一种与结肠癌相关的新型分子诊断标志物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种与结肠癌相关的新型分子诊断标志物，该诊断标志物为CELF6，其诊断效率高，可靠性有保障，能够实现结肠癌的快速筛查。该诊断标志物可以制备用于诊断结肠癌或判断结肠癌预后的试剂或试剂盒，以及可以制备预防或治疗结肠癌的药物。

A New Molecular Diagnostic Marker Related to Colon Cancer and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种与结肠癌相关的新型分子诊断标志物及其用途
本专利技术属于生物技术和肿瘤生物学
，涉及一种与结肠癌相关的新型分子诊断标志物及其应用。
技术介绍
结肠癌是当今最常见的疾病之一，每年全球约有120万名患者被确诊为结肠癌，而有超过60万名患者直接或间接死于结肠癌。根据我国国家癌症中心最新发布的权威数据显示，截至2017年8月30日，结肠癌新发病例在男性、女性中分别排名第3位和第2位，死亡病例在男性、女性中分别排名第4位和第3位。我国东部地区结肠癌发病率、死亡率最高，中部地区相对较低，有分析指出，这可能与不健康的饮食、较高的肥胖率有关。随着生活质量的提高和饮食习惯的改变，中国出现越来越多的结肠癌患者。然而目前可用的用于判断结肠癌患者的分子标志物没有几个，其中癌胚抗原(CEA)是唯一一个推荐用于结肠癌患者检测的分子标志物，但经过大量的临床实践，发现不仅胃肠道的恶性肿瘤CEA值可以升高，在乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤的血清中也有升高。因此，癌胚抗原算得上是一种广谱肿瘤标志物，特异性不好，更何况用它作为分子标志物诊断时患者基本上都到了中晚期，不具有预防、提前筛查、监测诊断的价值。另外像CA50、TIMP-1虽也可以作为判断结肠癌预后的血清标志物，但是特异性和灵敏性都远远达不到临床要求。在结肠癌发生、发展的相关作用机制仍然不完全清楚，但人们防癌意识逐渐增强，对结肠癌的早期筛查诊断有了更高的期待。所以一种新型的、特异性强、灵敏度高的能够用于结肠癌早期筛查，并改善了部分患者预后的肿瘤分子标记物急需被发现来指导临床的工作。p21是细胞周期调控相关的重要基因，它是位于p53基因下游的细胞周期依赖性激酶抑制因子，其表达产物p21蛋白参与细胞的增殖、分化调控和凋亡，对细胞周期具有负调控作用。p21waf1/cip1是p21基因编码表达的蛋白，它是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的抑制剂，通过与一系列cyclin-cdk复合物结合，抑制相应的蛋白激酶活性，导致cyclin-cdk无法磷酸化Rb，非磷酸化的Rb保持与E2F的结合，使E2F这一转录调节因子不能活化，阻止细胞周期中G1期向S期的转化，从而调节细胞周期进程。研究发现，CELF6是一种新的潜在肿瘤抑制因子，其作为肿瘤抑制因子在结肠癌中调控泛素化蛋白降解新机制及潜在的结肠癌精准治疗新靶点，具体来讲就是，一种名为CELF6的生物标记物在结肠癌组织样本中低表达，提示与结肠癌患者的预后密切相关，这对于寻找替代性的结肠癌治疗策略具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的第一个目是：针对现有技术之不足，提供一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物，诊断标志物为CELF6，该诊断标志物特异性好，能准确鉴别肿瘤/非肿瘤患者；敏感性高，能早期检测出肿瘤患者且诊断效率高，可靠性有保障，能够实现结肠癌的快速筛查。本专利技术的第二个目的是：提供与肿瘤相关的诊断标志物的用途。本专利技术的第三个目的是：提供诊断肿瘤、判断肿瘤预后的试剂或试剂盒。本专利技术的第四个目的是：提供预防或治疗结肠癌的药物。本专利技术所采用的技术方案是，一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物，诊断标志物为CELF6。一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物在制备用于诊断肿瘤的试剂或试剂盒中的用途。一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物在制备用于判断肿瘤预后的试剂或试剂盒中的用途。进一步地，肿瘤为结肠癌。一种诊断肿瘤、判断肿瘤预后的试剂或试剂盒，试剂或试剂盒中包含CELF6。进一步地，肿瘤为结肠癌。一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物在制备预防或治疗结肠癌的药物中的用途。一种预防或治疗结肠癌的药物，药物中包含CELF6。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种新型的结肠癌诊断分子标志物，其特异性好，能准确鉴别肿瘤/非肿瘤患者；敏感性高，能早期检测出肿瘤患者且诊断效率高，可靠性有保障，能够实现结肠癌的快速筛查。附图说明图1是本专利技术实施例1中结肠癌组织中CELF6表达量分析图，分析TCGA结肠癌RNA表达数据库，其中包括480例肿瘤组织和41例正常组织样本，肿瘤组织中CELF6的表达水平显著低于正常组织；图2是本专利技术实施例2中结肠癌组织免疫组织化学实验图，其中图a为在57例结肠癌和3例正常结肠组织中通过免疫组织化学实验检测CELF6表达量图，结肠癌组织中CELF6的表达水平显著低于正常结肠组织，图b为结肠癌组织和正常结肠组织中CELF6免疫组织化学IHC染色示意图；图3是本专利技术实施例3中CELF6对细胞增殖活性的影响实验图，其中图a为在HCT116细胞中敲低CELF6后，对细胞增殖活性的影响实验图，其中siCELF6为敲低实验组，siCtrl为对应的阴性对照组，图b为在HCT116细胞中敲除CELF6基因后，对细胞增殖活性的影响实验图，其中CELF6-KO为敲除实验组，Ctrl为阴性对照组；图4是本专利技术实施例4中蛋白质免疫印迹实验图，其中图a为在HCT116细胞中敲低CELF6后，蛋白质免疫印迹检测p21、CELF6蛋白的表达水平，其中siCELF6为敲低实验组，siCtrl为对应的阴性对照组，GAPDH为内参蛋白，图b为在HCT116细胞中敲除CELF6后，蛋白质免疫印迹检测p21、CELF6蛋白的表达水平，其中CELF6-KO为敲除实验组，Ctrl为阴性对照组，GAPDH为内参蛋白，图c为在HCT116细胞中过表达His-CELF6质粒后，蛋白质免疫印迹检测p21、His蛋白的表达水平，其中His-CELF6为过表达His-CELF6质粒实验组，pcDNA3.1为His-CELF6的空载对照，GAPDH为内参蛋白，图d为在HCT116细胞中过表达GFP-CELF6质粒后，蛋白质免疫印迹检测p21、GFP蛋白的表达水平，其中GFP-CELF6为过表达GFP-CELF6质粒实验组，pEGFP-C1为GFP-CELF6的空载对照，GAPDH为内参蛋白。具体实施方式下面结合具体实施例和附图对本专利技术的技术方案做进一步说明，但应该理解本专利技术的保护范围并不受具体实施例的限制。实施例1结肠癌组织中CELF6表达量分析本申请专利技术人从癌症基因组图谱(TheCancerGenomeAtlas,TCGA)官网下载结肠癌的RNA-Seq数据进行分析，分析了480例肿瘤组织与41例正常结肠组织中CELF6的表达量。实验结果如图1所示，显示CELF6在结肠癌组织中的表达显著低于正常结肠组织。实施例2结肠癌组织免疫组织化学实验将57例结肠癌与3例正常结肠临床组织切片经脱蜡水化、磷酸盐缓冲液PBS清洗、抗原修复、血清封闭等一系列步骤后，再分别用1：10005％BSA(胎牛血清)体积比稀释的CELF6抗体4℃冰箱过夜孵育，经生物素标记的二抗37℃恒温孵育30min后，显色、复染、清洗、脱水透明后封片。实验结果如图2所示，显示结肠癌组织中CELF6的表达水平显著低于正常结肠组织。实施例3CELF6对细胞增殖活性的影响在HCT116细胞中敲低CELF6或敲除CELF6基因后，做细胞增殖实验，步骤如下：1)在HCT116细胞中转染siCELF6敲低CELF6的表达，siCtrl为阴性对照组或利用CRISPR/Cas9技术获得CELF6基因敲除的HCT116细胞系，Ctrl为对应的阴性对照组，；2)制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为CELF6。

【技术特征摘要】
1.一种与肿瘤相关的新型分子诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为CELF6。2.根据权利要求1所述的与肿瘤相关的新型分子诊断标志物在制备用于诊断肿瘤的试剂或试剂盒中的用途。3.根据权利要求1所述的与肿瘤相关的新型分子诊断标志物在制备用于判断肿瘤预后的试剂或试剂盒中的用途。4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为结肠癌。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：许乃寒，柳刚，张昊伟，张倩文，张雅鸥，谢伟东，史孟娟，夏丽，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东,44