鉴别细菌感染的方法技术

鉴别细菌感染的方法。本发明专利技术涉及基于测定样品中的一种或多种细胞和/或体液标志物，用于鉴别来自腹膜样品的细菌感染性质的方法，具体而言，所述细菌感染是革兰氏‑阴性还是革兰氏‑阳性感染。

Methods for identifying bacterial infections

【技术实现步骤摘要】
鉴别细菌感染的方法专利
本申请涉及至少一种用于鉴别来自腹膜样品的细菌感染性质的方法，具体而言，所述感染是否由革兰氏-阳性和/或革兰氏-阴性细菌引起。更具体地，所述方法涉及鉴别所述样品中一种或多种细胞和/或体液标志物的相对量。进一步，所述专利技术涉及治疗方法，其涉及所述方法的使用，理想地允许在选择治疗方案和/或监测成功治疗效果中做出知情决策。专利技术背景细菌感染依然是世界各地的发病率和死亡率的主要原因，尤其由于耐抗生素的病原菌的空前蔓延。而且，标准诊断的不良表现阻碍有效的感染控制，并且因此关于有效治疗的使用作出不恰当的选择。这种令人恐慌的情形正引起对临床实践，公共卫生和生物医学研究的巨大挑战。疑似感染的当前诊断和治疗主要取决于可能的微生物病原体的阳性鉴定，该概念在一个多世纪前由RobertKoch引入但从那以后没有被改变。细菌感染的致病病原体的阳性鉴定不仅对指导和改善关于抗生素治疗选择的患者管理是关键性的，而且它提供给我们关于背后的炎症机制以及如何操作这些机制以帮助解决感染的重要线索。目前，检测和定性感染微生物需要经典的微生物学培养技术、基于光谱的分析和/或高度复杂的核苷酸鉴定方法。Mohanetal.2011描述了核苷酸检测和免疫分析检测的组合使用，例如，“针对在37℃杂交所优化的寡核苷酸探针便于与免疫分析整合”来诊断尿路感染[5]。Podsiadlyetal.2005描述了检测特异性肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)IgM、IgG和IgA血清抗体的水平以诊断尿路感染[6]。这些后面的分析被认为是不可靠的。而且，与对常规培养技术依赖相关的固有延迟明显地阻碍病原体鉴定。治疗医生获得结果以能够特异性的和靶向的治疗通常需要两天或甚至更久。在一些疾病中，如肺结核，这需要高达两个月。更重要地，在很多情况下，通过传统的方法不能培养细菌，这意味着患者临床症状背后的原因依然未知。通常，当明显的临床症状出现时，感染只是表面的。有效的和特异的治疗干预取决于致病微生物的早期检测和鉴定。照惯例，基于症状、起初的临床发现和炎症的其他基本实验室标志物(如C-反应蛋白)确定患者处理。该方法通常是欠佳的因为太笼统并且缺乏特异性。通过微生物鉴定和抗生素敏感性试验通常仅获得增加的特异性，并且这可伴随感染最佳处理的延迟。使用广谱抗生素以覆盖多种可能的发病原因的趋势促成其他严重问题如艰难梭菌(C.difficile)感染，以及细菌耐药性的发展。因此，存在明显的临床需求以实现感染的较早和较好的检测和定性以1)改善患者结果；2)改善特异性抗感染药的使用；以及3)降低抗菌素耐药性和其他严重感染的发展。能够实现这种效果的技术会提高患者体验，并且确保患者处理的更持久更经济有效的方法。腹膜透析(PD)为用于具有严重慢性肾脏疾病的患者的治疗。疗法涉及经Tenckhoff管将专门的透析液引入腹腔，目标是通过流体产生的透析梯度去除累积在肾脏上的难以扩散的毒素和水。两个过程同时地发生在半渗透的腹膜上。富含葡萄糖的透析液的感染导致腹膜炎，为PD的主要并发症，其具有明显的发病率和死亡率牵连。腹膜炎可具有对短期和长期患者健康的不利影响。在短期内，严重的腹膜炎发作可导致需要立即去除Tenckhoff管，并且，因此，治疗失败。在长期内，复发或严重的腹膜炎可导致腹膜增厚(纤维化)和膜通透性/功能的明显改变，其导致治疗失败。腹膜炎发作的早期确认加上快速检查、诊断和有效的治疗对成功的结果是必要的。由于相对低的细菌数量和培养它们所需的时长(通常很多天)，使用标准技术鉴别致病微生物可能是困难的。这导致“培养阴性”腹膜炎的现象，即，所有临床和实验室参数确认诊断结果，但是在0-50％的情况下从没有鉴定到微生物[3]。因此，考虑到微生物确认中的延迟，所有患者开始双重抗生素治疗以涵盖革兰氏-阳性和革兰氏-阴性细菌。只有当(如果)鉴别到微生物，改进抗生素方案。如果PD流体样本依然是培养阴性的，然后需要患者经受延长的双重、广谱的抗生素治疗。如上所述，尽管鉴别生物流体中的微生物的分子试验是可用的，它们通常遭受特异性的缺乏、不可接受的假阳性高比率、和由于样品的污染或无症状携带者的非病原种类的频繁鉴定。由此可见，迫切地需要指导疗法的医疗点方法，尤其是在微生物种类或毒性是结果的决定因素的情况下。本公开涉及快速诊断腹膜疾病中感染的方法。在本研究中，我们在呈现急性腹膜炎的第一天对PD患者进行详细的免疫和微生物分析。该技术的关键是发现复杂的细胞和体液免疫应答的诱导紧随免疫系统对感染原的暴露。意外地，这种应答在暴露的几个小时内时是显而易见的，并且在呈现有特性但不是诊断的“浑浊包”的时候可在具有急性临床症状的腹膜透析患者的排出物中检测到这种应答。按照这样的方法，这些结果对具有疑似感染的患者的鉴别诊断具有深远影响，并且可通过快速的基于生物标志物的诊断，较好地预测风险建模，和改善的治疗靶向及其最终功效来帮助指导患者处理。专利技术概述根据本专利技术的第一方面，提供用于鉴别腹膜样品中的革兰氏-阴性细菌感染的方法，所述方法包括：(a)检验来自个体的所述腹膜样品以测定所述样品的总的T细胞群体内的Vδ2+T细胞的量，并且(b)当总的T细胞群体内的Vδ2+T细胞的量相对于来自不具有革兰氏-阴性细菌感染的个体的对照样品中总的T细胞群体内的Vδ2+T细胞的量是增加的时；(c)断定腹膜样品取自的个体具有革兰氏-阴性细菌感染。本领域技术人员应了解，本文提及的革兰氏-阴性细菌感染涉及在革兰氏染色方案中不能保留结晶紫染料的细菌的感染。革兰氏-阴性细菌的实例包括，但是不限于，不动杆菌属(Acinetobacter)、气单胞菌属(Aeromonas)、拟杆菌属巴尔通氏体属(Bartonella)、博代氏杆菌属(Bordetella)、布鲁氏菌属(Brucella)、伯克氏菌属(Burkholderia)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、弗朗西斯氏菌属(Francisella)、梭菌属(Fusobacterium)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、哈夫尼菌属(Hafnia)、螺杆菌属(Helicobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、军团菌属(Legionella)、莫拉氏菌属(Moraxella)、摩根氏菌属(Morganella)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、泛菌属(Pantoea)、发光菌属(Photobacterium)、变形杆菌属(Proteus)、普罗威登斯菌属(Providencia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏杆菌属(Shigella)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、韦荣球菌属(Veillonella)、弧菌属(Vibrio)、耶尔森氏菌属(Yersinia)。本文提及的腹膜样品指来自腹腔的流体样品，其包括腹腔流出物，通常来自PD患者，或从腹腔内衬膜(腹膜)去除的组织。本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于非诊断目的的鉴别腹膜样品中革兰氏‑阳性细菌感染的方法，所述方法包括：(a)检验来自个体的所述腹膜样品以测定CXCL10的量和总的CD4

【技术特征摘要】
2013.03.14 GB 1304626.31.用于非诊断目的的鉴别腹膜样品中革兰氏-阳性细菌感染的方法，所述方法包括：(a)检验来自个体的所述腹膜样品以测定CXCL10的量和总的CD4+T细胞数的量；并且(b)当所述CXCL10的量相对于来自不具有革兰氏-阳性细菌感染的个体的对照样品中的CXCL10的量是增加的，以及所述总的CD4+T细胞数的量相对于来自不具有革兰氏-阳性细菌感染的个体的对照样品中的CD4+T细胞数的量是增加的时；(c)断定所述腹膜样品具有革兰氏-阳性细菌感染。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述腹膜样品为来自腹膜空间或来自正经受腹膜透析治疗的个体的腹膜透析液的流体，或来自腹膜的组织。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中进行至少一种另外的研究以测定腹膜样品中以下任一项或多项相对于所述对照的量：(d)总的T细胞群体内的Vδ2+T细胞；或(e)IL-22；并且当d)总的T细胞群体内的Vδ2+T细胞的量相对于所述对照中的相同项的量是降低的，以及IL-22的量相对于所述对照中的相同项的量是增加的时：断定所述腹膜样品具有革兰氏-阳性细菌感染。4.根据权利要求3所述的方法，其中使用步骤(a)-(c)和选自步骤(d)-(e)中的任一项或多项或其任何组合的步骤，进行所述方法。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中进行进一步的方法以用于鉴别腹膜样品中的革兰氏-阴性...

【专利技术属性】
技术研发人员：马蒂亚斯·艾伯尔，尼古拉斯·拖普雷，林展宇，
申请(专利权)人：加的夫大学学院咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB