一种加入LPS的新的NAFLD细胞模型的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种加入LPS的新的NAFLD的细胞模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)细胞增殖与毒性实验：A.实验分组：分成实验组一和实验组二两个分组；实验组一：将浓度分别为200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL、1600ng/mL的LPS加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h，筛选LPS的浓度；实验组二：将0.4mM的棕榈酸分别按照200ng/mL+PA、400ng/mL+PA、800ng/mL+PA、1600ng/mL+PA加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h。本发明专利技术具有如下优点：在传统NAFLD细胞模型基础之上，综合考虑消化道菌群代谢产物LPS的影响对NAFLD疾病发生发展的影响，为疾病的预防和临床治疗提供了更为可靠的依据，亦为相关疾病的体外机制研究提供了细胞模型和实验基础。

Preparation of a new NAFLD cell model with LPS

【技术实现步骤摘要】
一种加入LPS的新的NAFLD细胞模型的制备方法
本专利技术涉及细胞模型
，具体是指一种加入LPS的新的NAFLD的细胞模型的制备方法。
技术介绍
现有技术为单纯棕榈酸(Palmiticacid,PA)处理细胞，从而进行非酒精性脂肪肝(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)造模，该方法未考虑消化道菌群代谢产物的致炎作用对NAFLD产生的影响，不能够准确模拟NAFLD在机体内的发生发展过程，代表性欠佳，理论与技术落后，不符合现有的科学认知。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为一种加入LPS的新的NAFLD的细胞模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)细胞增殖与毒性实验：A.实验分组：分成实验组一和实验组二两个分组；实验组一：将浓度分别为200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL、1600ng/mL的LPS加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h，筛选LPS的浓度；实验组二：将0.4mM的棕榈酸分别按照200ng/mL+PA、400ng/mL+PA、800ng/mL+PA、1600ng/mL+PA加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种加入LPS的新的NAFLD的细胞模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)细胞增殖与毒性实验：A.实验分组：分成实验组一和实验组二两个分组；实验组一：将浓度分别为200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL、1600ng/mL的LPS加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h，筛选LPS的浓度；实验组二：将0.4mM的棕榈酸分别按照200ng/mL+PA、400ng/mL+PA、800ng/mL+PA、1600ng/mL+PA加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h；B.按步骤A操作对L02细胞进行消化，计数，将L02细胞以4×10

【技术特征摘要】
1.一种加入LPS的新的NAFLD的细胞模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)细胞增殖与毒性实验：A.实验分组：分成实验组一和实验组二两个分组；实验组一：将浓度分别为200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL、1600ng/mL的LPS加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h，筛选LPS的浓度；实验组二：将0.4mM的棕榈酸分别按照200ng/mL+PA、400ng/mL+PA、800ng/mL+PA、1600ng/mL+PA加入L02细胞中，分别培养24h、48h和72h；B.按步骤A操作对L02细胞进行消化，计数，将L02细胞以4×103个/孔的密度均匀接种于96孔培养板中，24h后，按实验组一、实验组二放入细胞培养箱继续培养24h、48h和72h；C.在分别培养24h、48h和72h后，每孔加入20μLMTT溶液，放入37℃、5％CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养4h；D.培养结束后抽弃孔内液体，加入150μLDMSO，摇床摇匀15min；E.酶标仪波长570nm检测各孔OD值，计算细胞存活率；(2)Hoechst33342荧光染色：A.将L02细胞按步骤(1)中的方法以密度为2×105个/孔接种于预先放有灭菌盖玻片的24孔细胞培养板中；B.24h后抽弃培养基，按照实验组二处理细胞24h；C.处理24h后抽弃培养基，每孔加入PBS1mL后置于摇床5min清洗两遍；D.清洗后每孔加入4％多聚甲醛溶液300μL，固定15min；E.当固定妥后，每孔加入浓度为10μg/mL的Hoechst33342荧光染液500μL，避光条...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，李屹，王晨薇，黄轲，陈军麟，卢纪元，
申请(专利权)人：刘斌，
类型：发明
国别省市：甘肃,62