稳定表达CD163受体蛋白的重组质粒、重组慢病毒和猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种稳定表达CD163受体蛋白的重组质粒、重组慢病毒和猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法，属于生物技术领域。该重组质粒是以慢病毒表达载体pLV‑sfGFP[2A]Puro为基础构建的，并整合有CD163编码基因。本发明专利技术提供的这种稳定表达CD163受体蛋白的重组质粒、重组慢病毒和猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法，采用特殊的慢病毒系统将CD163基因整合到永生化的PAM细胞染色体上，使得永生化的PAM细胞系能够永久性地稳定表达CD163蛋白，而使细胞易受PRRSV感染。PRRSV在该细胞系(mPAM‑CD163)上的毒价可以高达10

Recombinant plasmid expressing stable CD163 receptor protein, recombinant lentivirus and porcine alveolar macrophage system and construction method thereof

【技术实现步骤摘要】
稳定表达CD163受体蛋白的重组质粒、重组慢病毒和猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种稳定表达CD163受体蛋白的重组质粒、重组慢病毒和猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)在上世纪90年代初出现在欧洲和美国，此后成为全球养猪业的一个严重问题。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种持续的、严重的疾病，其特征是不同年龄段的猪呼吸道问题、生长性能差以及怀孕母猪生殖障碍。由于该病持续的亚临床感染及病毒的高度变异性和抗体反应不能完全免于病毒再感染和再出现，控制该疾病的措施变得复杂。目前，PRRSV几乎在全球每一个养猪国家都存在，并且呈现出一种严峻的流行态势，成为危害全球养猪业最为严重的疾病之一。PRRSV的增殖具有非常严格的宿主嗜性。原代猪肺泡巨噬细胞(pPAM)和血液单核细胞是对PRRSV感染敏感的猪源细胞。PRRSV主要通过呼吸道和生殖道粘膜侵入动物机体，通过作用于pPAM在动物肺部引起强烈的炎症反应，继而在猪体出现典型的呼吸道症状。随着PRRSV的大量复制，在病毒感染后期，PAM细胞出现大量破本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于CD163受体表达的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒是以慢病毒表达载体pLV‑sfGFP[2A]Puro为基础构建的，并整合有CD‑163编码基因。

【技术特征摘要】
1.一种用于CD163受体表达的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒是以慢病毒表达载体pLV-sfGFP[2A]Puro为基础构建的，并整合有CD-163编码基因。2.一种根据权利要求1所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，其包括：对CD163基因进行PCR扩增，并将CD163基因克隆至pEASY-T1载体中，得到载体pEASY-T1-CD163；从所述载体pEASY-T1-CD163上将CD163基因克隆至所述慢病毒表达载体pLV-sfGFP(2A)Puro中，用限制性内切酶XbaI和XhoI分别对所述pEASY-T1-CD163和所述pLV-sfGFP(2A)Puro进行双酶切；用DNA连接酶将酶切得到的CD163基因产物和pLV-sfGFP(2A)Puro产物进行连接，得到重组质粒pLV-EGFP-CD163。3.根据权利要求2所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，对所述CD163基因进行PCR扩增的引物对为：CD163-F：GCTCTAGAGCCACCATGGACAAACTCAGAATGGTGCTAC；CD163-R：CCCTCGAGTCATTGTACTTCAGAGTGGTCTCCTG。4.根据权利要求3所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，对所述CD163基因进行PCR扩增的条件为：92-96℃下预变性6-8min；93-95℃下变形25-35s,50-60℃下退火40-50s,67-77℃下延...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭军，徐煜琳，庞恒，李传刚，王亭亭，吴家强，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37