一种由霸王鞭提取巨大戟醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种由霸王鞭提取巨大戟醇的方法，该方法采用大戟科大戟属肉质灌木霸王鞭为原料，将霸王鞭干燥后进行粉碎，加甲醇水浸提；提取液浓缩后加入稀碱水解，水解完成后加酸中和，然后用乙酸乙酯萃取；萃取液旋蒸抽干得巨大戟醇粗品，巨大戟醇粗品经过两次柱层析和两次重结晶，得到含量大于99%的巨大戟醇成品；本发明专利技术采用霸王鞭作为原料，简化了分离提取工艺，降低了生产成本，本方法收率高，适用于工业化生产和市场推广应用。

A Method for Extracting Euphorbia macrophylla L. from Rhizoma Tyranniae

【技术实现步骤摘要】
一种由霸王鞭提取巨大戟醇的方法
本专利技术涉及一种由霸王鞭提取巨大戟醇的适合工业化生产的方法。
技术介绍
巨大戟醇具有显著的抗癌、抗病毒活性。其主要来源于大戟科大戟属植物大戟全草，甘遂或者千金子的一种萜类活性成分。巨大戟醇还可以作为合成巨大戟醇甲基丁烯酸酯（巨大戟醇当归酸酯）的一种关键中间体。巨大戟醇甲基丁烯酸酯凝胶(商品名:Picato(R))于2012年1月25日获美国FDA批准,用于光化性角化病(AK)的局部治疗。霸王鞭（学名：EuphorbiaroyleanaBoiss.）是大戟科，大戟属肉质灌木，具丰富的乳汁，茎高可达7米，叶片互生，密集于分枝顶端，倒披针形至匙形，先端钝或近平截，基部渐窄；侧脉不明显，肉质；托叶刺状，花序二歧聚伞状，生于枝的顶部；总苞杯状，黄色，横圆形，蒴果三棱状，平滑无毛，灰褐色；种子圆柱状，5-7月开花结果；分布于中国广西、四川和云南，在云南、四川的金沙江、红河河谷常成大片群落。该种全株及乳汁入药，具祛风、消炎、解毒之效。巨大戟醇结构新奇复杂，在过去的30多年里，其独特的结构和活性虽然引起了众多化学家的关注，也有相关全合成的报道，但合成路线大多步骤繁琐，得率低，难以适应日益增长的市场需求；LEOPharma公司与ScrippsResearchInstitute合作，由（+）-3-蒈烯通过14步最终合成得到巨大戟醇，但其合成路线仍然处于实验室阶段，且合成过程中需要用到剧毒试剂四氧化饿和二氧化硒，该工艺用于放大生产还有待进一步验证。目前市场上，巨大戟醇仍然主要来源于甘遂或者千金子植物的提取分离，提取巨大戟醇的现有技术或传统方法中存在如下问题：（1）目前，巨大戟醇的规模化生产中采用的基本是常规的提取工艺，这些方法不同程度上存在着提取时间长，效率低；（2）人工合成巨大戟醇尚未取得理想的效果；（3）甘遂或者千金子提取巨大戟醇成本较高。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种从霸王鞭中提取巨大戟醇的方法，该方法采用大戟科大戟属肉质灌木霸王鞭为原料，将霸王鞭干燥后进行粉碎至10～20目的粒度，加甲醇水浸提，合并提取液，浓缩后加入稀碱水解，加稀酸中和，然后用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，浓缩抽干得巨大戟醇粗品；巨大戟醇粗品经过两次柱层析和两次重结晶，得到含量大于98%的巨大戟醇成品；本专利技术采用霸王鞭作为原料，缩小了生产成本,简化了分离提取工艺，收率高，适用于工业化生产和市场推广应用。本专利技术的目的通过如下技术方案实现：（1）以干燥、粉碎的霸王鞭为原料，按质量体积比g:mL为1:4～6的比例在原料中加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，在室温下浸提6～8h，过滤；滤渣继续加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，反复浸泡处理1～2次，合并滤液，在65～75℃下浓缩至原滤液总体积的1/6～1/7；所述干燥霸王鞭粉碎至粒度为10～20目；（2）在步骤（1）浓缩液中加入稀碱进行水解，在室温下水解2～4h后，添加稀硫酸中和水解液pH值至6～7，然后加入乙酸乙酯反复萃取2～3次，收集合并有机溶剂层，旋蒸抽干，得巨大戟醇粗品；所述稀碱为0.05～0.1mol/L的氢氧化钠水溶液，浓缩液与稀碱的体积比为20～25:1，稀硫酸的体积浓度为10%；（3）在巨大戟醇粗品中添加甲醇溶解后过滤，滤液添加硅胶拌料胶，干燥后，干法上样至硅胶柱中进行第一次柱层析，用丙酮-石油醚混合液洗脱，采用TLC板监测流出液，收集合并含有巨大戟醇的流出液，浓缩抽干备用；所述按g:mL为1:1～2的比例添加甲醇溶解巨大戟醇粗品，按料胶质量比1:1.3～1.5的比例在滤液中添加硅胶拌料胶；巨大戟醇粗品与硅胶质量比为1:6～8；丙酮-石油醚混合液中丙酮与石油醚的体积比为1:3～4；（4）在步骤（3）浓缩物中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解，待溶清后加入氯仿等体积的石油醚，静置，室温下自然结晶8～12h，减压抽滤，晶体干燥后备用；（5）在步骤（4）干燥晶体中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解后，经湿法上样至硅胶柱中进行第二次柱层析，用氯仿-丙酮混合液洗脱，采用TLC板监测流出液，收集合并含有巨大戟醇的流出液，浓缩抽干备用；所述料胶质量比为1:36～40；氯仿-丙酮混合液中氯仿和丙酮为体积比为10～15:1；（6）将步骤（5）浓缩物用重蒸氯仿加热溶解后，将加热的重蒸石油醚加入到氯仿液中，边加边搅拌，冷却至-5℃～0℃下结晶8～24h，减压抽滤；晶体用同样方法再重结晶1次以上，即得含量大于98%的巨大戟醇成品；所述氯仿-石油醚混合液是重蒸氯仿和重蒸石油醚按体积比1:1的比例混合制得。本方法描述中未做出特别叙述却涉及使用的化学制剂均为工业级化学制剂。本专利技术优点和技术效果如下：（1）本专利技术利用霸王鞭作为提取原料，从中提取分离出巨大戟醇，降低了原料成本；（2）霸王鞭甲醇提取物中入稀碱，使霸王鞭中类似巨大戟醇的物质水解而得到巨大戟醇；(3)霸王鞭水解物通过两次柱层析，两次重结晶得到98%以上的巨大戟醇；其中丙酮-石油醚混合液使巨大戟醇粗品含量迅速富集，去相关除杂质，而第二次柱层析使用氯仿-丙酮混合液使微小杂质去除，达到有效分离，提纯巨大戟醇；本专利技术方法简单易操作，适于工业化生产和市场推广应用。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术保护范围不局限于所述内容。实施例1：本提取巨大戟醇的方法如下：1、在400L锅中加入50kg粉碎至10目的干燥霸王鞭，加入200L体积浓度为85%的甲醇水溶液，在室温下浸泡6小时，过滤，在滤渣中再加入200L体积浓度为85%的甲醇水溶液浸泡7小时，过滤；滤渣再加体积浓度85%的甲醇水溶液200L浸泡6小时，过滤，合并三次滤液600L；在65℃下600L提取液经浓缩得100L浓缩液；2、在100L浓缩液中加入4.8L氢氧化钠水溶液（0.05mol/L），室温下水解3小时，加入体积浓度10%的稀硫酸中和至pH值为6～7时，加入100L乙酸乙酯萃取，分出有机层后继续加100L乙酸乙酯萃取，合并的萃取液，浓缩抽干得浓缩物3451g；经检测巨大戟醇含量为0.29%；3、在3451g浓缩物加5L甲醇溶解后过滤，在滤液中加4486g硅胶，搅拌均匀后旋蒸抽干得料胶，上料胶至装有24.2kg的硅胶柱中，用丙酮-石油醚混合液（丙酮与石油醚的体积比为1:3）洗脱，通过TLC板监测到洗出液含有巨大戟醇组分（TLC展开剂为甲醇:二氯甲烷=1:8），收集合并含有巨大戟醇的流出液，旋蒸浓缩抽干得浓缩物316g；经检测含量为3.13%，收率为98.9%，硅胶用丙酮洗柱后可以反复使用多次；4、将316g浓缩物用632mL氯仿加热至55℃溶清后，加入632mL的石油醚，静置结晶8小时，减压抽滤，滤出晶体35g，母液抽干后再一次结晶，得另一份晶体12.5g，合并2份晶体，共计得47.5g经干燥箱干燥后得干燥晶体36.4g；经检测含量为25.8%，收率94.95%；5、将36.4g晶体用110mL氯仿加热至55℃溶清后，上样至装有1311g硅胶的硅胶柱中，用按氯仿-丙酮混合液洗脱（氯仿和丙酮为体积比为12:1），通过TLC板图监测（TLC展开剂为甲醇:二氯甲烷=本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种由霸王鞭提取巨大戟醇的方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）以干燥、粉碎的霸王鞭为原料，按质量体积比g:mL为 1:4～6的比例在原料中加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，在室温下浸提6～8h，过滤；滤渣中继续加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，反复浸泡处理1～2次，合并滤液，在65～75℃下浓缩至原滤液总体积的1/6～1/7；（2）在步骤（1）浓缩液中加入稀碱进行水解，在室温下水解2～4h后，添加稀硫酸中和水解液pH值至6～7，然后加入乙酸乙酯反复萃取2～3次，收集合并有机溶剂层，旋蒸抽干，得巨大戟醇粗品；（3）在巨大戟醇粗品中添加甲醇溶解后过滤，滤液添加硅胶拌料胶，干燥后，干法上样至硅胶柱中进行第一次柱层析，用丙酮‑石油醚混合液洗脱，采用TLC板监测流出液，收集合并含有巨大戟醇的流出液，浓缩抽干备用；（4）在步骤（3）浓缩物中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解，待溶清后加入氯仿等体积的石油醚，静置，室温下自然结晶8～12h，减压抽滤，晶体干燥后备用；（5）在步骤（4）干燥晶体中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解后，经湿法上样至硅胶柱中进行第二次柱层析，用氯仿‑丙酮混合液洗脱，采用TLC板监测流出液，收集合并含有巨大戟醇的流出液，浓缩抽干备用；（6）将步骤（5）浓缩物用重蒸氯仿加热溶解后，将加热的重蒸石油醚加入到氯仿液中，边加边搅拌，冷却至‑5℃～0℃下结晶8～24h，减压抽滤；晶体用同样方法再重结晶1次以上，即得巨大戟醇成品。...

【技术特征摘要】
1.一种由霸王鞭提取巨大戟醇的方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）以干燥、粉碎的霸王鞭为原料，按质量体积比g:mL为1:4～6的比例在原料中加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，在室温下浸提6～8h，过滤；滤渣中继续加入体积浓度80～85%的甲醇水溶液，反复浸泡处理1～2次，合并滤液，在65～75℃下浓缩至原滤液总体积的1/6～1/7；（2）在步骤（1）浓缩液中加入稀碱进行水解，在室温下水解2～4h后，添加稀硫酸中和水解液pH值至6～7，然后加入乙酸乙酯反复萃取2～3次，收集合并有机溶剂层，旋蒸抽干，得巨大戟醇粗品；（3）在巨大戟醇粗品中添加甲醇溶解后过滤，滤液添加硅胶拌料胶，干燥后，干法上样至硅胶柱中进行第一次柱层析，用丙酮-石油醚混合液洗脱，采用TLC板监测流出液，收集合并含有巨大戟醇的流出液，浓缩抽干备用；（4）在步骤（3）浓缩物中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解，待溶清后加入氯仿等体积的石油醚，静置，室温下自然结晶8～12h，减压抽滤，晶体干燥后备用；（5）在步骤（4）干燥晶体中按质量体积比g:mL为1:2～3的比例添加氯仿，在55℃～60℃下溶解后，经湿法上样至硅胶柱中进行第二次柱层析，用氯仿-丙酮混合液洗脱，采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：马回民，杨青春，赵泽熙，
申请(专利权)人：云南汉德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53