一种碱性磷酸酶的提取方法技术

一种碱性磷酸酶的提取方法，属于酶学领域。所述方法如下：1、取新鲜猪（牛）小肠，刮取肠粘膜。2、将刮取下来的肠粘膜均匀的薄涂在平皿中于冻干机中进行冻干，冻干后磨成粉。3、将肠粘膜装入超临界CO2萃取设备的进料釜中，萃取，完成后保留釜中肠粘膜粗粉。4、向肠粘膜粗粉中加入水，匀质，调pH6.5，加硫酸铵和丙酮，于4℃静置40min，9000r/min离心20min，取上清液加入丙酮，静置，离心，取最终的沉淀物冻干。本发明专利技术的优点是：肠粘膜经过冷冻干燥后，去除掉多余的水分，再经超临界CO2萃取，去除掉多余的脂肪，同时实现了排除水分和脂肪的干扰，并且还具有一定的杀菌作用，较传统工艺要具有更好的碱性磷酸酶的提取效果。

A Method for Extracting Alkaline Phosphatase

【技术实现步骤摘要】
一种碱性磷酸酶的提取方法
本专利技术属于酶学领域，具体涉及一种碱性磷酸酶的提取方法。
技术介绍
碱性磷酸酶（ALP或AKP）是一种单脂磷酸水解酶，广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织，最终都经肝脏向胆外排出，属于同源二聚体酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5'磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5'-P末端转换成5'-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同功酶，即组织非特异性碱性磷酸酶（TNAP）（主要表达于肝、骨骼和肾）、胎盘碱性磷酸酶（PLAP）、生殖细胞碱性磷酸酶（GCAP）和肠碱性磷酸酶（IAP）。IAP是一种经糖基磷脂酰肌醇键锚定于肠上皮细胞顶膜上的糖蛋白。在生理情况下，餐后分泌的胰磷脂酶A2水解胆汁中卵磷脂所生成的溶血卵磷脂能特异性加速IAP经肠上皮细胞顶膜释放入肠腔。肠屏障由四个部分组成，即肠黏膜上皮细胞与细胞间紧密连接构成的机械屏障；肠黏膜上皮细胞分泌的黏液、胃肠道分泌的消化液以及肠道共生菌产生的抑菌物质等组成的化学屏障；肠相关淋巴组织（GALT）及其分泌的免疫活性物质构成的免疫屏障；肠道共生菌与宿主微环境形成的相互依赖、相互作用的生物屏障。肠屏障功能的维持有赖于其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：所述的方法具体步骤如下：步骤一：取新鲜猪小肠或牛小肠，清洗干净，刮取肠粘膜；步骤二：将刮取下来的肠粘膜均匀的涂在平皿中于冻干机中进行冻干，厚度为3~5mm，冻干后磨成粉，粒度不超过100目；步骤三：将上述磨成粉的肠粘膜装入超临界CO2萃取设备的进料釜中，设置萃取压力为20MPa，分离压力为8MPa，萃取分离同时进行，总时间为1.5~2h，得到肠粘膜粗粉；步骤四：按照1：0.8：0.05：0.47的体积比取步骤三得到的肠粘膜粗粉、水、硫酸铵和丙酮，然后向肠粘膜粗粉中加入水，匀质，调节pH为6.5，加入硫酸铵和丙酮，于4℃静置40min，9000r/min...

【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：所述的方法具体步骤如下：步骤一：取新鲜猪小肠或牛小肠，清洗干净，刮取肠粘膜；步骤二：将刮取下来的肠粘膜均匀的涂在平皿中于冻干机中进行冻干，厚度为3~5mm，冻干后磨成粉，粒度不超过100目；步骤三：将上述磨成粉的肠粘膜装入超临界CO2萃取设备的进料釜中，设置萃取压力为20MPa，分离压力为8MPa，萃取分离同时进行，总时间为1.5~2h，得到肠粘膜粗粉；步骤四：按照1：0.8：0.05：0.47的体积比取步骤三得到的肠粘膜粗粉、水、硫酸铵和丙酮，然后向肠粘膜粗粉中加入水，匀质，调节pH为6.5，加入硫酸铵和丙酮，于4℃静置40min，9000r/min离心20min，取上清液额外再加入其1.07体积的丙酮，于4℃静置40min，9000r/min离心20min，取最终的沉淀物冻干即可...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘容旭，杨红，李志如，谢智鑫，王子欢，王宇聪，刘丹怡，杨宏博，王钰堡，韩建春，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23