大球盖菇多糖的应用、植物免疫诱抗剂及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种大球盖菇多糖的新应用、以大球盖菇多糖为有效成分的植物免疫诱抗剂及应用。(1)本发明专利技术通过株高、干重、叶龄、叶绿素含量、根系活力、等指标有效证明了大球盖菇多糖能促进水稻生长、提高秧苗素质。(2)本发明专利技术的植物免疫诱抗剂可增加每穗粒数和结实率，从而实现水稻增产。(3)本发明专利技术的植物免疫诱抗剂对于水稻纹枯病和穗腐病的防治效果好，且在处理浓度下对水稻安全。

Application of Polysaccharides from Pleurotus ostreatus, plant immune elicitors and their applications

【技术实现步骤摘要】
大球盖菇多糖的应用、植物免疫诱抗剂及应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种大球盖菇多糖的应用、植物免疫诱抗剂及应用。
技术介绍
水稻纹枯病是由立枯丝核菌感染引起的真菌性病害，在我国普遍发生。发病后，水稻叶片枯死，结实率下降，千粒重减轻，秕谷较多，一般减产10-30％，严重时减产50％。目前已成为我国水稻发生面积最大的病害。对于该病的防控，多采用井冈霉素、丙环唑、烯唑醇、己唑醇等进行防治，但井冈霉素持效时间不长，且高质量浓度毒性较大，可能对土壤微生物造成不可恢复的影响。烯唑醇、丙环唑等唑类杀菌剂对水稻体内的赤霉素形成有影响，能抑制水稻茎节拔长。但这些杀菌农药在水稻上部3个拔长节间拔长期使用，特别是超量使用，可能影响这些节间的拔长，严重的可造成水稻抽穗不良，出现包颈现象，其中烯唑醇等药制的抑制作用更为明显。水稻穗腐病是一种真菌性病害，致病菌为多种真菌，其中，优势致病菌主要为镰刀菌、细交链孢菌、平脐孺孢菌和新月弯孢菌。水稻感染该病后其结实率降低，谷粒变色、腐坏、畸形，降低稻米的品质；病原菌产生的毒素影响农产品的质量安全。近年来，我国一些水稻产区的穗腐病发生日趋严重，且有效防治药剂较少。植物免疫诱抗剂又称植物疫苗，能够激活植物体内分子免疫系统，使植物自身产生抗菌物质，提高植物抗病性，同时还能激发植物体内的一系列代谢调控系统，具有促进植物生长和增加作物产量的作用。植物天然免疫具有预防性、系统性、稳定性、相对性、安全性等一系列优点，可以解决化学防治存在的病原菌抗药性、环境污染和对人畜副作用的问题，实现农产品无害化生产和农业可持续发展。食用菌多糖是一类具有高度生理活性植物免疫诱抗剂，可诱导寄主植株活性氧的释放和植保素的合成，产生诱导抗性而达到抑制病害作用。同时，食用菌多糖对植物体的蛋白质合成具有促进作用，使作物更加健壮，抗病性显著增强。目前我国实现商品化的食用菌源生物农药仅有香菇多糖和菇类蛋白多糖，能够防治水稻、西瓜、辣椒、番茄、茄子、烟草、马铃薯等作物的病毒病，但在植物真菌性和细菌性病害防治上应用不多。大球盖菇又名酒红色球盖菇、皱环球盖菇，属于担子菌门球盖菇属。其抗杂和抗逆能力较强，适应温度范围广，对纤维素、木质素降解能力强，可以在林地和农闲田进行栽培。近年来，大球盖菇在我国部分省市栽培面积不断扩大，福建、江西、四川、浙江等地均有大规模栽培。目前对大球盖菇生物学特性和栽培技术方面的研究比较成熟，此外发现其含有多糖、留醇、黄酮、酚类物质、凝集素等生物活性成分，具有抗氧化、抑菌、抑制肿瘤、降血糖等药理作用。现有研究成果表明，大球盖菇多糖能增强动物肌体免疫功能，具有抗肿瘤、抗氧化、缓解疲劳等功效，但对其在诱导植物抗性方面的功能研究尚未见报道。因此，有必要对大球盖菇多糖的功能做进一步地深入探究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种大球盖菇多糖的新应用，以及有效成分为大球盖菇多糖的植物免疫诱抗剂及该植物免疫诱导剂的应用。本专利技术提供了大球盖菇多糖在促进水稻幼苗生长或提高水稻秧苗素质中的应用。大球盖菇多糖处理下水稻的株高、根长、干重、较对照显著增加，幼苗的叶龄也有所增加，这说明：大球盖菇多糖对水稻幼苗具有显著的促生长作用。同时，经大球盖菇多糖处理后的水稻幼苗叶绿素含量和根系活力显著高于对照，说明大球盖菇多糖能提高秧苗的素质。其中，所述大球盖菇多糖的制备方法包括以下步骤：(1)将大球盖菇子实体磨粉后加水混合均匀；(2)加入木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶进行酶解；(3)酶解产物去除固体物质获得多糖提取液；(4)将多糖提取液去蛋白，再用乙醇沉淀多糖获得大球盖菇多糖。其中，步骤(2)中木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶按质量比2∶1∶1混合制成混合酶。酶解最合适的温度为55℃。步骤(4)中使用Sevag法除蛋白。本专利技术又提供了一种植物免疫诱抗剂，有效成分为大球盖菇多糖。优选的，所述的植物免疫诱抗剂，，包括质量浓度为100～150ppm的大球盖菇多糖，质量浓度为0.001～0.02％的表面活性剂，质量浓度为0.0006～0.002％的防腐剂。更优选的，所述表面活性剂为Tween-20，所述防腐剂为山梨酸钾。所述的植物免疫诱抗剂，其中，所述大球盖菇多糖的制备方法包括以下步骤：(1)将大球盖菇子实体磨粉后加水混合均匀；(2)加入木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶进行酶解；(3)酶解产物去除固体物质获得多糖提取液；(4)将多糖提取液去蛋白，再用乙醇沉淀多糖获得大球盖菇多糖。其中，步骤(2)中木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶按质量比2∶1∶1混合制成混合酶。酶解最合适的温度为55℃。步骤(4)中使用Sevag法除蛋白。本专利技术又提供了所述的植物免疫诱抗剂在通过增加水稻每穗粒数和结实率从而增加水稻产量中的应用。本专利技术又提供了所述的植物免疫诱抗剂在防治水稻纹枯病或穗腐病中的应用。本专利技术还提供了一种水稻幼苗的培养方法，包括：将水稻种子放入含有大球盖菇多糖的水溶液中进行浸渍，取出后，清洗干净，再进行种子催芽，得到水稻幼苗。优选的，所述大球盖菇多糖的浓度为100～150ppm；浸渍的时间为20～30h，温度为25～30℃。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术通过株高、干重、叶龄、叶绿素含量、根系活力、等指标有效证明了大球盖菇多糖能促进水稻生长、提高秧苗素质。(2)本专利技术的植物免疫诱抗剂可增加每穗粒数和结实率，从而实现水稻增产。(3)本专利技术的植物免疫诱抗剂对于水稻纹枯病和穗腐病的防治效果好，且在处理浓度下对水稻安全。具体实施方式实施例1大球盖菇多糖制备，采用复合酶法提取大球盖菇多糖，具体步骤如下：1.将大球盖菇子实体洗净，烘干，磨粉，过80目网筛获得大球盖菇菌粉；2.称取过筛的大球盖菇菌粉20g，放到烧杯中，加蒸馏水580mL混合均匀后置于55℃水浴锅中预热；3.将木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶按质量比2∶1∶1比例混合得到混合酶，称取0.12g混合酶，用5mL蒸馏水溶解后加入预热的大球盖菇菌粉水溶液；4.经55℃水浴2h；5.反应结束后将三角瓶放到沸水锅中，沸水浴10分钟以灭活酶，再冷却至室温获得提取液；6.将提取液放入离心管中，4000转/分钟离心，取上清液，即得到酶提取多糖上清液；7.用旋转蒸发仪浓缩上清液至1/4体积；8.Sevag法除蛋白，30mL上清液加入5mLSevag溶液(体积比4∶1的氯仿∶正丁醇溶液)，震荡20分钟，5000r/min离心10分钟，留取上清；重复抽提5-6次，直至蛋白去除干净；9.取上清，加入3倍体积无水乙醇沉淀过夜，8000rpm离心；去上清，干燥沉淀，得大球盖菇多糖。对上述提取得到的大球盖菇多糖进行成分及含量检测。大球盖菇多糖的单糖组分分析：通过液相色谱法分析了大球盖菇多糖的单糖组成，结果见表1。大球盖菇多糖主要由甘露糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖等单糖组成，其中葡萄糖组分含量最高，为111.83μg/mg。表1大球盖菇多糖的单糖组成分析单糖种类含量(μg/mg)甘露糖28.56核糖16.08鼠李糖31.38阿拉伯糖1.51木糖5.65葡萄糖111.83半乳糖37.72大球盖菇多糖分子量分布测定：利用角度激光光散射仪测定大球盖菇多糖的分子量分布，结果如表2所示。表2大球盖菇多糖的分子量分布大球本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.大球盖菇多糖在促进水稻幼苗生长或提高水稻秧苗素质中的应用。

【技术特征摘要】
1.大球盖菇多糖在促进水稻幼苗生长或提高水稻秧苗素质中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大球盖菇多糖的制备方法包括以下步骤：(1)将大球盖菇子实体磨粉后加水混合均匀；(2)加入木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶进行酶解；(3)酶解产物去除固体物质获得多糖提取液；(4)将多糖提取液去蛋白，再用乙醇沉淀多糖获得大球盖菇多糖。3.一种植物免疫诱抗剂，其特征在于，有效成分为大球盖菇多糖。4.如权利要求3所述的植物免疫诱抗剂，其特征在于，包括质量浓度为100～150ppm的大球盖菇多糖，质量浓度为0.001～0.02％的表面活性剂，质量浓度为0.0006～0.002％的防腐剂。5.如权利要求4所述的植物免疫诱抗剂，其特征在于，所述表面活性剂为Tween-20，所述防腐剂为山梨酸钾。6.如权利要求3～5任一所述的植...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖文斐，阮松林，忻雅，裘劼人，柴伟国，陈佳滢，
申请(专利权)人：杭州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33