巫山淫羊藿及其易混物种的EST-SSR分子鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种巫山淫羊藿及其易混物种的EST‑SSR分子鉴定方法，属于分子生物学技术领域的分子标记与药材鉴定。鉴定巫山淫羊藿及其易混物种的EST‑SSR引物组包括10对EST‑SSR核心引物和通用M13引物：SEQ ID NO：1、2……20、21。鉴定方法包括：①利用CTAB法提取样品总DNA；②以待测定样品总DNA为模板进行PCR扩增；③分析PCR扩增产物；④构建系统发育树。其应用是将巫山淫羊藿及其易混物种进行鉴别。本发明专利技术提供的10个SSR分子标记多态性好、特异性强、扩增结果稳定，能够实现对巫山淫羊藿及其易混物种进行快速准确鉴定，为淫羊藿药材质量标准的提升提供技术支持，有利于淫羊藿药材的开发利用。

EST-SSR Molecular Identification of Epimedium wushanense and Its Mixed Species

【技术实现步骤摘要】
巫山淫羊藿及其易混物种的EST-SSR分子鉴定方法
本专利技术属于分子生物学
的分子标记与药材鉴定，具体涉及一种巫山淫羊藿（E.wushanense）及其易混物种金城山淫羊藿（E.jinchengshanense）、镇坪淫羊藿（E.ilicifolium）、拟巫山淫羊藿（E.pseudowushanense）、黔北淫羊藿（E.borealiguizhouense）的EST-SSR分子鉴定方法。
技术介绍
中药材淫羊藿为小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属（Epimedium）植物的干燥叶。淫羊藿属全世界现已知约有62种，我国约有52种（Stearn,WT.TheGenusEpimediumandOtherHerbaceousBerberidaceae.Portland:TimberPress,2002.；Ying,TS.,Boufford,DE.,Brach,AR.EpimediumL.St.Louis:SciencePress,MissouriBotanicalGardenPress,2011,787-799.)，各版《中国药典》均收录了5种淫羊藿，包括淫羊藿（Epi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定巫山淫羊藿及其易混物种的EST‑SSR引物组，其特征在于：包括10对EST‑SSR核心引物和通用M13引物：SEQ ID NO：1、2……20、21。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定巫山淫羊藿及其易混物种的EST-SSR引物组，其特征在于：包括10对EST-SSR核心引物和通用M13引物：SEQIDNO：1、2……20、21。2.巫山淫羊藿及其易混物种的EST-SSR分子鉴定方法，其特征在于包括下列步骤：①用75%酒精清洁待测样品的叶片表面，然后利用CTAB法提取样品总DNA；②以待测定样品总DNA为模板，利用EST-SSR引物组进行PCR，PCR反应体系为：2×TaqPCRMasterMix反应缓冲液5μL，10μM上、下游引物分别0.0125μL和0.25μL，M13-ROX/FAM/HEX/TAMRA接头引物0.15μL，稀释后的DNA模板3μL，无菌水补至10μL；PCR扩增程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，退火温度从65℃降至50℃共15个循环每个循环降低1℃，再在50℃退火温度下做22个循环，50℃延伸30s，72℃终延伸42s，16℃保存；③分析PCR扩增产物，9μL的PCR产物加入1μL10×DNALoading...

【专利技术属性】
技术研发人员：张燕君，于东悦，梁琼，王瑛，杨路路，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：湖北,42