一种细胞检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种细胞检测试剂盒及其应用，该细胞检测试剂盒包含有染色液和溶血剂。本发明专利技术的细胞检测试剂盒内的试剂同时使用时可以对有核红细胞、嗜碱粒细胞和其它四类白细胞进行区分，可以准确测定有核红细胞、嗜碱性粒细胞；单独使用溶血剂可以对嗜碱性粒细胞和其他四类白细胞进行区分，可以准确对嗜碱性粒细胞进行测定，因此本发明专利技术的细胞检测试剂盒可以自主选择模式对嗜碱性粒细胞和/或有核红细胞及其他白细胞进行分类和计数。

A Kit for Cell Detection and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种细胞检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及体外诊断的
，更具体地说，涉及一种细胞检测试剂盒及其应用。
技术介绍
有核红细胞即幼稚红细胞，是红细胞的一种，正常时，1周之内婴幼儿血片中可见到少量有核红细胞，而成年有核红细胞均存在骨髓之中，如见于外周血血涂片则为病理现象，包括：原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞及晚幼红细胞。有核红细胞中还有细胞核存在，其核越大，细胞越幼稚。测定有核红细胞具有临床重要性。传统有核红细胞的鉴别和计数方法是通过人工镜检计数100个白细胞区域内有核红细胞的个数，但是人工镜检问题在于样品制作繁琐，计数结果会因为检验医生对细胞的判断造成个人误差，同时，细胞计数少也会造成统计学上的误差。现在常用的方法是利用仪器对有核红细胞进行测定及计数，主要利用荧光染料与有核红细胞中的核酸物质结合，当FCM发出的激光照射于细胞上时，细胞发射出特定颜色的荧光，根据白细胞和有核红细胞荧光强度的差异，将有核红细胞进行准确的测定；再根据散射光强度的差异，将嗜碱性粒细胞与其他四类白细胞群进行区分，从而准确测定嗜碱性粒细胞。一般来说，仪器法简单、快速、准确。传统方法，费时较长，效率低，成本较高，医生的个体差异较大。目前，已有多家厂家的血细胞分析仪带有有核红细胞的检测项目，取得了相应的进展，现有相关技术如下：现有技术一：专利号CN103975054A公开了一种鉴别和计数有核红细胞的方法，该方法通过适用溶解剂溶解血样中的红细胞，在非聚焦血流孔中通过DC阻抗法测量有核血细胞，区分有核红细胞和其他细胞类型。以直方图的方式显示经过计算机处理有核红细胞鉴别结果，测定血样中的有核红细胞。然而，该方法通过试剂后的细胞大小的直方图区分有核红细胞和白细胞，所以容易造成有核红细胞计数不准确的缺点，而且该方法不能对嗜碱性粒细胞计数。现有技术二：专利号CN101750476A公开了一种溶血剂和染色液对有核红细胞及嗜碱细胞进行测定，该方法所用试剂与血样混合形成细胞悬液，通过散射光及荧光信号对细胞进行分类及计数。该方法得出的分类散点图嗜碱细胞区分不是特别明显，同时该方法不能选择仅用溶血剂测试嗜碱性粒细胞的模式，不够灵活，在医院不需要分析有核红细胞时造成染色液不必要的浪费，增加医院成本。现有技术三：专利号CN101086473A公开了一种可以将试样中有核红细胞和嗜碱性粒细胞与其他白细胞更明确区分并计数的试样测定用试剂。该专利技术是用溶血剂和荧光色素对血样进行处理，通过前向散射信号和侧向荧光信号测量有核红细胞和嗜碱性粒细胞。该方法也是不能选择仅测试嗜碱性粒细胞的模式，不够灵活，在医院不需要分析有核红细胞时造成染色液不必要的浪费，增加医院成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种细胞检测试剂盒及其应用，解决了现有技术中有核红细胞检测计数不准、浪费染料、不能灵活选择、试剂成本高的问题。本专利技术解决技术问题所采用的技术方案是：一种细胞检测试剂盒，包含有染色液和溶血剂；所述染色液包含有用于与核酸结合的核酸染料和用于溶解所述核酸染料的有机溶剂；所述核酸染料为式I所示的化合物：其中R1、R2、R3分别为含1～4个碳原子的烷基，R4为含1～3个碳原子的烷基或者为氢原子，X为卤素原子，Z为O、S、N或C(CH3)2；所述溶血剂包含有缓冲剂、至少一种表面活性剂和水，并通过pH调节剂调节使溶血剂的pH＝2.0～3.5。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述表面活性剂选自两性表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂中的至少一种；其中，两性表面活性剂为式II所示的烷基甜菜碱型表面活性剂或式III所示的氨基酸型表面活性剂：R5为8～16个碳原子的烷基；R6为8～18个碳原子的烷基；其中，非离子表面活性剂为式IV所示的聚氧乙烯型的非离子表面活性剂：R7为碳原子数8～12的烷基或者烯基；R8为氧原子或者n是8～15的整数；其中，阳离子表面活性剂为季铵盐型或者吡啶翁型的阳离子表面活性剂；其中，阴离子表面活性剂为硫酸盐型的阴离子表面活性剂。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述缓冲剂为醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、甲酸-甲酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、丁二酸-丁二酸钠缓冲液或甘氨酸钠-盐酸缓冲液。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述有机溶剂选自乙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述核酸染料在所述有机溶剂中的浓度为0.02-0.40mmol/L；每一种所述表面活性剂在水中的浓度为2.0-10.0g/L，所述缓冲剂在水中的浓度为1.0-8.0g/L。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述核酸染料在所述有机溶剂中的浓度为0.04-0.30mmol/L；每一种所述表面活性剂在水中的浓度为3.0-8.0g/L，所述缓冲剂在水中的浓度为2.0-6.0g/L；并通过pH调节剂调节使溶血剂的pH＝2.2～3.0。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述溶血剂中还包含防腐剂，所述防腐剂在水中的浓度为0.2-3.0g/L。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述防腐剂为Proclin300、苯氧乙醇、山梨酸、山梨酸盐、甲醛、苯甲酸或苯甲酸盐。在本专利技术的细胞检测试剂盒中，所述防腐剂在水中的浓度为0.5-2.0g/L。本专利技术还涉及了上述的细胞检测试剂盒在制备用于同时检测有核红细胞和嗜碱性粒细胞以及单独检测嗜碱性粒细胞的医疗器械中的应用。实施本专利技术的细胞检测试剂盒及其应用，具有以下有益效果：本专利技术的细胞检测试剂盒内的试剂同时使用时可以对有核红细胞、嗜碱粒细胞和其它四类白细胞进行区分，可以准确测定有核红细胞、嗜碱性粒细胞；单独使用溶血剂可以对嗜碱性粒细胞和其他四类白细胞进行区分，可以准确对嗜碱性粒细胞进行测定，因此本专利技术的细胞检测试剂盒可以自主选择模式对嗜碱性粒细胞和/或有核红细胞及其他白细胞进行分类和计数。附图说明图1为本专利技术的实施例4中的细胞检测试剂盒在配套血细胞分析仪上的散点图；图2为单独使用实施例4中的细胞检测试剂盒中的溶血剂在配套血细胞分析仪上的散点图；图3为本专利技术的实施例1中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC％对照结果；图4为本专利技术的实施例1中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC#对照结果；图5为本专利技术的实施例1中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000BASO％对照结果；图6为本专利技术的实施例2中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC％对照结果；图7为本专利技术的实施例2中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC#对照结果；图8为本专利技术的实施例2中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000BASO％对照结果；图9为本专利技术的实施例3中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC％对照结果；图10为本专利技术的实施例3中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC#对照结果；图11为本专利技术的实施例3中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000BASO％对照结果；图12为本专利技术的实施例4中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC％对照结果；图13为本专利技术的实施例4中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000NRBC#对照结果；图14为本专利技术的实施例4中的细胞检测试剂盒与希森美康XN-1000BASO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞检测试剂盒，其特征在于，包含有染色液和溶血剂；所述染色液包含有用于与核酸结合的核酸染料和用于溶解所述核酸染料的有机溶剂；所述核酸染料为式I所示的化合物：

【技术特征摘要】
1.一种细胞检测试剂盒，其特征在于，包含有染色液和溶血剂；所述染色液包含有用于与核酸结合的核酸染料和用于溶解所述核酸染料的有机溶剂；所述核酸染料为式I所示的化合物：其中R1、R2、R3分别为含1～4个碳原子的烷基，R4为含1～3个碳原子的烷基或者为氢原子，X为卤素原子，Z为O、S、N或C(CH3)2；所述溶血剂包含有缓冲剂、至少一种表面活性剂和水，并通过pH调节剂调节使溶血剂的pH＝2.0～3.5。2.根据权利要求1所述的细胞检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂选自两性表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂中的至少一种；其中，两性表面活性剂为式II所示的烷基甜菜碱型表面活性剂或式III所示的氨基酸型表面活性剂：R5为8～16个碳原子的烷基；R6为8～18个碳原子的烷基；其中，非离子表面活性剂为式IV所示的聚氧乙烯型的非离子表面活性剂：R7为碳原子数8～12的烷基或者烯基；R8为氧原子或者n是8～15的整数；其中，阳离子表面活性剂为季铵盐型或者吡啶翁型的阳离子表面活性剂；其中，阴离子表面活性剂为硫酸盐型的阴离子表面活性剂。3.根据权利要求1所述的细胞检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂为醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、甲酸-甲酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、丁二酸-丁二酸钠缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：余晓尘，舒家发，李春晖，伍耀婵，崔晓磊，辛佩轩，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：深圳市帝迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44