一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性Infliximab Fab片段的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性Infliximab Fab片段的方法，属于抗体工程技术领域。本发明专利技术采用一种新型三启动子Fab表面展示载体来共表达内质网分子伴侣蛋白Pdi或Kar2和Infliximab的VH‑CH1以及VL‑CL两个结构域。其中VH‑CH1和VL‑CL两个结构域通过氨基端的内质网定位信号肽定位在内质网内组装成天然Fab形式片段，再通过Aga1‑Aga2酵母细胞展示系统展示到细胞表面。本发明专利技术通过共表达内质网分子伴侣蛋白Pdi或Kar2，促进了Infliximab Fab片段的VH‑CH1和VL‑CL两个结构域在内质网内的折叠组装效率，明显提高了酵母细胞表面展示Infliximab Fab片段的抗原结合能力。

A Method for Improving the Display of Functional Infliximab Fab Fragments on Yeast Cell Surface by Using Molecular Chaperones

【技术实现步骤摘要】
一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法
本专利技术涉及一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，属于抗体工程

技术介绍
单克隆抗体是目前最具有经济价值的生物治疗药物之一，被广泛用于治疗病毒感染、免疫疾病和癌症等。酵母细胞表面展示技术因是真核表达宿主，并且可以结合流式细胞仪的高通量筛选技术等优势，被广泛用于多种形式的抗体文库的改造和筛选。目前抗体酵母展示片段主要有两种形式，包括scFv和Fab。ScFv是由抗体重链和轻链可变区通过15-20个氨基酸短肽连接而成的具有抗体活性的最小功能结构。而Fab是由重链的VH-CH1结构域与完整的轻链VL-CL通过分子内的二硫键连接组成的抗原结合片段。Fab结构相比于scFv更稳定，更接近成熟的抗体形式，从而对抗原有较高的亲和力。目前利用Aga1-Aga2酵母细胞展示系统产生Fab片段的方法主要有以下两种：(1)酵母双杂交法：将Fab的重链VH-CH1结构域和完整的轻链分别构建在两个酵母表达质粒上，再分别转入酵母两个单倍体细胞中，通过酵母杂交使两条链在体内组装最终本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性Infliximab Fab片段的方法，其特征在于，该方法采用一种三启动子的Fab表面展示重组载体，来共表达内质网分子伴侣蛋白和Fab片段，所述的Fab表面展示重组载体的结构为pESE‑GAL1‑ERMC‑‑‑HA‑CL‑VL‑GAL1‑GAL10‑VH‑CH1‑FLAG‑Aga2，所述的ERMC为内质网分子伴侣，所述的HA或FLAG为荧光抗体标签，所述的GAL1‑GAL10为控制Fab两条链表达的双向启动子，所述的Aga2为酵母细胞表面展示蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，其特征在于，该方法采用一种三启动子的Fab表面展示重组载体，来共表达内质网分子伴侣蛋白和Fab片段，所述的Fab表面展示重组载体的结构为pESE-GAL1-ERMC---HA-CL-VL-GAL1-GAL10-VH-CH1-FLAG-Aga2，所述的ERMC为内质网分子伴侣，所述的HA或FLAG为荧光抗体标签，所述的GAL1-GAL10为控制Fab两条链表达的双向启动子，所述的Aga2为酵母细胞表面展示蛋白。2.根据权利要求1所述利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，其特征在于，所述的内质网分子伴侣选自Pdi或Kar2。3.根据权利要求1所述利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，其特征在于，所述的内质网分子伴侣由单独的GAL1启动子控制表达。4.根据权利要求1所述利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，其特征在于，所述重组载体的序列为SEQIDNO：1或SEQIDNO：2所示。5.根据权利要求1-3任一项所述利用分子伴侣提高酵母细胞表面展示功能性InfliximabFab片段的方法，其特征在于，该方法的重组载体构建包括如下步骤：1)采用PCR克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：易犁，梅萌，李俊红，汪声晨，张桂敏，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42