一种CRISPR/Cas基因编辑系统及其制备方法和应用技术方案

本发明专利技术提供了一种CRISPR/Cas基因编辑系统及其制备方法和应用，属于基因编辑技术领域，所述CRISPR/Cas基因编辑系统包括pcDNA3.1‑LjCas9质粒和pLjCas9‑sgRNA质粒。所述应用包括以下步骤：确定靶标序列，设计单链寡核苷酸对；退火获得双链DNA片段；连接到pLjCas9‑sgRNA质粒中获得靶标序列sgRNA表达载体；靶标序列sgRNA表达载体与pcDNA3.1‑LjCas9质粒共转染细胞后培养。所述基因编辑系统能够对靶标DNA进行特异性切割，编辑效率高。

A CRISPR/Cas Gene Editing System and Its Preparation Method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种CRISPR/Cas基因编辑系统及其制备方法和应用
本专利技术属于基因编辑
，尤其涉及一种CRISPR/Cas基因编辑系统及其制备方法和应用。
技术介绍
ZFN、TALEN及CRISPR/Cas9打靶技术是目前研究较为成熟的几种基因组修饰技术。(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)是细菌和古细菌一种不断进化适应的免疫防御机制。CRISPR/Cas9利用一段小RNA来识别并剪切DNA以降解外来核酸分子。Cong等(MultiplexGenomeEngineeringUsingCRISPR/CasSystems.Science.2013)及Mali等(RNA-guidedhumangenomeengineeringviaCas9.Science.2013)证明Cas9系统能在293T、K562、iPS等多种细胞中，进行有效的靶向酶切，非同源重组(NHEJ)、同源重组(HR)效率在3-25％之间，与TALEN酶切效果相当，但效率仍待进一步提升。如果能够开发出效率更高的CRISPR/Cas系统，将促进基因编辑技术的发展和产业化应用。专利技术内容有鉴于此，本专本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CRISPR/Cas基因编辑系统，其特征在于，包括pcDNA3.1‑LjCas9质粒和pLjCas9‑sgRNA质粒；所述pcDNA3.1‑LjCas9质粒包括初始质粒pcDNA3.1(+)和编码LjCas9的DNA片段；所述pLjCas9‑sgRNA质粒包括初始质粒pUC57和sgRNA通用表达框DNA片段。

【技术特征摘要】
1.一种CRISPR/Cas基因编辑系统，其特征在于，包括pcDNA3.1-LjCas9质粒和pLjCas9-sgRNA质粒；所述pcDNA3.1-LjCas9质粒包括初始质粒pcDNA3.1(+)和编码LjCas9的DNA片段；所述pLjCas9-sgRNA质粒包括初始质粒pUC57和sgRNA通用表达框DNA片段。2.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于，所述编码LjCas9的DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1或2所述的基因编辑系统，其特征在于，sgRNA通用表达框DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。4.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于，所述pLjCas9-sgRNA质粒的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。5.权利要求1～4任意一项所述的基因编辑系统的制备方法，包括以下步骤：将编码LjCas9的DNA片段插入到初始质粒pcDNA3.1(+)中构建获得pcDNA3.1-LjCas9质粒；将sgRNA通用表达框DNA片段插入到初始质粒pUC57中获得pLjCas9-sgRNA质粒。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李和刚，秦怀远，赵金山，辛京京，张宁，郝小静，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37