通过位置同位素辨别进行的有氧糖酵解确定制造技术

提供了采用经同位素标记葡萄糖的检测有氧糖酵解的方法。

Determination of aerobic glycolysis by location isotope identification

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过位置同位素辨别进行的有氧糖酵解确定相关申请的交叉引用本申请要求2016年6月20日提交的美国申请序列号62/352,165的申请日的权益，其公开内容通过引用并入本文。政府支持本专利技术在分别由国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)和国家科学基金会(NationalScienceFoundation)授予的1R01CA157012-01A1、以及IOS-1400818和IOS-1238812的政府支持下完成。政府在本专利技术中享有某些权利。
技术介绍
虽然正常细胞通过氧化磷酸化由葡萄糖产生ATP，但已知大多数癌细胞即使在有氧条件下也通过将葡萄糖转化为乳酸(lactate)来产生ATP(DeBerardinis等，2008)。近一个世纪以前，德国科学家OttoWarburg发现了这一现象，其被称为有氧糖酵解或瓦博格效应(Warburgeffect)(Warburg，1954)。然而，其直至正电子发射断层显像(positronemissiontomography，PET)扫描技术的开发才被认识到。该成像技术使用经放射性标记的葡萄糖类似物氟脱氧葡萄糖(fluor本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.在包含细胞的样品中检测有氧糖酵解的体外方法，其包括：a)提供包含从哺乳动物细胞获得之样品和经同位素标记葡萄糖的混合物；b)使用液相色谱‑质谱(LC‑MS)在所述混合物中测量经同位素标记葡萄糖向经同位素标记乳酸的转化；以及c)基于所述混合物中所述经标记乳酸的存在或量或者所述经标记葡萄糖向所述经标记乳酸的转化率来确定所述样品中所述细胞中的葡萄糖摄取、乳酸浓度或有氧糖酵解率。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.20 US 62/352,1651.在包含细胞的样品中检测有氧糖酵解的体外方法，其包括：a)提供包含从哺乳动物细胞获得之样品和经同位素标记葡萄糖的混合物；b)使用液相色谱-质谱(LC-MS)在所述混合物中测量经同位素标记葡萄糖向经同位素标记乳酸的转化；以及c)基于所述混合物中所述经标记乳酸的存在或量或者所述经标记葡萄糖向所述经标记乳酸的转化率来确定所述样品中所述细胞中的葡萄糖摄取、乳酸浓度或有氧糖酵解率。2.权利要求1所述的方法，其中所述标记是13C或氘(2H)。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述经标记葡萄糖是[1-13C]葡萄糖、[1，2-13C2]葡萄糖、[13C6]葡萄糖或经6，6-氘标记葡萄糖。4.权利要求1所述的方法，其中确定[3-13C]乳酸的存在或量、[1-13C]葡萄糖向[3-13C]乳酸的转化率或经氘标记葡萄糖向经氘标记乳酸的转化率。5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述样品是生理样品。6.权利要求5所述的方法，其中所述样品是活检物。7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述细胞是乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞或卵巢癌细胞。8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中确定葡萄糖摄取。9.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中确定乳酸浓度。10.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中确定有氧糖酵解率。11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中随时间测量葡萄糖摄取、乳酸浓度或有氧糖酵解率。12.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中将所述混合物中的葡萄糖摄取、乳酸浓度或有氧糖酵解率与具有对照细胞或无细胞的相应混合物进行比较。13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞来自患有DCIS、侵袭前乳腺癌或转移性乳腺癌的女性。14.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞来自患有惰性癌症、侵袭前癌症或转移性癌症的哺乳动物。15.检测受试化合物改变有氧糖酵解的效力的体外方法，其包括：a)使受试化合物、包含哺乳动物细胞的样品和一定量的经13C或氘标记葡萄糖相接触以提供混合物；以及b)使用LC-MS相对于对照来测量所述混合物中所述经标记葡萄糖向经13C或氘标记乳酸的转化或转化率，从而确定受试化合物改变有氧糖酵解的效力。16.权利要求15所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。17.权利要求15或16所述的方法，其中所述样品是活检物或生理流体样品。18.权利要求15、16或17所述的方法，其中所述受试化合物抑制所述经标记葡萄糖向经13C或氘标记乳酸的转化或转化率。19.检测基因突变对有氧糖酵解的作用的体外方法，其包括：a)使具有选定突变的哺乳动物细胞与一定量的经13C或氘标记葡萄相糖接触；b)使用LC-MS来测量所述细胞中所述经13C或氘标记葡萄糖向经13C或氘标记乳酸的转化；以及c)将转化的乳酸的量与不具有所述选定突变的相应细胞中转化的乳酸的量进行比较，所述相应细胞与所述一定量的所述经13C或氘标记葡萄糖相接触。20.检测哺乳动物癌细胞的转移潜能的方法，其包括：a)提供包含含有癌细胞之样品和一定量经13C或氘标记葡萄糖的混合物；b)使用LC-MS在所述混合物中测量所述经13C或氘标记葡萄糖向经13C或氘标记乳酸的转化；以及c)基于所述混合物中所述经13C或氘标记乳酸的存在或量或者所述经13C或氘标记葡萄糖向经13C或氘标记乳酸的转化率来确定所述细胞是否具有提高的转移潜能。21.权利要求20所述的方法，其中所述癌细胞是乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞或卵巢癌细胞。22.权利要求21或22所述的方法，其中将所述混合物中[3-13C]乳酸的存在或量或者[1-13C]葡萄糖向[3-13C]乳酸的转化率与相应非癌细胞中[3-13C]乳酸的存在或量或者[1-13C]葡萄糖向[3-13C]乳酸的转化率进行比较。23.权利要求20、21或22所述的方法，其中所述经标记葡萄糖是[1-13C]葡萄糖、[1，2-13C2]葡萄糖、[13C6]葡萄糖或经6，6-氘...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨大庆，阿德里安·赫格曼，达娜·弗罗因德，玛戈特·克利里，
申请(专利权)人：明尼苏达大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US