一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281极其用途。所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQ ID NO:1所示。具有高耐盐性的用途。

AlgL 1281, a multifunctional seaweed polysaccharide lyase with high salt tolerance, and its application

【技术实现步骤摘要】
一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途
本专利技术涉及基因序列领域，尤其涉及一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途。
技术介绍
海藻在海洋植物中数量和品种最多，且多糖含量占干质量的50％以上，成为目前最具有前景的一类活性物质。海藻多糖是由多个相同或不同的单糖基通过糖苷键相连而成的高分子碳水化合物，具有很高的应用价值，如琼脂、卡拉胶、褐藻酸盐已在工业上长期使用，在食品和日用化工产业、生物材料产业和生物制药产业等多种行业也有着广泛应用。海藻寡糖是通过降解海藻胶及其衍生物生成的聚合度小于20以下的寡糖系列。这系列寡糖因具有低分子量、高稳定性以及与水可共溶等较好的性质，且这些寡糖还具有很多的生物活性如：调节免疫与抗肿瘤、抗凝血、降血糖和血脂、抗自由基氧化、抗炎症、抗病毒引起了广大食品科学家和医药生物学家的密切关注。降解海藻多糖方法主要有化学方法、物理方法和酶法。相对于化学法和物理法降解，酶法降解反应条件温和，易于控制，可以最大程度地保护反应底物的活性基团不会在降解过程中受到破坏，产物活性较高。自然界中广泛存在着海藻裂解酶，水体系统中的微生物、软体动物和藻类，陆地系统中的微生物以及病毒等都有海藻多糖裂解酶的存在。目前已有不少海藻胶裂解酶的基因得到克隆和测序，并构建出多种重组海藻多糖裂解酶基因工程菌，但重组海藻多糖裂解酶基因工程表达水平较低，限制了酶的应用。因此，利用基因工程手段，进一步获得具有优良特性的海藻多糖裂解酶仍是本
的当务之急。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281。为实现上述目的，本专利技术提供一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281，其特征在于，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQIDNO:1所示。进一步，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本专利技术还提供一种含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的重组载体，其特征在于，含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列；优选的，所述重载载体为所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281与pET-28a进行重组得到的重组载体。本专利技术还提供一种所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的重组细胞，其特征在于，含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列；优选的，所述重载细胞为含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281与载体重组得到的重组载体再转化得到的重组细胞。本专利技术还提供一种用于扩增所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL128的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如SEQIDNO:3和4所示。本专利技术还保护所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281对金属具有耐受的用途。本专利技术还保护所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281具有高耐盐性的用途。本专利技术通过设计特异性引物，海藻多糖裂解酶酶AlgL1281的DNA序列，该基因编码区长1089bp，编码362个氨基酸，其中1-27个氨基酸为信号肽，理论分子量为40kDa。大肠杆菌重组表达获得的AlgL1281具有较高酶活性和热稳定性，另外特别重要的是，该酶通过添加盐离子可以极大的增强其活性，当Na+浓度为0.3mol/L及以上时，促进海藻多糖裂解酶酶AlgL1281达到最大酶活力的500％以上，K+浓度为0.3mol/L时促进AlgL1281达到最大酶活力的300％左右，由于海水的盐离子浓度本身就比较高，这对来源海洋的海藻类多糖的降解无疑具有极大的应用价值。附图说明图1为本专利技术海藻多糖裂解酶AlgL1281的蛋白质三维结构模型图；图2为海藻多糖裂解酶AlgL128基因重组表达纯化的SDS-PAGE图谱；图3为本专利技术海藻多糖裂解酶AlgL1281具有多功能降解图示；图4为本专利技术温度对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；图5为本专利技术温度对海藻多糖裂解酶AlgL1281稳定性影响曲线图；图6为本专利技术pH对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；图7为本专利技术pH对海藻多糖裂解酶AlgL1281稳定性影响曲线图；图8为本专利技术金属离子对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；图9为本专利技术Na+对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；图10为本专利技术K+对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。生物材料来源：PseudoalteromonascarrageenovoraASY5，中文名称为食鹿角菜假交替单胞菌，分离自厦门红树林土壤腐叶样品，来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，保藏编号23819。实施例1：具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281基因的获得将PseudoalteromonascarrageenovoraASY5接种至人工海水培养基中，在25℃，180r/min的条件下，震荡培养至OD600为1-1.5，取培养菌液1mL，利用东盛生物细菌基因组快速提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)提取PseudoalteromonascarrageenovoraASY5菌株基因组DNA。人工海水培养基：牛肉浸膏10g、胰蛋白胨10g、蒸馏水250mL、人工海水750mL(NaCl37.51g、KCl1.03g、CaCl21.61g、MgCl2·6H2O6.4g、NaHCO30.15g、MgSO4·7H2O4.67g、蒸馏水1000mL)。牛肉浸膏和胰蛋白胨在蒸馏水中溶解后用NaOH调pH至7.8，加热煮沸10min，冷却后再次加NaOH调pH至7.3，然后和人工海水混合，121℃灭菌20min。固体培养基再添加20g琼脂。以得到的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，引物序列如下：正向引物AlgL1281-F(SEQIDNO：3)：5’-CGCGGATCCAATACTAAACTTGAAAATAA-3’；下划线标注的是限制性内切酶位点BamHI；反向引物AlgL1281-R(SEQIDNO：4)：5’-CCGGAATTCCGGCTTAGTTGATGGGCTTA-3’；下划线标注的是限制性内切酶EcoRI位点。所用高保真DNA聚合酶PrimeSTARHS购自中国大连宝生物公司，所用PCR反应试剂按照该公司提供的产品说明进行操作。PCR反应系统为：基因组DNA(0.679mg/ml)：0.5μL；dNTP：4μL；AlgL1281-F(10μmol/L)：1μL；AlgL1281-R(10μmol/L)：1μL；高保真DNA聚合酶PrimeSTARHS：0.5μL；5xBuffer:10μL；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281，其特征在于，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281，其特征在于，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281，其特征在于，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。3.一种含有权利要求1所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的重组载体，其特征在于，含有权利要求1所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列；优选的，所述重载载体为含有权利要求1所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281与pET-28a进行重组得到的重组载体。4.一种含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖安风，焦超，张永辉，杨秋明，翁惠芬，肖琼，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35