【技术实现步骤摘要】
猪NR1H3基因过表达载体质粒的构建方法及其表达水平的检测
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及猪NR1H3基因过表达载体质粒的构建方法及其表达水平的检测方法。
技术介绍
肝X受体α(LXRα/NR1H3)是LXR核超受体家族的成员，作为转录调控因子，其活性受到胆固醇降解产物氧化型胆固醇的调节。NR1H3的生理功能主要是维持胆固醇水平、碳水化合物代谢、脂蛋白代谢和脂肪合成的稳态。LXR具有调节组织脂质生物合成的作用，LXRα影响动物的脂肪沉积和脂肪细胞脂质代谢，是肌肉中脂肪生成的正调节因子。从结构上看，LXRs包含5个结构域，即氨基端的配体非依赖性转录活化结构域、DNA结合结构域、铰链区、配体结合域和羧基端的配体依赖的转录活化域。DNA结合结构域包含一个高度保守的锌指结构，该结构域与靶基因特异DNA结合，启动靶基因的转录，调控靶基因表达；铰链区可保持受体蛋白的稳定性，使受体在二聚化的同时与DNA结合，调控靶基因的表达。目前对NR1H3基因的研究大多集中在人和鼠上，而关于猪NR1H3基因的研究报道很少。猪NR1H3基因表达载体的高效构建和猪NR1H3基因表达水...
【技术保护点】
1.用于构建猪NR1H3基因过表达载体质粒的引物，其特征在于，包括引物TY‑NR1H3‑F和TY‑NR1H3‑R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑2所示。
【技术特征摘要】
1.用于构建猪NR1H3基因过表达载体质粒的引物，其特征在于，包括引物TY-NR1H3-F和TY-NR1H3-R，其核苷酸序列分别如SEQIDNO:1-2所示。2.一种构建猪NR1H3基因过表达载体质粒的方法，其特征在于，利用引物TY-NR1H3-F和TY-NR1H3-RPCR扩增NR1H3基因，利用同源重组方法将NR1H3基因与pIRES2-EGFP-3×flag连接；所述引物TY-NR1H3-F和TY-NR1H3-R的核苷酸序列分别如SEQIDNO:1-2所示。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取猪组织的总RNA，反转录成cDNA；(2)以步骤(1)的cDNA为模板，利用引物TY-NR1H3-F和TY-NR1H3-RPCR扩增NR1H3基因；(3)利用限制性内切酶NheI和EcoRI双酶切pIRES2-EGFP-3×flag；(4)将所述NR1H3基因与经双酶切的pIRES2-EGFP-3×flag进行同源重组连接，构建猪NR1H3基因过表达载体质粒；优选地，所述PCR扩增的反应程序如下：95℃预变性5min，95℃变性15s，63℃退火15s，72℃延伸1min，35个循环，72℃延伸10min。4.猪NR1H3基因表达水平的检测引物，其特征在于，包括引物N2F和N2R，其核苷酸序列分别如SEQIDNO:3-4所示。5....
【专利技术属性】
技术研发人员：曹果清，高鹏飞，张雪莲，郭晓红，秦本源，刘敏，王媛媛，张万锋，王海珍，宋鹏康，蔡春波，李步高，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。