一种可降解组织修复材料和制备方法技术

本发明专利技术提供的可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料的原料包括重组蛛丝蛋白；所述重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组蛛丝蛋白，通过在相邻的两个蛛丝蛋白结构域单体之间插入蛋白酶酶切位点，当重组蛛丝蛋白在人体内使用时，由于重组蛛丝蛋白上的蛋白酶酶切位点可以被人体内的酶酶解，可以使得由重组蛛丝蛋白制成的生物材料在人体内可以渐渐降解，因此利用上述的重组蛛丝蛋白为原料制备组织修复材料，可以在保证原有的蛛丝蛋白的机械性能或生物学品质的同时，还可以保证其具有降解性能，满足临床要求。

A biodegradable tissue repair material and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种可降解组织修复材料和制备方法
本专利技术属于生物医药材料领域，具体涉及一种可降解组织修复材料和制备方法。
技术介绍
组织工程技术是一项用于治疗组织和器官缺损的新手段，由生物支架、细胞、生长因子等元素组成。其中，生物支架作为细胞生长、增殖以及新组织形成的物理支撑，在组织工程中起着重要作用。在医学领域中，需要大量的人工合成材料来对组织损伤进行修复和治疗。具体地，针对骨缺损材料方向，目前组织替代材料主要由磷酸钙材料，羟基磷灰石等组成，然而，这些材料的固有缺点限制了他们的应用。磷酸钙材料具有良好的生物活性和骨传导性，但力学性能差，限制了磷酸钙的应用范围。羟基磷灰石是生物相容性很好的骨修复材料，然而体内降解的速度慢，不利于新骨的生长。羟基磷灰石通常需要与其他生物材料复合，增加其适用性。中国专利文献CN107029289A中公开的一种蜘蛛丝蛋白组织修复材料，根据蜘蛛丝蛋白具有优良的生物相容性、可降解性、机械性能好和生物相容性好，可以作为组织修复材料这一点，将蜘蛛丝蛋白作为组织修复材料的原料。然而，天然的蜘蛛丝蛋白降解非常缓慢，通常情况下需要微生物的协助，如将其制成可降解的塑料袋埋在土壤里需要微生物长达几年时间的发酵降解，降解时间过长，不宜应用于需要降解时间较短的材料中，如植入人体内的组织修复材料，因此，对于组织修复材料来说，天然的蜘蛛丝蛋白不宜作为可降解的组织修复材料的原料。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料中包括重组蛛丝蛋白，在保证所述组织修复材料可以利用所述重组蛛丝蛋白原有的机械性能或生物学品质的基础上，还可以具有较高的降解性能，满足临床要求。为此，本专利技术提供了如下技术方案：一种可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料的原料包括重组蛛丝蛋白；所述重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。所述的可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料的原料包括如下重量份的原料：所述的可降解组织修复材料，还包括干酪素12-20重量份。所述的可降解组织修复材料，还包括鱼精蛋白硫酸盐10-20重量份。所述的可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料包括如下重量份的原料：一种制备所述的可降解组织修复材料的方法，包括如下步骤：S1、取重组蛛丝蛋白加入溶剂中溶解，然后加入壳聚糖和醋酸溶液，加热搅拌，得A混合物；S2、向A混合物中加入称取的肌醇六磷酸，加热搅拌，得B混合物；S3、向B混合物中加入碳纤维，搅拌，然后静置，除去上清液，过滤，烘干。所述的可降解组织修复材料的方法，在S1步骤中，所述加热搅拌步骤中，加热的温度为60-80℃。所述的可降解组织修复材料的方法，在S2步骤中，在加入所述肌醇六磷酸前，调节A混合物的pH值为6.5-6.8。所述的可降解组织修复材料的方法，在S2步骤中，所述加热搅拌步骤中，先控制加热的温度为60-80℃，保持1-2h，然后降温至35-45℃，保持恒温，备用。所述的可降解组织修复材料的方法，还包括在S1步骤中，在加热搅拌之前，加入称取的鱼精蛋白硫酸盐和干酪素的步骤。本专利技术技术方案，具有如下优点：1.本专利技术提供的可降解组织修复材料，所述可降解组织修复材料的原料包括重组蛛丝蛋白；所述重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述重组蛛丝蛋白，通过在相邻的两个蛛丝蛋白结构域单体之间插入蛋白酶酶切位点，当重组蛛丝蛋白在人体内使用时，由于重组蛛丝蛋白上的蛋白酶酶切位点可以被人体内的酶酶解，可以使得由重组蛛丝蛋白制成的生物材料在人体内可以渐渐降解，因此利用上述的重组蛛丝蛋白为原料制备组织修复材料，可以在保证原有的蛛丝蛋白的机械性能或生物学品质的同时，还可以保证其具有降解性能，满足临床要求。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例2中的重组蛛丝蛋白MaSp1的SDS-PAGE鉴定图，图中1为M1，2为重组蛛丝蛋白MaSp1；图2是本专利技术实施例2中的重组蛛丝蛋白MaSp1的Westernblotting鉴定图，图中1为M1，2为重组蛛丝蛋白MaSp1；图3是本专利技术实验例1中重组蛛丝蛋白MaSp1纤维的电镜图；图4是本专利技术实验例1中重组蛛丝蛋白MaSp1薄膜的电镜图；具体实施方式下述实施例中的表达载体pET-28a、大肠杆菌BL21、LB培养基、工具酶TEV酶酶液为市售产品。本专利技术的重组蛛丝蛋白可以委托生物技术公司合成，也可以按照下述的实施例的方法进行制备。实施例1人工合成重组蛛丝蛋白的基因MaSp1本实施例所述的重组蛛丝蛋白序列如SEQIDNO.1所示，根据上述选择的重组蛛丝蛋白序列和大肠杆菌偏爱密码子的使用原则，设计编码与重组蛛丝蛋白氨基酸序列一致的重组蛛丝蛋白的核苷酸序列，见序列表中SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。实施例2、人工合成重组蛛丝蛋白的基因MaSp1在大肠杆菌中的高效表达(1)由基因合成公司合成MaSp1基因，将其克隆至含有T7强启动子的原核生物表达载体pET-28a+中，构建成含有人工合成的MaSp1基因的重组质粒pET-28a+-MaSp1；(2)制备大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，用热休克法(42℃热激45秒)将重组质粒pET-28a+-MaSp1转化至宿主细胞BL21(DE3)中，得到含有重组质粒的工程菌株；(3)将工程菌株接种到LB培养基溶液中，37℃，220rpm摇床培养，当工程菌培养液浓度OD600达到0.6-0.8时，加入0.5mmol/LIPTG，37℃诱导表达6小时，然后进行裂解，将所得的细胞裂解液进行SDS-PAGE鉴定，结果见图1，取所述细胞裂解液进行重组蛛丝蛋白MaSp1的提取、纯化，将纯化后的重组蛛丝蛋白MaSp1进行Westernblotting鉴定，结果见图2。实施例3可降解组织修复材料本实施例提供了一种可降解组织修复材料，包括如下重量份的原料：本实施例还提供了一种制备上述可降解组织修复材料的方法，包括如下步骤：S1、称取重组蛛丝蛋白5g加入80ml的HFIP溶剂中溶解，然后加入壳聚糖20g和体积浓度为70％的醋酸溶液40ml，加热搅拌，加热的温度为60℃，得A混合物；S2、调节A混合物的pH值为6.8，然后向其中加入称取的肌醇六磷酸10g，加热搅拌，先控制加热的温度为80℃，保持1h，然后降温至45℃，保持恒温，得B混合物，备用；S3、向B混合物中加入碳纤维5g，搅拌，降至室温，然后静置，除去上清液，过滤，烘干，即得。实施例4可降解组织修复材料本实施例提供了一种可降解组织修复材料，包括如下重量份的原料：本实施例还提供了一种制备上述可降解组织修复材料的方法，包括如下步骤：S1、称取重组蛛丝蛋白7g加入120ml的HFIP溶剂中溶解，然后加入壳聚糖30g和体积浓度为85％的醋酸溶液30ml，加热搅拌，加热的温度为80℃，得A混合物；S2、调节A混合物的pH值为6.5，然后向其中加入称取的肌醇六磷酸5g，加热搅拌，先控制加热的温度为60℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可降解组织修复材料，其特征在于，所述可降解组织修复材料的原料包括重组蛛丝蛋白；所述重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种可降解组织修复材料，其特征在于，所述可降解组织修复材料的原料包括重组蛛丝蛋白；所述重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的可降解组织修复材料，其特征在于，所述可降解组织修复材料包括如下重量份的原料：3.根据权利要求1或2所述的可降解组织修复材料，其特征在于，还包括干酪素12-20重量份。4.根据权利要求1-3任一项所述的可降解组织修复材料，其特征在于，还包括鱼精蛋白硫酸盐10-20重量份。5.根据权利要求1-4任一项所述的可降解组织修复材料，其特征在于，所述可降解组织修复材料的原料包括如下重量份的原料：6.一种制备权利要求1-5任一项所述的可降解组织修复材料的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、取重组蛛丝蛋白加入溶剂中溶解，然后加入壳聚糖和醋酸溶液，加热搅拌，得A混合物；S2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琳，李春，车锐，
申请(专利权)人：李琳，李春，
类型：发明
国别省市：江苏,32