Withaferin A在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Withaferin A在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用。实验证明，Withaferin A可以从发病机制角度抑制眼底缺血性疾病：1.显著减少缺血导致的氧化应激性细胞坏死与凋亡；2.靶向性抑制血管内皮生长因子及其受体(VEGF‑VEGFR2)信号通路，改善病理性微血管出血渗漏以及血管异常生长等症状。Withaferin A通过以上两种机制的双重作用显著缓解眼底缺血性疾病的症状，抑制疾病的发生发展。Withaferin A作为小分子靶向化合物，化学结构稳定、安全、可以透过血眼屏障，因此，它在眼底缺血性疾病中具有广阔的应用前景。

Application of Withaferin A in the Preparation of Drugs for the Treatment of Ischemic Fundus Diseases

【技术实现步骤摘要】
WithaferinA在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用
：本专利技术属于药学
，具体涉及WithaferinA在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用。
技术介绍
视网膜和脉络膜缺血、缺氧统称缺血性眼底疾病，是导致视力下降和丧失的重要原因，包括：1.急性缺血性：眼动脉阻塞、视网膜中央动脉阻塞、视网膜分支动脉阻塞、睫状视网膜动脉阻塞、远达性视网膜病变、类Purtscher视网膜病变等；2.慢性缺血性：视网膜中央静脉阻塞、分支静脉阻塞、糖尿病视网膜病变、眼缺血综合征、大动脉炎眼底病变、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑病变等。慢性眼底缺血性疾病还会导致新生血管性青光眼及角膜新生血管等并发症。视网膜和脉络膜缺血、缺氧可引起多种代谢物质的缺乏，但最为紧急、损害最重的病变是由缺氧所致。因此，该类型疾病有着部分共同的损伤的机理：1.缺氧导致的氧化应激性细胞坏死和凋亡，引起组织急性水肿、坏死。2.缺氧诱导的血管内皮生长因子(VEGF)生成。VEGF通过其受体VEGFR2起作用，增加血管的通透性，引起明显的血管渗漏，导致组织持续严重出血与水肿；长期VEGF升高会刺激内皮细胞的增殖，诱发不健康的新生血管，继而出现大量出血、纤维增殖、牵拉性视网膜脱离、新生血管性青光眼等严重并发症。上述疾病在全球发病率呈上升趋势，是儿童、成年人和老年人各年龄段致盲的首要原因。因此，找到一种本身即具有抗氧化应激性细胞死亡作用的，且可以靶向抗VEGF的化合物是眼科界临床工作者和科研工作者一直以来的追求。WithaferinA是一种小分子甾体内酯。化学名：5,6-环氧基-4,27-二羟基-1-氧代-2,24-二烯内酯，分子式：C28H38O6，分子量：470.6，其结构稳定、易保存,高剂量使用也无任何明显的全身毒性，分子化学结构式如下：以往分子对接分析发现WithaferinA可能可以通过抑制IKKβ的激活来防止NF-κB活化；被认为可能具有抗炎,抗肿瘤的功效，但是，人们尚不知晓WithaferinA在眼底缺血疾病中的抗氧化应激性细胞死亡作用及靶向性抗VEGF的双重作用，因此，对于其在眼底缺血性疾病的药物中的应用也无人报道。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供WithaferinA在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用。上述应用中，所述眼底缺血性疾病为视网膜病变或脉络膜病变。所述视网膜病变为急性视网膜病变或慢性视网膜病变。所述眼底缺血性疾病为眼动脉阻塞、视网膜中央动脉阻塞、视网膜分支动脉阻塞、睫状视网膜动脉阻塞、远达性视网膜病变、类Purtscher视网膜病变、视网膜中央静脉阻塞、分支静脉阻塞、糖尿病视网膜病变、眼缺血综合征、大动脉炎眼底病变、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑病变。所述视网膜病变为视网膜血管出血渗漏或视网膜细胞坏死凋亡或视网膜血管新生。所述脉络膜病变为脉络膜血管出血渗漏或脉络膜细胞坏死凋亡或脉络膜血管新生。本专利技术中采用外源性WithaferinA进行了细胞实验、动物模型的眼部急慢性缺血性实验，结果显示：所述的WithaferinA对缺血性眼底疾病造成的细胞坏死凋亡、血管渗漏、病理性血管新生以及视功能下降有明显的抑制作用，使眼底形态、结构与功能正常化，从而缓解并抑制疾病的发生发展。分子机制实验表明：WithaferinA抑制缺氧导致的氧化应激性细胞坏死与凋亡，且直接靶向性抑制VEGF信号通路的作用，从而从发病机制角度有效对抗缺血性眼底病变及其并发症。WithaferinA效果明确，作用机制清楚，化学结构稳定、安全、可以透过血眼屏障，应用于临床可能会开创小分子抗VEGF化合物靶向治疗缺血性眼底疾病的新时代。附图说明图1、WithaferinA(WFA)抑制人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)中缺血再灌注(I/R)和H2O2诱导的氧化应激性细胞死亡。图2、WithaferinA抑制HRMECs中H2O2诱导的氧化应激性细胞凋亡。图3、WithaferinA小鼠眼底急性缺血再灌注损伤后视功能的保护作用。图4、WithaferinA上调抗氧化蛋白的表达并激活ERK，Akt蛋白。图5、WithaferinA抑制眼底氧化应激性性损伤的机理：通过Akt/SOD2,SOD3,Prdx-1信号通路抑制人眼底微血管内皮细胞中氧化应激性细胞凋亡及坏死。图6、WithaferinA对VEGF诱导的眼底微血管内皮细胞的迁移、成管有抑制作用。图7、WithaferinA对VEGF诱导的病理性眼底微血管通透性增加有抑制作用。图8、典型慢性眼底缺血性病变-糖尿病视网膜病变(DR)小鼠模型的建立。图9、WithaferinA在典型慢性眼底缺血性病变-糖尿病视网膜病变(DR)小鼠模型中抑制病理性出血渗出及血管新生。图10、WithaferinA抑制眼底缺血性疾病病理性出血渗出及血管新生的机理：靶向性抑制血管内皮生长因子及其受体(VEGF-VEGFR2)信号通路。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1WithaferinA(WFA)抑制人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)中缺血再灌注(I/R)和H2O2诱导的氧化应激性细胞死亡。由于与视网膜与脉络膜供血的同源性，本项目中采用原代人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)；给予细胞缺血再灌注(I/R)可以模拟眼底急性缺血状态，给予H2O2处理可以模拟急性与慢性缺血导致的氧化应激性细胞损伤。HRMECs原代细胞购自Angio-Proteomie，用含5％FBS，1％青链霉素，1％EGF的内皮生长培养基(EGM)常规复苏细胞,待其贴壁后换液，细胞增殖到铺满底面70％时传代，细胞悬液1,000rpm离心5分钟，一般传代比例为1：3，平均种植于培养皿中，取其7代内细胞进行本实验。不同剂量的WFA(0,12.5,25,50或100nmol/ml)给予细胞15min预处理,再给予缺血(3h)/再灌注(2h)损伤后，给予常规MTT染色法检测细胞活力，常规乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH)检测细胞死亡率。结果可见WithaferinA显著提高细胞活力(图1A)，显著降低细胞死亡率(图1B)。WFA(0,12.5,25,50或100nmol/ml)给予细胞15min预处理,再给予H2O2模拟细胞氧化应激性损伤，H2O2(100μmol/ml)处理2小时后，仍给予常规MTT法检测细胞活力，常规LDH检测细胞死亡率。结果可见WithaferinA同样显著提高细胞活力(图1C),降低细胞死亡率(图1D)。由图1可知，WithaferinA(WFA)抑制HRMECs中缺血再灌注(I/R)和H2O2诱导的氧化应激性细胞死亡,即WithaferinA抑制眼底急性与慢性缺血导致的细胞氧化应激性细胞坏死及凋亡，且这种作用存在着显著地剂量依赖关系。图1中n＝5-6。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.01。实施例2WithaferinA抑制HRMECs中H2O2诱导的氧化应激性细胞凋亡。本实验采用H2O2处理模拟急性与慢性缺血导致的氧化应激性细胞损伤。常规培养HRMECs，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Withaferin A在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.WithaferinA在制备治疗眼底缺血性疾病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述眼底缺血性疾病为视网膜病变或脉络膜病变。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述视网膜病变为急性视网膜病变或慢性视网膜病变。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述眼底缺血性疾病为眼动脉阻塞、视网膜中央动脉阻塞、视网膜分支动脉阻塞、睫状视网膜动脉阻塞、远达性视网膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫喆一，曹晓明，王春芳，
申请(专利权)人：闫喆一，
类型：发明
国别省市：山西,14