亨廷顿病的AAV治疗制造技术

本公开的方面涉及用于治疗亨廷顿病的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了靶向亨廷顿蛋白基因(HTT)的干扰核酸(例如，人工miRNA)和使用其治疗亨廷顿病的方法。

AAV treatment of Huntington's disease

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】亨廷顿病的AAV治疗相关申请本申请要求35U.S.C.119(e)的于2016年9月22日提交的题为“AAVTREATMENTOFHUNTINGTON'SDISEASE”的美国临时申请序列号62/398,487的申请日的权益，其全部内容通过引用并入本文。联邦政府资助的研究本专利技术是在国立卫生研究院授予的NS038194的政府支持下完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。
技术介绍
亨廷顿病(HD)是一种破坏性的遗传性神经退行性疾病，由亨廷顿蛋白基因外显子1中CAG重复区的扩增引起。虽然亨廷顿蛋白(HTT)在全身表达，但聚谷氨酰胺扩展的蛋白特别对纹状体中的中间多棘神经元及其皮质连接有毒。患者患有包括抑郁和焦虑在内的情绪症状，以及特征性的运动障碍和舞蹈病。亨廷顿病目前无法治愈；治疗选择仅限于改善疾失调状。
技术实现思路
本公开的多个方面涉及用于治疗亨廷顿病(HD)的组合物和方法。在一些实施方案中，提供了抑制性核酸(例如，miRNA，例如人工miRNA)，其特异性地杂交并抑制人类亨廷顿蛋白(HTT)的表达。因此，在一些方面，本公开提供了分离的核酸，其包含或编码在SEQIDNO：2-10或21-22任一个中记载的序列。在一些实施方案中，人类亨廷顿基因包含SEQIDNO：1所示的序列。在一些实施方案中，本公开提供与SEQIDNO：1的至少两个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25)连续碱基互补的核酸(例如，miRNA)。在一些方面，本公开提供了分离的核酸，其包含：包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)或其变体的第一区域；和，包含编码一个或多个miRNA的转基因的第二区域。在一些实施方案中，编码各miRNA的序列包含侧接编码miRNA骨架序列的序列的如SEQIDNO：2-10任一项所述的序列。在一些实施方案中，每个miRNA骨架序列是mir-155骨架序列，mir-30骨架序列或mir-64骨架序列。在一些实施方案中，转基因还包含编码启动子的核酸序列。在一些实施方案中，启动子是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子或U6启动子。在一些实施方案中，转基因还包含编码蛋白的核酸序列。在一些实施方案中，蛋白是治疗性蛋白(例如，非突变的亨廷顿蛋白)或报告蛋白(例如，荧光蛋白，例如GFP)。在一些实施方案中，一个或多个miRNA位于转基因的非翻译部分。在一些实施方案中，非翻译部分是内含子。在一些实施方案中，非翻译部分位于编码蛋白的核酸序列的最后一个密码子和poly-A尾序列之间。在一些实施方案中，非翻译部分位于启动子序列的最后一个核酸碱基和poly-A尾序列的第一个碱基之间。在一些实施方案中，分离的核酸还包含第三区域，其包含第二腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)或其变体。在一些实施方案中，第一或第二ITR变体缺乏功能性末端解析位点(terminalresolutionsite，TRS)，任选地其中ITR变体是ΔTRSITR。在一些实施方案中，至少一个miRNA与人类亨廷顿基因杂交并抑制其表达。在一些方面，本公开提供了包含如本公开所述的分离的核酸的载体。在一些实施方案中，载体是质粒。在一些方面，本公开提供了宿主细胞，其包含如本公开所述的分离的核酸或载体。在一些方面，本公开提供了重组AAV(rAAV)，其包含：衣壳蛋白；和，如本公开所述的分离的核酸。在一些实施方案中，衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白。在一些实施方案中，衣壳蛋白包含SEQIDNO：20所示的序列。在一些实施方案中，rAAV是自身互补的AAV(scAAV)。在一些实施方案中，配制rAAV用于递送至中枢神经系统(CNS)。本公开的多个方面涉及能够减少(例如，抑制)致病性亨廷顿基因表达并因此可用于治疗亨廷顿病的分离的核酸。因此，在一些方面，本公开提供了在有此需要的受试者中治疗亨廷顿病的方法，该方法包括向患有亨廷顿病或有发展亨廷顿病风险的受试者施用治疗有效量的如本公开所述的分离的核酸或rAAV。在一些实施方案中，受试者包含具有超过36个CAG重复、超过40个重复或超过100个重复的亨廷顿基因。在一些实施方案中，受试者小于20岁，或被诊断为患有青少年HD。在一些实施方案中，施用导致分离的核酸或rAAV递送至受试者的中枢神经系统(CNS)。在一些实施方案中，施用是通过注射，任选静脉内注射或纹状体内(intrastriatal)注射。在一些方面，本公开提供了包含编码一个或多个miRNA的转基因的分离的核酸，其中编码每个miRNA的转基因的序列包含SEQIDNO：7或8所示的侧接miRNA骨架序列的序列。在一些实施方案中，每个miRNA骨架序列是mir-155骨架序列、mir-30骨架序列或mir-64骨架序列。在一些实施方案中，转基因包含启动子。在一些实施方案中，启动子是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子或U6启动子。在一些实施方案中，转基因包含SEQIDNO：21或22所示的序列。在一些实施方案中，转基因侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复序列(ITR)或其变体。在一些实施方案中，ITR变体缺乏功能性末端解析位点(terminalresolutionsite,TRS)。在一些实施方案中，缺乏TRS的ITR变体是ΔTRSITR。在一些方面，本公开提供一种包含含有编码一个或多个miRNA的转基因的分离的核酸的载体，其中编码每个miRNA的转基因的序列包含SEQIDNO：7或8所示的侧接miRNA骨架序列的序列。在一些实施方案中，载体是质粒。。在一些实施方案中，转基因的每个miRNA骨架序列均是mir-155骨架序列、mir-30骨架序列或mir-64骨架序列。在一些实施方案中，转基因包含启动子。在一些实施方案中，启动子是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子或U6启动子。在一些实施方案中，转基因包含SEQIDNO：21或22所示的序列。在一些实施方案中，转基因侧接腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体。在一些实施方案中，ITR变体缺乏功能性末端解析位点(TRS)。在一些实施方案中，缺乏TRS的ITR变体是ΔTRSITR。在一些方面，本公开提供一种重组AAV(rAAV)，其包含衣壳蛋白和包含编码一个或多个miRNA的转基因的分离的核酸，其中编码每个miRNA的转基因的序列包含SEQIDNO：7或8所示的侧接miRNA骨架序列的序列。在一些实施方案中，转基因侧接全长AAVITR序列。在一些实施方案中，转基因侧接全长AAVITR和ΔTRSITR。在一些实施方案中，衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白。在一些实施方案中，衣壳蛋白包含SEQIDNO：20所示的序列。在一些方面，本公开提供了在有此需要的受试者中治疗亨廷顿病的方法，该方法包括向患有亨廷顿病或有发展亨廷顿病风险的受试者施用治疗有效量的如本文所述的rAAV(例如，包含编码一个或多个miRNA的转基因的rAAV，其中编码每个miRNA的转基因的序列包含SEQIDNO：7或8所示的侧接miRNA骨架序列的序列)。在一些实施方案中，分离的核酸的转基因侧接全长AAVITR序列。在一些实施方案中，转基因侧接全长AAVITR和ΔTRSITR。在一些本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的核酸，包含：(i)包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的第一区域；和，(ii)包含编码一个或多miRNA的转基因的第二区域，其中每个miRNA均包含与SEQ ID NO：1互补的种子序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.22 US 62/398,4871.一种分离的核酸，包含：(i)包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的第一区域；和，(ii)包含编码一个或多miRNA的转基因的第二区域，其中每个miRNA均包含与SEQIDNO：1互补的种子序列。2.一种分离的核酸，包含：(i)包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的第一区域；和，(ii)包含编码一个或多个miRNA的转基因的第二区域，其中每个miRNA均由包含SEQIDNO：2-10中任一所示的且侧接miRNA骨架序列的序列的序列所编码。3.一种分离的核酸，包含：(i)编码第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的第一区域；和，(ii)包含编码一个或多个miRNA的转基因的第二区域，其中每个miRNA均包含与SEQIDNO：1所示序列的至少2个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25)连续碱基互补并侧接miRNA骨架序列的序列。4.如权利要求2或3所述的分离的核酸，其中每个miRNA骨架序列均是mir-155骨架序列、mir-30骨架序列或mir-64骨架序列。5.如权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸，其中所述转基因包含启动子。6.如权利要求5所述的分离的核酸，其中启动子是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子或U6启动子。7.如权利要求1至6中任一项所述的分离的核酸，其中所述转基因进一步编码蛋白。8.如根据权利要求1至7中任一项所述的分离的核酸，其中所述一个或多个miRNA位于所述转基因的非翻译部分中。9.如权利要求7所述的分离的核酸，其中非翻译部分是内含子。10.如权利要求8所述的分离的核酸，其中非翻译部分位于编码蛋白的核酸序列的最后一个密码子和poly-A尾序列之间，或者位于启动子序列的最后一个核苷酸碱基和poly-A尾序列之间。11.如权利要求1至10中任一项所述的分...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·米勒，N·阿罗南，E·L·普菲斯特，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：美国,US