一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条制造技术

一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条，由样品垫、胶体金探针垫、纤维素膜和吸水垫组成，其中胶体金上含有胶体金标记抗体，纤维素膜上设有三条检测线、一条质控线。所述胶体金探针垫包含由胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体和胶体金标记的特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体两种胶体金探针组成。所述三条检测线包括特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体、特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体、特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。本发明专利技术一次检测即可区分恶性疟、间日疟和三日疟/卵形疟，具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，适于临床和现场使用。

An Immune Test Strip for Rapid Detection of Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium vivax and Plasmodium ovale

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条
本专利技术属于生物工程领域，涉及一种胶体金免疫层析试纸条，具体来说是一种基于检测循环抗原的可以快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的疫试纸条。
技术介绍
疟疾是严重危害人类健康的寄生虫病之一，是世界卫生组织列为的全球三大公共卫生问题之一。2016年，全球仍有91个国家和地区流行疟疾，有2.16亿新发病例，约44.5万人死于疟疾。我国一直以来都是疟疾流行区，自2010年国家启动消除疟疾行动计划以来，本地感染疟疾病例数呈持续下降趋势，至2016年，全国本地感染病例数仅有3例。然而，近年来随着“一带一路”战略的推进，我国的国际交流和对外投资不断增加，外出务工、经商、旅游以及参与国际交流活动的人员日益增多，导致境外感染输入到国内的疟疾疫情居高不下。2011～2016年我国报告的输入性疟疾病例数累计近2万例，平均每年3000例以上。非洲和东南亚是我国输入性疟疾的主要来源地，输入性病例虫种多样，4种人体疟原虫(间日疟原虫、三日疟原虫、恶性疟原虫和卵形疟原虫)均有发现。输入性疟疾不仅严重危害我国人民的身体健康和生命安全，同时存在很大的继发传播风险，对我国的消除疟疾行动工作提出了挑战。利用免疫层析技术发展起来的免疫层析试纸条(Immunochromatographictrips；ICT，又简称Dipstick)，优点是操作简便，耗时短，判断直观明确，不依赖专门仪器设备和专业技术经验。目前已有多种疟疾诊断的免疫试纸条产品问世并广泛在实验室和现场使用，如CareStart、Wondfo、BinaxNOW等。但这些产品都只能区分恶性疟和非恶性疟，不能区分其他三种人体疟原虫(间日疟、卵形疟、三日疟)，给基层现场的诊断带来了不便，不利于病人的对症治疗和流行病控制策略的及时制定和实施。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条，所述的这种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条要解决现有疟疾快诊技术不能有效区分疟疾感染各病原体种属的技术问题。本专利技术提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17412。本专利技术还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体。本专利技术提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17410。本专利技术还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合四种疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。本专利技术提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17411。本专利技术还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体。本专利技术提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17408.本专利技术还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶同时不与卵形疟和三日疟原虫乳酸脱氢酶特异性结合的单克隆抗体。本专利技术提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17409。本专利技术还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合四种疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。本专利技术还提供了上述的一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条，包括一个样品垫、纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫和纤维素膜的一侧之间设置有一个胶体金探针垫，所述的胶体金探针垫和样品垫、纤维素膜之间紧密连接，所述的纤维素膜的另外一侧设置有吸水垫，所述的纤维素膜的另外一侧和所述的吸水垫紧密连接，所述的胶体金探针垫上设置有胶体金标记探针，所述胶体金探针是由胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体和胶体金标记的特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体组成，胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.17412的小鼠杂交瘤细胞产生，胶体金标记的特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.17410的小鼠杂交瘤细胞产生，所述纤维素膜上从靠近胶体金探针垫的一端开始依次设置有三条检测线，所述的三条检测线上分别设置有特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体、特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体、特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体，所述特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.17411的小鼠杂交瘤细胞产生；所述的特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.17408的小鼠杂交瘤细胞产生；所述的特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.17409的小鼠杂交瘤细胞产生，在第三检测线和吸水垫之间的纤维素膜上设置一条质控线，所述的质控线由可以结合胶体金标记探针的二抗或链球菌G蛋白或金黄色葡萄球菌A蛋白组成。具体的，所述的检测线上抗体的顺序可以任意调整。进一步的，所述的免疫层析试纸条背面设置一个起支撑作用的背板。进一步的，将所述带有背板的免疫层析试纸条装入一个盒体中，所述的盒体对应于样品垫的部位设有加样孔，所述的盒体对应于检测线和质控线的部位设有观测窗以及检测线和质控线的位置标识。具体的，所述纤维素膜可以是硝酸纤维素膜(NC膜)或醋酸纤维素膜或混合膜；所述胶体金探针垫为玻璃纤维膜或聚脂纤维膜；所述样品垫可以是玻璃纤维或聚酯纤维或混合纤维；所述吸水垫由吸水材料制备，如吸水纸。具体的，所述纤维素膜宽度控制在20～30mm；所述吸水垫可宽度为20～40mm，所述胶体金探针垫的宽度为5～10mm；所述样品垫宽度为10～40mm。进一步的，第一、第二和第三检测线的单克隆抗体工作浓度为0.1～2.0mg/mL，喷涂量为0.5～1μL/cm；质控线二抗或链球菌G蛋白或金黄色葡萄球菌A蛋白的工作浓度为0.1～2.0mg/mL，喷涂量为0.5～1μL/cm；胶体金标记探针单克隆抗体的工作浓度(以蛋白浓度计)：8～40μg/mL，喷涂量为40～50μL/cm。进一步的，所述的免疫层析试纸条背面背板材料的选择是多种多样的，可以是塑料板，如聚氯乙烯板(PVC)等。进一步的，将所述带有背板的免疫层析试纸条切成3～5mm宽，装入一个检测卡的盒体中。本专利技术分别采用胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体和特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体作为检测探针，附着于胶体金探针垫上。检测过程中，复溶的胶体金标记探针可以与受试者血样中的疟原虫抗原特异性结合，形成抗原探针复合物。本专利技术分别将特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体、特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体、特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体固定在纤维素膜上，形成第一、第二和第三检测线。当受试者血样流过检测线时，抗原探针复合物会被固定的特异性抗体捕获，形成肉眼可见的沉淀线(色带)。若血样中含有恶性疟原虫，那么第一、第二和第三检测线都会显色；若血样中含有间日疟原虫，那么第二和第三检测线会显色；如果若血样中含有三日疟原虫或卵形疟原虫，那么仅第三检测线会显色。本专利技术将可与检测探针特异性结合的二抗抗体固定在纤维素膜上作为质控线。胶体金标记探针是特异性结合疟原虫抗原的单克隆小鼠抗体，相应的质控线采用羊抗小鼠IgG的抗抗体。无论待检样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.17412。

【技术特征摘要】
1.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17412。2.权利要求1所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体。3.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17410。4.权利要求3所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。5.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17411。6.权利要求5所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体。7.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17408。8.权利要求7所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合恶性疟和间日疟疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。9.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo.17409。10.权利要求9所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体。11.一种快速检测恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的免疫试纸条，包括一个样品垫、纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫和纤维素膜的一侧之间设置有一个胶体金探针垫，所述的胶体金探针垫分别和样品垫、纤维素膜之间紧密连接，所述的纤维素膜的另外一侧设置有吸水垫，所述的纤维素膜的另外一侧和所述的吸水垫紧密连接，所述的胶体金探针垫上设置有胶体金标记探针，其特征在于：所述胶体金探针是由胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ的单克隆抗体和胶体金标记的特异性结合疟原虫乳酸脱氢酶的单克隆抗体组成，胶体金标记的特异性结合恶性疟原虫的富组蛋白Ⅱ...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊云，石锋，高春花，杨玥涛，李石柱，王多全，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：上海,31