寨卡病毒感染的血清学测定制造技术

本发明专利技术提供了用于检测向某些病毒的暴露和受某些病毒的感染的组合物、方法和试剂盒。具体地，本发明专利技术允许对向病毒的暴露和受病毒的感染进行快速差异血清学检测。具体而言，本发明专利技术允许对向寨卡病毒(ZIKV)的暴露和受寨卡病毒(ZIKV)的感染进行快速血清学检测。

Serological determination of Zhaika virus infection

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】寨卡病毒感染的血清学测定政府支持声明本专利技术是受政府支持在NIH批准号U19AI109761下完成的。因此，美国政府享有本专利技术的某些权利。
本专利技术涉及使用高通量血清学检测向病毒的暴露，尤其是检测向寨卡病毒(ZIKV)的暴露的领域。
技术介绍
寨卡病毒(ZIKV)是一种新兴的蚊媒病毒，其影响包括非洲、亚洲和美洲在内的几个主要大陆，并已被世界卫生组织(WHO)视为全球性紧急情况。ZIKV感染会对孕妇带来高风险，因为它与严重的胎儿脑异常，诸如小头畸形、颅内钙化和胎儿脑破裂序列以及眼部异常有因果联系(Rasmussen等人2016)。此外，ZIKV感染可能会引发格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome)的风险增加(Broutet等人2016)。在城市和郊区环境中，ZIKV在人-蚊-人传播循环中传播。除蚊传播外，还有证据表明ZIKV可以在怀孕期间从母亲传染给胎儿。另外，还报道了向伴侣的性传播。最后，尽管尚未报道通过输血传播ZIKV，但鉴于其他相关黄病毒的传播，很可能通过这种途径发生。寨卡病毒是一种与登革热病毒(DENV)密切相关的黄病毒。ZIKV诊断常常基于临床症状和流行病学联系。寨卡病毒和登革热病毒以及其他病毒，即西尼罗河病毒(WestNilevirus)(黄病毒)和基孔肯雅病毒(chikungunyavirus)(甲病毒)感染也呈现类似的临床症状，导致鉴别诊断困难。用于检测寨卡病毒基因产物的分子测定法可用于诊断活性感染，但无法提供对急性感染清除后可以影响子宫内后代发育的历史感染的了解。目前血清学测定法中ZIKV和DENV之间的交叉反应混淆了临床诊断和调查感染流行和与疾病的联系的工作。实际上，疾病控制和预防中心建议在噬斑减少中和试验(PRNT)中验证在当前ZIKVELISA中发现呈血清反应阳性的所有样品。PRNT昂贵、劳动强度大并且需要活病毒，因此，PRNT难以在临床微生物实验室中执行。另外，ZIKV疫苗处于研究的最前沿。随着这些疫苗的开发，需要快速可靠的用于测试此类疫苗功效的测定法。因此，需要灵敏、特异性且廉价的高通量血清学测定法来诊断ZIKV暴露。
技术实现思路
本专利技术提供了用于检测向某些病毒的暴露和受某些病毒的感染的组合物、方法、装置和试剂盒。具体地，本专利技术允许对向病毒的暴露和受病毒的感染进行快速差异血清学检测。具体而言，本专利技术允许对向寨卡病毒(ZIKV)的暴露和受寨卡病毒(ZIKV)的感染进行快速血清学检测。用于检测向ZIKV的暴露和受ZIKV的感染的组合物、方法、装置和试剂盒包含分离和未分离的特异性肽，所述分离和未分离的特异性肽与ZIKV具有强烈反应性并且对ZIKV具有特异性，即为ZIKV抗体的反应性和特异性表位。在ZIKV的NS2B区中鉴定出一种此类肽。在恢复期血清样品中，与ZIKV的特异性超过90％。这种肽具有以下氨基酸序列：DITWEKDAEXTGNSPRLDVA，其中X为V或I(SEQIDNO:1)。因此，本专利技术的一个实施方案是与ZIKV抗体具有反应性并且对ZIKV抗体具有特异性的肽，其包含氨基酸序列DITWEKDAEXTGNSPRLDVA，其中X为V或I(SEQIDNO:1)。在恢复期血清样品中，沿着与ZIKV抗体具有超过50％的特异性的ZIKV蛋白质组还鉴定了12种其他肽。因此，本专利技术的其他实施方案是选自表2中列出的12种与ZIKV抗体具有反应性并且对ZIKV抗体具有特异性的肽(SEQIDNO:2-13)的肽。本专利技术的另一个实施方案是包含在包含氨基酸序列DITWEKDAEXTGNSPRLDVA(其中X为V或I)(SEQIDNO:1)的肽上移动了一个残基的氨基酸序列(即，SEQIDNO:14-22)的肽的集合或套组。这些集合或套组可以包含下述肽或由下述肽组成，所述肽在长度上包含以下数量的氨基酸或由以下数量的氨基酸组成：6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸、11个氨基酸以及最多12个氨基酸。本专利技术的另一个实施方案是包含在选自表2中列出的12种与ZIKV抗体具有反应性并且对ZIKV抗体具有特异性的肽(SEQIDNO:2-13)的一种或多种肽上移动了一个残基的氨基酸序列的肽的集合或套组。这些集合或套组可以包含下述肽或由下述肽组成，所述肽在长度上包含以下数量的氨基酸或由以下数量的氨基酸组成：6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸、11个氨基酸以及最多12个氨基酸。在一个实施方案中，所述肽的集合或套组包括包含在与ZIKV抗体具有反应性并且对ZIKV抗体具有特异性的全部13种肽(SEQIDNO:1-13)上移动了一个残基的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的所有肽。这些不同的肽集合或套组可以包含下述肽或由下述肽组成，所述肽在长度上包含以下数量的氨基酸或由以下数量的氨基酸组成：6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸、11个氨基酸以及最多12个氨基酸。用于本专利技术的肽的数量范围可以为2个肽到数千至数万至数十万的数量。另一方面，本专利技术提供了包含本专利技术的两种或更多种肽的组合物。另一方面，本专利技术提供了包含编码本专利技术肽的序列的核酸。另外，本专利技术提供了包含此类核酸的载体，以及包含此类载体的宿主细胞。在某些实施方案中，所述载体是穿梭载体。在其他实施方案中，所述载体是表达载体(例如，细菌或真核表达载体)。在某些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞。在其他实施方案中，宿主细胞是真核细胞。在非限制性实例中，可以使用许多免疫检测技术来检测ZIKV的抗体，所述免疫检测技术包括但不一定限于蛋白质印迹(Westernblot)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、侧流测定、浸渍片类型的测定或SNAP试验、各种各样的多重抗体检测技术，或适于检测目标抗体的此类测定的任何修改形式。患者的ZIKV抗体可以是IgG或IgA，或其他免疫球蛋白类别或亚型。在一个实施方案中，免疫检测技术是可编程肽阵列的形式。在某些实施方案中，本专利技术的肽附接于或固定至固体支持物。在一个实施方案中，本专利技术的肽通过金属纳米层附接于固体支持物。在某些实施方案中，固体支持物是珠粒(例如，胶体颗粒、金属纳米颗粒或纳米壳，或乳胶珠粒)、侧流免疫测定装置(例如，多孔膜)中的流动路径、印迹(例如，蛋白质印迹、狭缝印迹或斑点印迹)、分析或离心转子中的流动路径，或管或孔(例如，在适于ELISA测定或微阵列的平板中)。在某些实施方案中，本专利技术的肽是分离的(例如，合成的和/或纯化的)肽。在某些实施方案中，本专利技术的肽与配体缀合。例如，在某些实施方案中，所述肽是生物素化的。在其他实施方案中，所述肽与链霉亲和素、亲和素或中性亲和素缀合。在其他实施方案中，所述肽与载体蛋白(例如，血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白(KLH)或免疫球蛋白Fc结构域)缀合。本专利技术的一个特定实施方案是包含与ZIKV抗体具有反应性并且对ZIKV抗体具有特异性的肽的肽微阵列。在一些实施方案中，肽微阵列包括：包含氨基酸序列DITWEKDAEXTGNSPRLDVA(其中X为V或I)(SEQIDNO:1)的肽；或选自表2中列出的12种肽(SEQIDNO:2-13)中的肽；或包含在包含氨基酸序列DITWEKDAEXTGNSPRLDVA(其中X为V或I)(SE本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与寨卡病毒抗体具有强烈反应性并且对寨卡病毒抗体具有特异性的分离的肽的集合，其中所述肽包含在包含选自由SEQ ID NO:1‑13或其组合组成的组的氨基酸序列的至少一个肽上移动了一个残基的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.01 US 62/428,8451.一种与寨卡病毒抗体具有强烈反应性并且对寨卡病毒抗体具有特异性的分离的肽的集合，其中所述肽包含在包含选自由SEQIDNO:1-13或其组合组成的组的氨基酸序列的至少一个肽上移动了一个残基的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的分离的肽的集合，其中所述肽的长度范围为约6个氨基酸至12个氨基酸。3.如权利要求1所述的分离的肽的集合，其中所述分离的肽中的一个或多个与配体、亲和素、链霉亲和素、中性亲和素、血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白(KLH)、酶或金属纳米颗粒或纳米壳缀合或经生物素化。4.如权利要求1所述的分离的肽的集合，其中所述分离的肽中的一个或多个固定至固体支持物。5.一种与寨卡病毒抗体具有强烈反应性并且对寨卡病毒抗体具有特异性的分离的肽的集合，其中所述肽包含在包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的肽上移动了一个残基的氨基酸序列。6.如权利要求5所述的分离的肽的集合，其中所述肽的长度范围为约6个氨基酸至12个氨基酸。7.如权利要求5所述的分离的肽的集合，其中所述分离的肽中的一个或多个与配体、亲和素、链霉亲和素、中性亲和素、血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白(KLH)、酶或金属纳米颗粒或纳米壳缀合或经生物素化。8.如权利要求5所述的分离的肽的集合，其中所述分离的肽中的一个或多个固定至固体支持物。9.如权利要求5所述的分离的肽的集合，其包含含有SEQIDNO:14-22的氨基酸序列的肽。10.一种肽微阵列，其包含如权利要求1所述的分离的肽的集合。11.一种肽微阵列，其包含如权利要求5所述的分离的肽的集合。12.一种肽微阵列，其包含如权利要求9所述的分离的肽的集合。13.一种肽微阵列，其包括：包含氨基酸序列SEQIDNO:1的肽；或选自由包括氨基酸序列SEQIDNO:2-13的肽组成的组的肽；或包含在包含氨基酸序列SEQIDNO:1的肽上移动了一个残基的氨基酸序列的肽的集合或套组；或包含在选自由包含氨基酸序列SEQIDNO:2-13的肽组成的组的至少一个肽上移动了一个残基的氨基酸序列的肽的集合或套组。14.一种与寨卡病毒抗体具有强烈反应性并且对寨卡病毒抗体具有特异性的分离的肽，其包含选自由SEQIDNO:1-13组成的组的氨基酸序列。15.一种与寨卡病毒抗体具有强烈反应性并且对寨卡病毒抗体具有特异性的分离的肽，其包含氨基酸序列SEQIDNO:1。16.一种用于对样品中的寨卡病毒抗体进行血清学检测的方法，其包括：a.使所述样品与如权利要求1所述的肽的集合在足以允许一种或多种抗体与一种或多种肽结合的条件下进行接触；以及b.检测包含所述集合中的所述一种或多种肽的抗体-肽复合物的形成，其中所述复合物的形成指示所述样品中存在针对寨卡抗原表位的抗体。17.如权利要求16所述的方法，其中所述样品来自受试者。18.如权利要求17所述的方法，其中所述受试者为人类女性。19.如权利要求18所述的方法，其中所述受试者已怀孕或正试图怀孕。20.如权利要求17所述的方法，其中所述受试者是已经施用寨卡病毒疫苗或免疫调节剂的受试者。21.如权利要求17所述的方法，其中所述受试者对酶联免疫吸附测定(ELISA)具有血清阳性结果。22.如权利要求17所述的方法，其中所述样品选自由鼻咽吸出物、血液、脑脊髓液、唾液、血清、血浆、尿液、痰液、支气管灌洗液、心包液和腹膜液组成的组23.如权利要求17所述的方法，其中所述样品是血清、血浆或尿液。24.如权利要求16所述的方法，其中所述样品选自由用于开发药剂和治疗剂的细胞、细胞培养物、细胞培养基和组合物组成的组。25.如权利要求16所述的方法，其中所述肽的集合固定至固体支持物。26.如权利要求16所述的方法，其中所述检测步骤包括进行ELISA测定。27....

【专利技术属性】
技术研发人员：W·I·利普金，N·米什拉，T·布里斯，A·柯楚拉，
申请(专利权)人：纽约市哥伦比亚大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国,US