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质控品及其制备方法、试剂盒及检测胎儿21和18三体综合征的方法技术

技术编号:21825164 阅读:80 留言:0更新日期:2019-08-10 15:32
本发明专利技术涉及一种质控品及其制备方法、试剂盒及检测胎儿21和18三体综合征的方法,其使用具有单分子检测灵敏度和绝对定量能力的数字PCR技术,开发了一种简单有效的染色体非整倍体的无创产前检测新方法。使用孕妇外周血,能够对一个样本在约5小时完成无创产前检测。使基于数字PCR的无创产前检测技术能实现准确、快速、简便的产前筛查。且该检测试剂盒准确性达到99%,成本仅需NIPT技术的1/5,检测时间5个小时。

Quality control products and their preparation methods, kits and methods for detection of trisomy 21 and 18 in fetuses

【技术实现步骤摘要】
质控品及其制备方法、试剂盒及检测胎儿21和18三体综合征的方法
本专利技术涉及一种质控品及其制备方法、试剂盒及检测胎儿21和18三体综合征的方法。
技术介绍
胎儿染色体非整倍体异常是严重的出生缺陷,最常见的包括21-三体综合征(即唐氏综合征,其未干预的综合发病率高达1/750,且随着孕妇年龄增加风险急剧增大)、18-三体综合征等。这类疾病将导致新生儿出现智力低下、生长发育迟缓、多发畸形乃至死亡,且尚无有效治疗手段,而产前筛查和诊断可最有效的避免此类患儿的出生。针对染色体疾病的产前检测主要以血清学筛查、羊水穿刺诊断为主。但血清学筛查准确度较低,具有5%的假阳性率及20-40%漏诊率;羊水穿刺虽然准确度较高,但是对孕妇具有创伤性,有1%的流产风险,不便于大规模的产前检测。因此,急需一种更有效安全的的检测手段。自从在孕妇外周血中发现游离胎儿DNA以来,研究人员对其展开大量研究,继而发展出基于二代测序技术的无创产前检测技术(NIPT),此技术比传统唐氏综合征血清学筛查更准确,比羊水穿刺更安全。因为其无创、安全、准确的特点,受到医生和孕妇的认可并被临床快速接受,是目前二代测序技术最为成功的临床应用。然而,但基于二代测序的无创产前检测技术尚存在检测周期长,需要15个工作日出检测报告、技术门槛高、检测费用贵等不足,阻碍了其替代传统产前筛查方法成为全面普查项目。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种质控品及其制备方法、试剂盒及检测胎儿21和18三体综合征的方法,能实现准确、快速、简便的产前筛查。为达到上述目的,本专利技术提供如下技术方案:一种质控品,所述质控品为用于检测胎儿21和18三体综合征的试剂盒的质控品,所述质控品含有阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品;所述阳性类参照品包括由P21溶液和P18溶液组成的成套参考品,所述P21含有片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述P18溶液含有片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液分别和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液;所述阴性类参照品包括由片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液所混合组成的混合液,即NT13溶液;所述检测限类参照品包括由PL21溶液和PL18溶液组成的成套参考品,所述PL21溶液含有所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述PL18溶液含有所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液。进一步地,在所述P21溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wt;在所述P18溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wtt;在所述NT13溶液中,所述片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为15%wt;在所述PL21溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%w;在所述PL18溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%w。进一步地,所述PL21溶液包括PL21-1溶液和PL21-2溶液,所述PL21-1溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3%wt,所述PL21-2溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为5%wt;所述PL18溶液包括PL18-1溶液和PL18-2溶液,所述PL18-1溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3%wt,所述PL18-2溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为5%w。进一步地,所述阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品中,所有DNA片段的大小为140~200bp。本专利技术还提供一种制备所述的质控品的方法,包括以下步骤:所述阳性类参照品的制备:1)P21的制备提取T21三体阳性细胞株系的细胞基因组DNA,超声打断,获得与母体血浆提取DNA以及母体血浆中胎儿游离DNA大小接近的片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述P21溶液,其中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wt;2)P18的制备提取T18三体阳性细胞株系的细胞基因组DNA,超声打断,获得与母体血浆提取DNA以及母体血浆中胎儿游离DNA大小接近的片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述P18溶液,其中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wt所述阴性类参照品的制备:提取T13三体阳性细胞株系的细胞基因组DNA,超声打断,获得与母体血浆提取DNA以及母体血浆中胎儿游离DNA大小接近的片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述T13三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述NT13溶液,其中,所述片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为15%wt;所述检测限类参照品的制备:1)PL21的制备按上述方法获得所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述T21三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述PL21溶液,其中,所述T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%wt;2)PL18的制备按上述方法获得所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述T18三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述PL18溶液,其中,所述T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%wt。进一步地,所述阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品中,所有DNA片段的大小为140~200bp。.进一步地,提取所述DNA片段的具体方法为:将AgencountAmpureXP磁珠与DNA溶液体积比1.5:1轻轻混合,然后室温静置5min,将Ep管放到磁力架上静置2min,弃上清废液,在EP管中加入300μl70%无水乙醇,洗涤磁珠两次,弃上清废液,室温静置数分钟,直至磁珠干燥完全,在管内加入20μlddH2O,室温静置5min,将Ep管放到磁力架上静置2min,吸取保存管内液体即为纯化产物140bp-200bp区间内的DNA片段溶液。本专利技术还提供一种含有所述的质控品的试剂盒。本专利技术还提供一种检测胎儿21和18三体综合征的方法,包括以下步骤:S1、提供血样本,提取所述血样本中游离的DNA,得到待测DNA样本;S2、采用所述的试剂盒对10~23周孕龄妇女的胎儿进行21-三体综合征和18-三体综合征的筛查检测,以18号染色体以及21号染色体为待测染色体,以1~12号中任意一条染色体为参照染色体,获得所述待测染色体和参照染色体的保守基因位点并对其序列进行引物和探针设计;S3、对所述待测DNA样本进行数字PCR反应,得到检测结果。进一步地,所述待测DNA样本中,DNA片段的大小为140~200bp。与现有技术相比,本专利技术的有益效果在于:1)质控品的由片段化的,经过片段筛选的基因组DNA与人体血浆DNA混合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种质控品,其特征在于,所述质控品为用于检测胎儿21和18三体综合征的试剂盒的质控品,所述质控品含有阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品;所述阳性类参照品包括由P21溶液和P18溶液组成的成套参考品,所述P21含有片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述P18溶液含有片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液分别和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液;所述阴性类参照品包括由片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液所混合组成的混合液,即NT13溶液;所述检测限类参照品包括由PL21溶液和PL18溶液组成的成套参考品,所述PL21溶液含有所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述PL18溶液含有所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液。

【技术特征摘要】
1.一种质控品,其特征在于,所述质控品为用于检测胎儿21和18三体综合征的试剂盒的质控品,所述质控品含有阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品;所述阳性类参照品包括由P21溶液和P18溶液组成的成套参考品,所述P21含有片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述P18溶液含有片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液分别和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液;所述阴性类参照品包括由片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液所混合组成的混合液,即NT13溶液;所述检测限类参照品包括由PL21溶液和PL18溶液组成的成套参考品,所述PL21溶液含有所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液,所述PL18溶液含有所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液和正常未孕女性的离体血浆DNA溶液。2.如权利要求1所述的质控品,其特征在于,在所述P21溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wt;在所述P18溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wtt;在所述NT13溶液中,所述片段化的T13三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为15%wt;在所述PL21溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%w;在所述PL18溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3~5%w。3.如权利要求2所述的质控品,其特征在于,所述PL21溶液包括PL21-1溶液和PL21-2溶液,所述PL21-1溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3%wt,所述PL21-2溶液中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为5%wt;所述PL18溶液包括PL18-1溶液和PL18-2溶液,所述PL18-1溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为3%wt,所述PL18-2溶液中,所述片段化的T18三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为5%w。4.如权利要求1至3中任一项所述的质控品,其特征在于,所述阳性类参照品、阴性类参照品和检测限类参照品中,所有DNA片段的大小为140~200bp。5.一种制备如权利要求1至4中任一项所述的质控品的方法,其特征在于,包括以下步骤:所述阳性类参照品的制备:1)P21的制备提取T21三体阳性细胞株系的细胞基因组DNA,超声打断,获得与母体血浆提取DNA以及母体血浆中胎儿游离DNA大小接近的片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液,将所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液与正常未孕女性的离体血浆DNA溶液混合得到所述P21溶液,其中,所述片段化的T21三体阳性细胞株系DNA溶液的含量为10~20%wt;2)P18的制备提取T18三体阳性细胞株系的细胞基因组DN...

【专利技术属性】
技术研发人员:林文楚朱琦偶健
申请(专利权)人:朱琦
类型:发明
国别省市:江苏,32

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