包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的可变轻结构域区，（e）包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的可变重结构域区，（f）包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的可变轻结构域区，（g）包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的可变重结构域区，（h）包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的可变轻结构域区，（i）包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.至少一种捕获抗体和至少一种检测抗体在制备用于确定测试样品中GP73浓度的试剂盒中的用途，包括：(a) 使所述测试样品与至少一种捕获抗体接触，所述捕获抗体包含：(i)包含包括SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR1、包括SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR2和包括SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR3的可变重链，和(ii)包含包括SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR1、包括SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR2和包括SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR3的可变轻链，所述捕获抗体结合GP73上的表位以形成捕获抗体‑GP73抗原复合物；(b) 使所述捕获抗体‑GP73抗原复合物与至少一种包含可检测标记物的检测抗体接触，其中所述检测抗体包含：(i)包含包括SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1、包括SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2和包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3的可变重链，和(ii)包含包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR1、包括SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR2和包括SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR3的可变轻链，所述检测抗体结合GP73上不被捕获抗体结合的表位并形成捕获抗体‑GP73抗原‑检测抗体复合物；和(c) 基于（b）中形成的捕获抗体‑GP73抗原‑检测抗体复合物中的可检测标记物产生的信号确定测试样品中的GP73浓度。...

【技术特征摘要】
2013.03.15 US 13/8362291.至少一种捕获抗体和至少一种检测抗体在制备用于确定测试样品中GP73浓度的试剂盒中的用途，包括：(a)使所述测试样品与至少一种捕获抗体接触，所述捕获抗体包含：(i)包含包括SEQIDNO:42的氨基酸序列的CDR1、包括SEQIDNO:43的氨基酸序列的CDR2和包括SEQIDNO:44的氨基酸序列的CDR3的可变重链，和(ii)包含包括SEQIDNO:46的氨基酸序列的CDR1、包括SEQIDNO:47的氨基酸序列的CDR2和包括SEQIDNO:48的氨基酸序列的CDR3的可变轻链，所述捕获抗体结合GP73上的表位以形成捕获抗体-GP73抗原复合物；(b)使所述捕获抗体-GP73抗原复合物与至少一种包含可检测标记物的检测抗体接触，其中所述检测抗体包含：(i)包含包括SEQIDNO:26的氨基酸序列的CDR1、包括SEQIDNO:27的氨基酸序列的CDR2和包括SEQIDNO:28的氨基酸序列的CDR3的可变重链，和(ii)包含包括SEQIDNO:30的氨基酸序列的CDR1、包括SEQIDNO:31的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：B屠，RN齐曼，BC蒂曼，PM亨肯，CS拉姆齐，CJ斯特罗贝尔，DJ豪克斯沃思，LG伯肯迈尔，C赵，SE布罗菲，BL道尔，AS米尔霍夫，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US