单胺氧化酶测定试剂盒制造技术

单胺氧化酶测定试剂盒，涉及体外诊断试剂领域，本发明专利技术利用苄胺法原理体外定量测定人血清中单胺氧化酶的含量，改善了单胺氧化酶NADH的稳定性。本发明专利技术包括：三羟甲基氨基甲烷缓冲液20～150mmol/L；苄胺10～50mmol/L；α‑酮戊二酸1～20mmol/L；还原型辅酶0.1～10mmol/L；谷氨酸脱氢酶1.0～10KU/L；Triton X‑100 1～10g/L；EGTA 1～20mmol/L；液体生物防腐剂0.1～0.3ml/L。本发明专利技术的单胺氧化酶测定试剂盒在试剂中添加了适量成分的螯合剂和表面活性剂，增强试剂抗干扰能力以及酶稳定性。试剂稳定，测值结果准确可靠，本发明专利技术的试剂盒灵敏度高、特异性好，均优于现有试剂盒。

Monoamine oxidase assay kit

【技术实现步骤摘要】
单胺氧化酶测定试剂盒
本专利技术涉及体外诊断试剂
，具体涉及一种单胺氧化酶测定试剂盒。
技术介绍
血清单胺氧化酶(MAO)的测定有化学比色法、速率法等。常用方法包括以下几种：1.醛苯腙比色法：该方法通过MAO氧化苄胺，再与2,4二硝基苯肼作用生成醛苯腙在碱性条件下产生棕红色，于470nm比色测定，计算MAO的浓度。2.氯丙醇(MCDP)比色法：该法是通过MAO氧化苄胺产生过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶存在下与MCDP作用生成有色的甲烯蓝，于660nm处比色测定，计算MAO的浓度。此法需要加入终止液后测定，不宜于大批量标本的检测，而且MCDP见光易分解。3.速率法：单胺氧化酶(MAO)催化苄胺生成氨。氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸和辅酶反应生成谷氨酸，同时NADH还原成NAD+，引起340nm处吸光度的下降，通过测量辅酶吸光度下降的变化测定血清中MAO的活性。目前应用较多的是速率法。试剂盒主要组成成分有：Tris缓冲液、苄胺、α-酮戊二酸、还原型辅酶Ⅰ(NADH)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、稳定剂。采用速率法原理，通过样本中单胺氧化酶(MAO)与苄胺反应，生成氨；生成的氨在GLDH的作用下与α-酮戊二酸和辅酶反应；通过测量辅酶吸光度下降的变化测定血清中MAO的活性。这种类型的试剂盒中，NADH稳定性不好，长时间放置吸光度易下降，导致试剂失效。因此，需要优化反应体系，以提高NADH的稳定性。
技术实现思路
本专利技术提供一种单胺氧化酶测定试剂盒，其利用苄胺法原理体外定量测定人血清中单胺氧化酶的含量，改善了单胺氧化酶NADH的稳定性。本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的单胺氧化酶测定试剂盒，包括：浓度为20～150mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；浓度为10～50mmol/L的苄胺；浓度为1～20mmol/L的α-酮戊二酸；浓度为0.1～10mmol/L的还原型辅酶；浓度为1.0～10KU/L的谷氨酸脱氢酶；浓度为1～10g/L的TritonX-100；浓度为1～20mmol/L的EGTA；浓度为0.1～0.5ml/L的液体生物防腐剂。作为优选的实施方式，本专利技术的单胺氧化酶测定试剂盒，包括：作为优选的实施方式，所述液体生物防腐剂为Proclin300。作为优选的实施方式，所述还原型辅酶为还原型辅酶Ⅰ。本专利技术的有益效果是：本专利技术的单胺氧化酶测定试剂盒在试剂中添加了适量成分的螯合剂和表面活性剂，增强试剂抗干扰能力以及酶稳定性。试剂稳定，测值结果准确可靠，本专利技术的试剂盒灵敏度高、特异性好，均优于现有试剂盒。附图说明图1为实施例3中配方1的线性相关图。图2为实施例3中配方2的线性相关图。图3为实施例3中配方3的线性相关图。具体实施方式本专利技术的单胺氧化酶测定试剂盒，主要包括：浓度为20～150mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；浓度为10～50mmol/L的苄胺；浓度为1～20mmol/L的α-酮戊二酸；浓度为0.1～10mmol/L的还原型辅酶；浓度为1.0～10KU/L的谷氨酸脱氢酶；浓度为1～10g/L的TritonX-100；浓度为1～20mmol/L的EGTA；浓度为0.1～0.5ml/L的液体生物防腐剂。其中，液体生物防腐剂优选为Proclin300。其中，还原型辅酶优选为还原型辅酶Ⅰ。下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1稳定性试验(1)选取三组配方进行各方面性能的对比，配方1和配方2为现有试剂盒，配方3为本专利技术的试剂盒。配方1：配方2：配方3：(2)通过对三个配方进行稳定性试验，试验数据如表1所示，经试验证实，在空白吸光度上配方3在效期14个月内没有明显衰减，优于配方1和配方2，由此证明本专利技术的试剂盒的稳定性优于现有试剂盒。表1空白吸光度空白吸光度测值0个月3个月6个月9个月12个月14个月配方11.3361.3161.3300.8560.7560.623配方21.3361.2161.2301.0310.7860.663配方31.3361.3251.3381.3561.3451.356实施例2临床特异性试验(1)配方选择同实施例1。(2)三个配方分别与比对试剂测试40份临床样本，试验数据如表2、3和图1、图2和图3所示。经试验证实：配方3的相关系数以及阴阳符合率都优于配方1和配方2，由此证明本专利技术的试剂盒的特异性优于现有试剂盒。表2临床比对数据表测值单位：U/L表3阴阳符合率实施例3灵敏度试验配制浓度为S＝0.1、25、50、75、100U/L三个配方分别测试，试验数据如表4所示。配方1和配方2在各个浓度点的测值整体偏高，配方3在各个浓度点的测值准确度高，偏差小，配方3的灵敏度优于配方1和配方2，由此证明了本专利技术的试剂盒的灵敏度优于现有试剂盒。表4线性范围单位：U/L本专利技术公开了一种单胺氧化酶测定试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单胺氧化酶测定试剂盒，其特征在于，包括：浓度为20～150mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；浓度为10～50mmol/L的苄胺；浓度为1～20mmol/L的α‑酮戊二酸；浓度为0.1～10mmol/L的还原型辅酶；浓度为1.0～10KU/L的谷氨酸脱氢酶；浓度为1～10g/L的Triton X‑100；浓度为1～20mmol/L的EGTA；浓度为0.1～0.5ml/L的液体生物防腐剂。

【技术特征摘要】
1.单胺氧化酶测定试剂盒，其特征在于，包括：浓度为20～150mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；浓度为10～50mmol/L的苄胺；浓度为1～20mmol/L的α-酮戊二酸；浓度为0.1～10mmol/L的还原型辅酶；浓度为1.0～10KU/L的谷氨酸脱氢酶；浓度为1～10g/L的TritonX-100；浓度为1～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯丹，
申请(专利权)人：吉林瑞特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22