一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法。该方法是以桔梗总皂苷为原料，通过碱水解获得桔梗皂苷体内代谢的主要次生皂苷，再利用中压制备液相色谱对所得桔梗次生皂苷进行分离，获得桔梗次生皂苷682和桔梗次生皂苷696两种主要桔梗次生皂苷。桔梗次生皂苷682和桔梗次生皂苷696可以有效改善细胞膜的通透性，辅助药物进入细胞，可用于辅助药物递送。

A preparation method of Platycodon grandiflorum secondary saponins which can improve cell membrane permeability

【技术实现步骤摘要】
一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法
本专利技术属于化学提取
，涉及一种制备能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备技术。
技术介绍
桔梗为桔梗科植物Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的根，始载于《神农本草经》，《本草纲目》释名曰：“此草之根结实而梗直故名”。桔梗性味苦、辛、平，归肺经，具有抗炎、祛痰、镇咳、抗溃疡、降血压、扩张血管、解热镇痛镇静、降血糖、抗胆碱、促进胆酸分泌等广泛的药理作用。桔梗是临床上治肺的常用中药，被誉为舟楫之剂。据《本草求真》记载：“桔梗系开提肺气之品，可为诸药舟楫”，是指桔梗在方剂中的配伍增效作用而言，比喻桔梗主升主浮，善能载药上升的特殊功效而言。具体是指桔梗能引导方剂中的主药上行，用以治疗上焦疾病，为心肺经“引经报使”之首选。近年来从桔梗中已经分离得到了皂苷、黄酮、酚酸、多烯和固醇等百余种化合物，其中桔梗皂苷被认为是主要的药效成分，目前报道有近70种[ZhangL等.JEthnopharmacol.2015,164(2015):147-161；LeeJW等.IntJMolSci.2015,16(11):26786-96]。桔梗皂苷以三萜皂苷为主，其结构上的共同特点是C12位为烯键和C28位为羧基。其苷元结构变化主要发生在C24位，有-CH3，-CH2OH以及-COOH等3种主要类型，而化学结构的复杂性和多样性则主要表现在C3,28位糖酯化所连接的不同的糖及其衍生物。根据皂苷元的不同其主要皂苷元有四种：桔梗皂苷元(Platycodigenin,I)，远志酸(polygalacicacid,II)，桔梗酸A(platycogenicacidA,III)，桔梗酸A内脂(platycogenicacidAlactone,IV)。研究发现桔梗的入血的次生皂苷主要为桔梗皂苷682和桔梗皂苷696[TangZY等.RSCAdv.2017，7：37459–37466]，其分别来源于桔梗总皂苷的体内代谢产物。现代药理研究表明：桔梗皂苷具有改善心血管、神经保护、抗肿瘤和抗病毒等作用[NyakudyaE等.PrevNutrFoodSci.2014,19(2):59-68；ChunJ等.PlantaMed.2013,79(8):639-45；WuJ等.BiolPharmBull.2012,35(8):1216-21；XieY等.ChemBiodivers.2010,7(1):178-85]。桔梗皂苷D(platycodinD)作为代表性的化合物，已报道具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种活性[KhanM等.JCellMolMed.2016,20(3):389-402；ZhaoR等.JCancer.2015,6(7):623-31；JangKJ等.IntJMolMed.2013,31(6):1357-66；WangB等.BiomedPharmacother.2016；84:1108-1112]。尽管桔梗总皂苷体外有较强的溶血作用[SunH等.IntImmunopharmacol.2011,11(12):2047-56]，但口服桔梗提取物小鼠的半数致死量为24g/kg，桔梗总皂苷为420mg/kg，而皂苷D的安全剂量超过2g/kg[LeeWH等.ToxicologicalResearch.2011,27:217-224]。目前桔梗被广泛地用于治疗呼吸系统疾病的治疗[IshimaruN等.JComplementIntegrMed.2013,11(1):51-4；TaoW等.IntImmunopharmacol.2015,27(1):138-47]，其能显著增加呼吸道黏液分泌量，有明显的祛痰、镇咳作用[RyuJ等.Phytomedicine.2014,21(4):529-33；ChoiJH等.FoodandChemicalToxicology.2009,47:1272-1279]。在桔梗总皂苷的提取分离方面，中国专利分别公开了多项桔梗皂苷提取物的提取纯化方法[申请号：CN200610051607；CN200610014212；CN201010216536；CN201110257194；CN201410693281；CN20151026373；CN201610421238；CN201610263372；CN201811001707；CN201811001686]。其分别采用水(包括酸碱溶液)浸泡，仿生酶解等方法进行预处理，再采用乙醇、乙酸乙酯、水等溶剂提取，进一步通过树脂吸附解离的技术工艺纯化。此外，中国专利也公开了离子液体提取[申请号:CN201610263399]，以及采用超临界萃取[申请号:CN200710014170；CN201610263399]和微波萃取[申请号:CN200710015598]等技术方法。关于桔梗皂苷中的单体成分的制备方法，中国专利仅公开了桔梗皂苷D的制备方法。其具体是在桔梗总皂苷提取的基础上，进一步通过硅胶柱[申请号:CN200710056248.X]，超滤、纳滤、重结晶[申请号:CN201410783514]等手段进一步纯化而制得。但目前还没有涉及桔梗皂苷中的药效成分、特别是桔梗次生皂苷的制备工艺和方法的报导。
技术实现思路
本专利技术目的是为了获取改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷，设计公开了一种桔梗次生皂苷的制备工艺和方法。本专利技术的技术方案一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，包括：1)以桔梗科植物Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的根为原料，采用水或乙醇等溶剂提取，并通过大孔树脂吸附解离制备所要的桔梗总皂苷原料；2)采用碱水解的方法获取桔梗次生皂苷，所述的碱限定为氢氧化钠，碱溶液的pH限定在pH12至pH14之间，碱水解的温度限定在80℃至100℃之间，碱水解的时间限定在1小时至5小时之间。其中优选条件为：pH13.2，温度93.4℃，时间4.5小时；3)选用硅胶色谱柱的中压制备液相色谱分离纯化上述桔梗次生皂苷，并优选FlashColumnSilica-CS色谱柱，洗脱体系为二氯甲烷-甲醇-水三元梯度洗脱的体系，具体包括四个洗脱梯度，分别是流动相A：二氯甲烷-甲醇-水＝7:1.5:0.15；流动相B：二氯甲烷-甲醇-水＝8:2:0.2；流动相C：二氯甲烷-甲醇-水＝9.8:2.8:0.3；流动相D：二氯甲烷-甲醇-水＝9.5:3:0.4。4)所制备的具有活性的两种桔梗次生皂苷限定为桔梗次生皂苷682和696，其结构分别如化学式(I)、(II)所示：5)所述的中压制备色谱的梯度洗脱体系中，桔梗次生皂苷的等梯度洗脱过程分别为：采用流动相A洗脱杂质，充分平衡后，采用流动相B洗脱桔梗次生皂苷682；然后采用流动相C平衡洗脱条件，充分平衡后，再采用流动相D洗脱桔梗次生皂苷696。6)所方法制备的两种桔梗次生皂苷682和桔梗次生皂苷696均可以有效改善细胞膜的通透性，辅助药物进入细胞，可用于药物递送，其优选桔梗次生皂苷682。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术提供的能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，选用体外碱水解的方式将部分桔梗总皂苷的3位和17位糖链断裂，转化为桔梗次生皂苷682和桔梗次生皂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，其特征在于，以桔梗总皂苷为原料，通过碱水解获得桔梗次生皂苷，并利用中压制备液相色谱对其中的桔梗次生皂苷进行制备分离；所获得的桔梗次生皂苷能有效改善细胞膜的通透性，辅助药物进入细胞，能够用于药物递送。

【技术特征摘要】
1.一种能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，其特征在于，以桔梗总皂苷为原料，通过碱水解获得桔梗次生皂苷，并利用中压制备液相色谱对其中的桔梗次生皂苷进行制备分离；所获得的桔梗次生皂苷能有效改善细胞膜的通透性，辅助药物进入细胞，能够用于药物递送。2.根据权利要求1所述的能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，其特征在于，所述桔梗总皂苷是以桔梗科植物Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的根为原料，采用水或乙醇为溶剂进行提取，并通过大孔树脂吸附解离所制备的桔梗总皂苷。3.根据权利要求1所述的能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，其特征在于，所述通过碱水解获得桔梗次生皂苷的方法的条件是，所述的碱为氢氧化钠，碱溶液的pH在pH12至pH14之间，碱水解的温度在80℃至100℃之间，碱水解的时间在1小时至5小时之间；优选条件为：pH＝13.2，温度93.4℃，时间4.5小时。4.根据权利要求1所述的能改善细胞膜通透性的桔梗次生皂苷的制备方法，其特征在于，所述中压制备液相色谱限定在选用硅胶色谱柱的中压制备色谱的梯度洗脱体系；优选FlashColumnSilica-CS色谱柱，洗脱体系为四个洗脱梯度，分别是流动相A：二氯甲烷-甲醇-水＝7...

【专利技术属性】
技术研发人员：白钢，姜志宏，侯媛媛，王静荣，吴文博，唐仲尧，申福葵，张曼，姜民，高洁，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津,12