包含非成蛋白质性的氨基酸的二肽制造技术

描述了包含非成蛋白质性的氨基酸的二肽、制备所述二肽的方法、和在制备包含一个或多个非成蛋白质性的氨基酸的多肽或蛋白的方法中使用所述二肽的方法。

Dipeptides containing non-proteinable amino acids

【技术实现步骤摘要】
包含非成蛋白质性的氨基酸的二肽本申请是以下申请的分案申请：申请日：2012年12月20日；申请号：201280064827.8(PCT/EP2012/076408)；专利技术名称：同上。
本专利技术涉及包含非成蛋白质性的(non-proteogenic)氨基酸的二肽、制备所述二肽的方法、和使用所述二肽生产包含一个或多个非成蛋白质性的氨基酸的多肽或蛋白的方法。
技术介绍
已经批准大量多肽和蛋白用于医疗实践。所述多肽和蛋白可以通过重组DNA技术在合适的宿主细胞中生产，或它们可以通过非常确定的肽合成技术合成生产。但是，天然的多肽和蛋白倾向于表现出高清除率，这对于许多在延长的时间段内需要多肽的高血浆浓度的临床适应症而言是不可接受的。天然的多肽和蛋白可以从天然形式改变成类似物及其衍生物，以改变或增强某些特征。例如，可以将非成蛋白质性的氨基酸(即非天然氨基酸)添加或置换进多肽或蛋白中，以例如赋予对抗水解(诸如DPP-IV对GLP-1肽的水解)的某种保护。可以如下制备含有一个或多个非成蛋白质性的氨基酸的多肽，诸如N端修饰的GLP-1类似物：经由化学合成以逐步方式引入非成蛋白质性的氨基酸(一个或多个)，其中对于要向多肽或蛋白添加的每个氨基酸应用偶联步骤和随后的去保护步骤。但是，所述逐步合成是费时的和不方便的，它可能导致许多副产物的形成，可能需要中间纯化步骤，且它可能导致某些氨基酸残基（诸如组氨酸残基）的大量外消旋化。可替换地，可以将包含非成蛋白质性的氨基酸(一个或多个)的肽片段偶联至剩余的多肽或蛋白上，其中在所述方法中使用被完全保护的片段，例如在N端氨基和侧链氨基上被保护的片段。但是，这样的肽片段可能不溶于水性介质中，从而限制了它的应用。此外，如果在所述片段中存在正交保护基，需要几个去保护步骤，且如果分离的话，合成步骤之间的中间纯化可能是必要的，并且可能发生中间分离的问题。WO2009/083549涉及一种用于制备含有非成蛋白质性的氨基酸的GLP-1类似物和衍生物的方法。专利申请WO2007/147816A1和WO2010/125079A2涉及肽片段的合成偶联。Bourgault,S.等人在PEPTIDES,第29卷,第6(1)期,2008年6月,第919-932页中描述了常规肽化学的用途。仍然需要这样的肽片段：其用在改进的用于得到含有一个或多个非成蛋白质性的氨基酸的多肽的方法中。
技术实现思路
本专利技术涉及化学式1的二肽：其中R1是H或氨基保护基，且R2是氨基保护基；或者R1是可除去的烷基，且R2是H或可除去的烷基；或者R1和R2共同形成环；R3是H或与羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子；且R4不存在或是酸性盐。也预见到一种用于生产本专利技术的二肽的方法。此外，描述了一种用于得到包含一个或多个非成蛋白质性的氨基酸的多肽或蛋白的方法，其中所述方法包括使本专利技术的二肽与多肽或蛋白反应的步骤。本专利技术还可以解决从示例性实施方案的公开内容显而易见的其它问题。具体实施方式本专利技术涉及包含非成蛋白质性的氨基酸的二肽，其中所述二肽适合用于偶联至多肽或蛋白。在一个方面，本专利技术的二肽具有游离的未保护的咪唑基基团。在一个方面，本专利技术的二肽是呈羧酸盐的形式。在本专利技术的一个方面，所述二肽具有化学式1：其中R1是H或氨基保护基，例如，但不限于，Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde或Nps，且R2是氨基保护基，例如，但不限于，Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde或Nps；或者R1是可除去的烷基，例如，但不限于，苄基或叔丁基，且R2是H或可除去的烷基，例如，但不限于，苄基或叔丁基；或者R1和R2共同形成环，例如，但不限于，酞酰亚胺（phatalimide）或1,3,5-二噁嗪；R3是H或与羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子，诸如碱金属阳离子或碱土金属阳离子；和R4不存在或是酸性盐，诸如但不限于TFA、HCl、HBr的盐或硫酸氢盐。在本专利技术的一个方面，R1是H，且R2是氨基保护基，例如，但不限于，Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde或Nps；或R1和R2共同形成环，例如，但不限于，酞酰亚胺（phatalimide）或1,3,5-二噁嗪；或R1是可除去的烷基，例如，但不限于，苄基或叔丁基，且R2是H或可除去的烷基，例如，但不限于，苄基或叔丁基。在一个方面，R1是H，且R2是碱敏感的保护基，例如，但不限于，Fmoc。在一个方面，R1是H，且R2是Fmoc。在本文中使用的术语“氨基保护基”应理解为，肽化学领域的技术人员已知的保护基(替代性术语:保护基团)，其通过胺(官能)基团的化学修饰而引入二肽中，以便防止在化学反应过程中在非常相同的胺上的反应。在本文中使用的术语“可除去的烷基”应理解为，可以通过催化氢解方法除去的烷基，诸如但不限于苄基。在本专利技术的一个方面，R1是苄基，且R2是H。R3可以是氢、仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子，其中所述仲铵阳离子、所述叔铵阳离子或所述金属阳离子与它附近的羧酸根基团形成盐。在本专利技术的一个方面，所述金属阳离子是碱金属阳离子或碱土金属阳离子。在一个方面，R3选自：H、锂阳离子、钠阳离子、钾阳离子、铯阳离子、钙阳离子、镁阳离子、从仲胺衍生出的阳离子（诸如但不限于N,N-二环己基铵阳离子、N,N-二叔丁基铵阳离子）或从叔胺衍生出的阳离子（诸如但不限于三乙基铵阳离子）。在本专利技术的一个方面，R3是H。在一个方面，R3与它附近的羧酸根基团一起形成盐，诸如但不限于，单价盐、二价盐或从胺衍生出的盐。根据本专利技术的一个方面，R3可以是与它附近的羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子，诸如碱金属阳离子或碱土金属阳离子。R3和羧酸根基团之间的盐可以是例如：单价盐，诸如但不限于碱金属盐，包括锂盐、钠盐、钾盐或铯盐，二价盐，诸如但不限于钙盐或镁盐，从仲胺（例如，但不限于，N,N-二环己基胺或N,N-二叔丁基胺）衍生出的盐，或从叔胺（例如，但不限于，三乙胺）衍生出的盐。专利技术人已经惊人地发现，本专利技术的二肽（其中R3是H，或是与它附近的羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子，且R4不存在或是酸性盐）在例如水性酰化反应（其中使所述二肽与肽或多肽反应）中是特别好的。在本专利技术的一个方面，R4不存在。在一个方面，R4是与二肽形成盐的酸性组分。在一个方面，R4选自：TFA、HCl、HBr和硫酸氢盐。在一个方面，R4是TFA。在一个方面，本专利技术的二肽是化学式2的对映异构的或外消旋的二肽Fmoc-His-Aib-OH其中*指示二肽的手性中心，且R4不存在或是酸性组分，例如，但不限于，TFA、HCl、HBr或硫酸氢盐，所述酸性组分与所述二肽形成盐。在一个方面，R4是TFA。在本文中，在化合物样品中术语“对映异构的”应理解为，在样品中过量的一种对映异构形式，即L-形式或D-形式。在本文中使用的术语“外消旋的”应理解为，在化合物样品中等量的L-形式和D-形式。作为一个非限制性例子，化学式2的对映异构的Fmoc-His-A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.化学式1的二肽：

【技术特征摘要】
2011.12.29 EP 11195998.7;2012.02.01 US 61/5935241.化学式1的二肽：其中R1是H或氨基保护基，且R2是氨基保护基；或者R1是可除去的烷基，且R2是H或可除去的烷基；或者R1和R2共同形成环；R3是H或与羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子或金属阳离子；且R4不存在或是酸性盐。2.权利要求1的二肽，其中所述氨基保护基选自：Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde和Nps。3.权利要求1或2的二肽，其中所述可除去的烷基选自：苄基和叔丁基。4.权利要求1-3中的任一项的二肽，其中，当R1和R2共同形成环时，所述共同形成的环选自：酞酰亚胺和1,3,5-二噁嗪。5.权利要求1-4中的任一项的二肽，其中R1是H或选自以下的氨基保护基：Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde和Nps，且R2是选自以下的氨基保护基：Boc、Trt、Bpoc、Fmoc、Nsc、Cbz、Alloc、oNBS、pNBS、dNBS、ivDde和Nps；或者R1是选自苄基和叔丁基的可除去的烷基，且R2是H或选自苄基和叔丁基的可除去的烷基；或者R1和R2共同形成选自以下的环：酞酰亚胺和1,3,5-二噁嗪；R3是H或与羧酸根基团形成盐的仲铵阳离子、叔铵阳离子、碱金属阳离子或碱土金属阳离子；且R4不存在，或是选自以下的酸性盐：TFA的盐、HC...

【专利技术属性】
技术研发人员：C克里斯坦森，M劳恩克杰，R塞维林森，JC诺里尔德，
申请(专利权)人：诺沃—诺迪斯克有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK