用于为目标蛋白量身构建最优的枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法技术

本发明专利技术属生物高技术领域，公开了一种用于为目标蛋白量身构建最适的枯草杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法。每个重组蛋白都有其独特的最优蛋白酶缺失突变表达宿主，而现有的枯草杆菌胞外蛋白酶缺失宿主适用性差，不能满足这种个性化需求。鉴于此，本发明专利技术提供一种用于为重组蛋白量身定制最适胞外蛋白酶缺失表达宿主的方法。该方法能准确评估枯草杆菌的每种胞外蛋白酶对目标蛋白生产的影响，从而确定有利和有害的胞外蛋白酶，然后通过失活不利的蛋白酶、保留有利的蛋白酶，获得最优宿主，以最大化提高目标蛋白的产量。

A Method for Constructing an Optimum Host for Protease Deletion Expression in Bacillus subtilis

【技术实现步骤摘要】
用于为目标蛋白量身构建最优的枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法
本专利技术属于生物高
，公开了用于为目标蛋白量身构建最适的枯草杆菌蛋白酶缺失表达宿主的方法。
技术介绍
枯草杆菌(Bacillussubtilis)是一个重要的重组蛋白表达宿主。该宿主具有安全性好、蛋白分泌能力强以及发酵培养成本低等优点。另一方面，该宿主也有些缺点，其中之一就是该菌分泌八种胞外蛋白酶，包括两种中性蛋白酶(NprE和NprB)，三种丝氨酸蛋白酶(Epr、Bpr和Vpr)，碱性蛋白酶AprE，金属蛋白酶Mpr和细胞壁蛋白酶WprA，这些蛋白酶会降解分泌细胞外的重组蛋白，降低其产量。解决该问题的直接办法是敲除这些蛋白酶的编码基因。目前已报道的蛋白酶缺失突变菌株有1A751(失活了NprE和AprE)(Microbiology,1995,doi:10.1099/13500872-141-2-281),WB600(失活了NprE、AprE、Epr、Bpr、Mpr和NprB)(JBacteriol,1991,doi:10.1128/jb.173.16.4952-4958.1991),WB700(失活了NprE本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌168突变体系统，其特征在于，所述的系统由失活枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168中nprE,aprE,epr,bpr,mpr,nprB,vpr和wprA中任意7个及8个胞外蛋白酶编码基因的枯草芽孢杆菌突变株组成。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌168突变体系统，其特征在于，所述的系统由失活枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)168中nprE,aprE,epr,bpr,mpr,nprB,vpr和wprA中任意7个及8个胞外蛋白酶编码基因的枯草芽孢杆菌突变株组成。2.根据权利要求1所述的突变体系统,其特征在于,包括：(1)同时失活枯草杆菌168(ATCC编号23857)中八个胞外蛋白酶基因nprE、aprE、epr、bpr、mpr、nprB、vpr和wprA的突变株PD8；(2)同时失活枯草杆菌168中七个胞外蛋白酶基因nprE、aprE、epr、bpr、mpr,nprB和vpr的枯草杆菌突变株PD7；(3)在突变株PD8的基础上分别回补nprE,aprE,epr,bpr,mpr,nprB和vpr七个胞外蛋白酶基因,构建七株枯草杆菌突变株PD8CnprE,PD8CaprE,PD8Cepr,PD8Cbpr,PD8Cmpr,PD8Cnp...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫新，赵雷真，刘圆鑫，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32