具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸及其用途和组合物制造技术

公开了包含一种或多种具有溶菌酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。还提供了具有溶菌酶活性的多肽、编码多肽核酸构建体的多核苷酸、载体和包含这些多核苷酸的宿主细胞以及产生和使用这些多肽的方法。

Polypeptides with lysozyme activity, polynucleotides encoding them, their uses and compositions

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸及其用途和组合物序列表的引用本申请包含处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。
本专利技术涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。本专利技术还涉及具有溶菌酶活性的多肽，编码这些多肽的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
技术介绍
溶菌酶是一种由许多生物作为对抗细菌的防御性机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过裂解肽聚糖的糖苷键来水解细菌的细胞壁；肽聚糖是细菌中的一种重要的结构分子。在细菌的细胞壁被溶菌酶作用弱化后，由不平衡的渗透压导致细菌细胞溶解。溶菌酶天然存在于许多生物中，例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行类以及哺乳类。在哺乳类中，已经从鼻腔分泌物、唾液、眼泪、肠内容物、尿和乳中分离到溶菌酶。该酶裂解N-乙酰胞壁酸的1号碳与N-乙酰-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内，这两种碳水化合物聚合以形成许多微生物的细胞壁多糖。已经将溶菌酶分类为五种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy，www.cazy.org)：鸡蛋清溶菌酶(GH22)、鹅蛋清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4溶菌酶(GH24)、鞘氨醇单胞菌鞭毛蛋白(GH73)以及拟鞘孢属(Chalaropsis)溶菌酶(GH25)。来自家族GH23和GH24的溶菌酶主要从噬菌体中已知并且近来在真菌中得以鉴定。已经发现溶菌酶家族GH25与其他溶菌酶家族在结构上是不相关的。从鸡蛋清提取的溶菌酶是在商业市场可获得的主要产品，但不裂解例如金黄色葡萄球菌细胞壁中的N,6-O-二乙酰胞壁酸并且因此尤其不能溶解这一重要的人类病原体(MasschalckB,DeckersD,MichielsCW(2002),“Lyticandnonlyticmechanismofinactivationofgram-positivebacteriabylysozymeunderatmosphericandhighhydrostaticpressure[在大气压和高流体静力压下由溶菌酶灭活革兰氏阳性细菌的溶解和非溶解机制]”,JFoodProt.[食品保护杂志]65(12):1916-23)。传统上，抗微生物生长促进剂(AGP)已经用于动物的生长促进，并且可能通过防止病原体诸如产气荚膜梭菌的低水平感染来起作用。然而，AGP越来越多地被禁止在全世界范围内使用，并且因此促进动物生长但不是AGP的新解决方案是有利益性的。WO2013/076253和WO2005/080559公开了用于动物饲料的GH25溶菌酶。然而，所述溶菌酶在降解溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)细胞壁(典型的溶菌酶活性测定)方面不具有高活性，并且需要更具活性的溶菌酶。本专利技术的目的是提供新的和更具活性的溶菌酶，其可适用于动物健康。
技术实现思路
本专利技术涉及对溶壁微球菌细胞壁中发现的肽聚糖具有改善的溶菌酶活性的多肽。本专利技术的溶菌酶都是GH25溶菌酶，并且都具有改善的裂解溶壁微球菌的细菌细胞壁的能力，从而使得它们适合用于动物饲料以改善动物健康。与WO2013/076253中描述的溶菌酶(其在本文中描述为SEQIDNO39)相比，本专利技术的溶菌酶具有改善的活性。令人惊讶地发现大部分GH25溶菌酶还具有针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性。约氏乳杆菌是动物肠道菌群的重要细菌。不受特定理论的束缚，据信通过酶促裂解部分降解的细菌细胞壁从肠道菌群中去除死亡的约氏乳杆菌细胞是动物肠道健康的重要贡献者。本专利技术的一个方面涉及具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQIDNO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQIDNO:6的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(c)与SEQIDNO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(d)与SEQIDNO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(e)与SEQIDNO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(f)与SEQIDNO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(g)与SEQIDNO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(h)与SEQIDNO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(i)与SEQIDNO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(j)与SEQIDNO:30的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(k)与SEQIDNO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(l)与SEQIDNO:38的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；(m)多肽的变体，该多肽选自下组，该组由以下组成：SEQIDNO:3、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:15、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21、SEQIDNO:24、SEQIDNO:27、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33和SEQIDNO:38，其中该变体具有溶菌酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；(n)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、或(m)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和(p)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽的具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。本专利技术的另一个方面涉及具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQIDNO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQIDNO:6的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(c)与SEQIDNO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(d)与SEQIDNO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(f)与SEQIDNO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(g)与SEQIDNO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(h)与SEQIDNO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(k)与SEQIDNO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(l)与SEQIDNO:38的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；(m)多肽的变体，该多肽选自下组，该组由以下组成：SEQIDNO:3、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:15、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21、SEQIDNO:24、SEQIDNO:27、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33和SEQIDNO:38，其中该变体具有溶菌酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(l)与SEQ ID NO:38的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；(m)多肽的变体，该多肽选自下组，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:38，其中该变体具有溶菌酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；(n)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽以及N‑末端和/或C‑末端His‑标签和/或HQ‑标签；(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、或(m)的多肽以及1至10个氨基酸的N‑末端和/或C‑末端延伸；和(p)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽的具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.21 CN PCT/CN2016/111320;2017.03.08 CN PCT/1.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQIDNO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQIDNO:6的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(c)与SEQIDNO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(d)与SEQIDNO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(e)与SEQIDNO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(f)与SEQIDNO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(g)与SEQIDNO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(h)与SEQIDNO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(i)与SEQIDNO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(j)与SEQIDNO:30的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(k)与SEQIDNO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(l)与SEQIDNO:38的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；(m)多肽的变体，该多肽选自下组，该组由以下组成：SEQIDNO:3、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:15、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21、SEQIDNO:24、SEQIDNO:27、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33和SEQIDNO:38，其中该变体具有溶菌酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；(n)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、或(m)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和(p)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)的多肽的具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。2.根据权利要求1所述的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQIDNO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQIDNO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(c)与SEQIDNO:9的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(d)与SEQIDNO:12的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(e)与SEQIDNO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(f)与SEQIDNO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(g)与SEQIDNO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(h)与SEQIDNO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(i)与SEQIDNO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(j)与SEQIDNO:30的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(k)与SEQIDNO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和(l)与SEQIDNO:38的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。3.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：(a)与SEQIDNO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；(b)与SEQIDNO:6的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(c)与SEQIDNO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(d)与SEQIDNO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(f)与SEQIDNO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(g)与SEQIDNO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(h)与SEQIDNO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(k)与SEQIDNO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；(l)与SEQIDNO:38的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；(m)多肽的变体，该多肽选自下组，该组由以下组成：SEQIDNO:3、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:15、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21、SEQIDNO:24、SEQIDNO:27、SEQIDNO:30、SEQIDNO:33和SEQIDNO:38，其中该变体具有溶菌酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晔，M·克劳森，K·M·施诺尔，L·K·斯科乌，S·尼曼德格拉鲁，M·T·科恩，P·B·奥尔森，李明，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK