【技术实现步骤摘要】
改进的向导RNA
本专利技术涉及基因编辑领域。具体而言，本专利技术涉及用于基因编辑的改进的向导RNA，以及利用所述改进的向导RNA进行基因编辑的方法和系统。
技术介绍
规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)-相关(Cas)系统是各种细菌和古细菌中的适应性免疫系统(Barrangou等，2007；TernsandTerns，2011)。最常用的化脓链球菌(Streptococcuspyogenes)II型CRISPR-Cas9系统，由Cas9核酸酶和两个短的RNA(CRISPRRNA(crRNA)和反式激活的CRISPRRNA(tracrRNA))组成。tracrRNA和crRNA可以通过任意的茎环连接形成单向导RNA(sgRNA)，其长度大约100个核苷酸(Jinek等，2012)。在sgRNA的指导下，由Cas9蛋白和sgRNA组成的复合物可以在特定的基因组基因座产生DNA双链断裂(DSB)。CRISPR-Cas9系统已被应用于编辑多种生物的基因组(Cong等，2013；Gratz等，2013；Hwang等，2013；Jiang等，2013；Mali等，2013...
【技术保护点】
1.一种分离的向导RNA(gRNA)，其中所述gRNA：1)包含5’帽结构和3’多聚腺苷酸尾结构；或2)通过体外转录产生，且所述体外转录产生的gRNA的5’末端磷酸基团被去除。
【技术特征摘要】
1.一种分离的向导RNA(gRNA)，其中所述gRNA：1)包含5’帽结构和3’多聚腺苷酸尾结构；或2)通过体外转录产生，且所述体外转录产生的gRNA的5’末端磷酸基团被去除。2.权利要求1分离的gRNA，其中相对于不包含5’帽结构和3’多聚腺苷酸尾结构的gRNA，所述包含5’帽结构和3’多聚腺苷酸尾结构的gRNA在细胞中具有更长的半衰期。3.权利要求1分离的gRNA，其中相对于具有5’末端磷酸基团的gRNA，所述5’末端磷酸基团被去除的gRNA具有降低的细胞毒性。4.权利要求1分离的gRNA，其中所述gRNA是sgRNA。5.一种产生gRNA例如sgRNA的方法，所述方法包括：步骤a)，通过体外转录或化学合成产生gRNA；和步骤b)，其包括b1)给所述gRNA添加5’帽结构和3’多聚腺苷酸尾结构，或b2)去除所述体外转录产生的gRNA的5’末端磷酸基团。6.权利要求5的方法，其中步骤b2)中通过磷酸酶处理去除所述体外转录产生的gRNA的5’末端磷酸基团。7.权利要求6的方法，其中所述磷酸酶是碱性磷酸酶，例如细菌碱性磷酸酶(BAP)、虾碱性磷酸酶(SAP)、小牛肠碱性磷酸酶(CIAP)、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)或分泌型胎盘碱性磷酸酶(SEAP)。8.一种用于修饰细胞基因组中至少一个靶序列的基因编辑系统，其包含：1)CRISPR效应蛋白，或包含编码CRISPR效应蛋白的核苷酸序列的表达构建体；和2)权利要求1-4中任一项的gRNA或通过权利要求5-7中任一项的方法产生的gRNA，其中所述gRNA设计为靶向所述靶序列。9.一种产生经修饰的细胞的方法，所述细胞基因组中至少一个靶序列被修饰，所述方法包括将权利要求8的基因编辑系统导入所述细胞。10.权利要求9的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：王皓毅，穆伟，唐娜，程晨，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。