整合素α9的阻断抑制淋巴管瓣形成并促进移植物存活制造技术

在某些实施方案中，本发明专利技术提供了在有需要的哺乳动物中抑制发炎或移植的组织或器官中的淋巴管中的瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的抗整合素α9(Itga‑9)治疗剂施用于所述哺乳动物，以及任选地施用VEGFR‑3。

Interruption of integrin alpha 9 inhibits lymphatic valve formation and promotes graft survival

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】整合素α9的阻断抑制淋巴管瓣形成并促进移植物存活相关申请的交叉引用本申请要求2016年10月27日提交的美国临时申请号62/413,863的优先权。以上提及的申请的全部内容特此以引用的方式并入本文中。关于联邦资助研究的声明本专利技术是在政府支持下以国家卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的EY017392和国防部(DepartmentofDefense)授予的W81XWH-14-1-0496取得。政府对本专利技术具有某些权力。专利技术背景淋巴管网渗透大多数组织并且其功能障碍与广泛的病症相关联，所述病症如癌症转移、发炎、移植排斥反应、高血压、肥胖症和淋巴水肿。由于历史原因和技术限制而被忽视了几个世纪之后，淋巴管研究近年来已经获得显著关注和重大进展。然而，当前对于淋巴管疾病存在极少治疗。因此，需要用于淋巴管疾病和预防移植排斥反应的新治疗。
技术实现思路
在某些实施方案中，本专利技术提供了一种在有需要的哺乳动物中抑制移植的组织或器官中的淋巴管中的瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的抗整合素α9(Itga-9)治疗剂施用于所述哺乳动物。在某些实施方案中，本专利技术提供了一种抑制淋巴管中的整合素α9(Itga-9)的方法，其包括使所述淋巴管与抗Itga-9治疗剂接触。在某些实施方案中，本专利技术提供了一种预防或治疗有需要的哺乳动物中的角膜瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的包含抗Itga-9抗体的治疗剂施用于所述哺乳动物。在某些实施方案中，本专利技术提供了一种包含含有抗Itga-9结合剂的治疗剂的组合物，其用于治疗性处理组织或器官中的病理性淋巴管形成。在某些实施方案中，本专利技术提供了抗Itga-9结合剂的用途，其用以制备适用于抑制哺乳动物中的LG的药剂。在某些实施方案中，本专利技术提供了一种包含治疗剂和抗Itga-9结合剂的组合物，其用于医学疗法中。在某些实施方案中，本专利技术提供了一种抑制有需要的哺乳动物中的移植排斥反应的方法，其包括将有效量的治疗剂施用于所述哺乳动物，其中所述治疗剂是抗Itga-9治疗剂。如本文所用的“治疗”是指改善VG的至少一种症状、治愈VG和/或预防VG的发展。在某些实施方案中，所述方法还包括施用VEGFR-3。附图说明图1A-1C.淋巴管瓣生成在角膜移植之后受Itga-9的阻断抑制。(图1A)在Itga-9阻断抗体处理的角膜中与同型对照处理的角膜相比展示显著更少的瓣的代表性整片免疫染色图像。红色：Itga-9；绿色：LYVE-1。比例尺，100μm。(图1B)在对照和处理条件下对淋巴管瓣和淋巴管侵入面积的比较性定量。抗Itga-9处理仅减少瓣形成。用对照中的7只小鼠和处理组中的8只小鼠重复实验两次。*P<0.05；n.s.：不显著。(图1C)响应抗Itga-9处理显示瓣与淋巴管侵入面积的显著更低比率的比较性定量。用对照中的7只小鼠和处理组中的8只小鼠重复实验两次。*P<0.05。图2A-2B.Itga-9的阻断在角膜移植之后对淋巴管的极化分布无影响。(图2A)用于定量的鼻和颞象限区的示意图。围绕时钟的八个短线指示沿着移植物边界放置的缝合线。外实线圆：异色边缘。内虚线圆：移植物边界。竖直线：鼻与颞侧之间的间隔。灰色阴影区域：所评价的鼻和颞区。(图2B)在对照与处理两种条件下在鼻中相比颞侧显示显著更高的淋巴管侵入面积的比较性定量。用对照中的7只小鼠和处理组中的8只小鼠重复实验两次。*P<0.05。图3A-3B.Itga-9的阻断促进角膜移植物存活。(图3A)分别来自在对照和处理条件下排斥的和存活的移植物的裂隙灯检查的代表性图像。(图3B)在处理组中显示显著更高的存活率的卡普兰-梅尔存活曲线(Kaplan-Meiersurvivalcurve)。*P<0.05。图4.Itga-9的阻断对角膜LG的这种极性无影响。图5.Itga-9在瓣上的表达比管壁上更高。图6A和6B.ltga-9和VEGFR-3的组合阻断抑制高风险角膜移植之后的淋巴管瓣和管形成(图6，以绿色示出的管和瓣)并且促进移植物存活(图6B，卡普兰-梅尔存活曲线)。图7A和7B.Itga-9的阻断体内抑制角膜瓣形成。(图7A)在Itga-9阻断抗体处理的角膜中与对照同型处理的样品相比显示显著更少的瓣的代表性免疫荧光显微镜图像。红色：Itga-9；绿色：LYVE-1。比例尺，50lm。(图7B)定量瓣形成的汇总数据。*P<0.05。图8A和8B.人类皮肤LEC中的Itga-9的表达和耗竭。(图8A)显示人类LEC中的Itga-9表达的代表性免疫细胞荧光显微镜图像。红色：Itga-9；蓝色：DAPI。比例尺，50lm。(图8B)显示与杂乱siRNA相比使用Itga-9siRNA的Itga-9基因敲落的实时PCR分析。*P<0.05。图9A和9B.Itga-9敲落对LEC活力无影响。(图9A)使用GuavaViaCount测定显示在转染后48小时在对照与Itga-9siRNA转染的细胞之间的细胞活力无显著差异的流式细胞术分析。来自重复性研究的汇总数据在图9B中呈现。n.s.，不显著。图10A-10B.Itga-9敲落抑制LEC的增殖和粘附功能。(图10A)使用MTS增殖测定显示在用Itga-9siRNA转染之后LEC增殖的显著抑制的汇总数据。*P<0.05。(图10B)显示在用Itga-9siRNA转染之后LEC粘附至纤连蛋白的显著减少的汇总数据。*P<0.05。图11A-11B.Itga-9敲落抑制LEC迁移。(图11A)使用划痕测定显示经过72小时时段LEC迁移的显著减少的汇总数据。*P<0.05。(图11B)在72小时的细胞迁移的代表性图像。比例尺，100lm。红色：TRITC缀合的鬼笔环肽。图12A-12B.Itga-9敲落抑制LEC管形成。(图12A)显示基质胶(Matrigel)上管形成的显著减少的代表性显微镜图像。比例尺，500lm。(图12B)关于总管长度的汇总数据。*P<0.05。具体实施方式不同于在过去几个世纪已经研究的血管，淋巴管研究表示一个新发现的领域并且近年来已经经历指数增长(Alitalo,K.Thelymphaticvasculatureindisease.Nat.Med.2011；17:1371-1380；TammelaT,AlitaloK:Lymphangiogenesis:Molecularmechanismsandfuturepromise.Cell2010；140:460-476；ChenL:OcularLymphatics:State-of-the-ArtReview.Lymphology2009；42:66-76；AlitaloK,TammelaT,PetrovaTV:Lymphangiogenesisindevelopmentandhumandisease；Nature2005；438:946-953；BrownP:Lymphaticsystem:unlockingthedrains.Nature2005；436:456-458；FolkmanJ,KaipainenA:Genestelllymphaticstosproutor本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在有需要的哺乳动物中抑制移植的组织或器官中的淋巴管中的瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的抗整合素α9(Itga‑9)治疗剂施用于所述哺乳动物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.27 US 62/413,8631.一种在有需要的哺乳动物中抑制移植的组织或器官中的淋巴管中的瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的抗整合素α9(Itga-9)治疗剂施用于所述哺乳动物。2.如权利要求1所述的方法，其中所述淋巴管在眼组织中。3.如权利要求2所述的方法，其中所述眼组织是角膜组织。4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述移植的组织是角膜移植物。5.如权利要求1所述的方法，其中所述组织是皮肤组织。6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述抗Itga-9治疗剂是对Itga-9有特异性的结合剂。7.如权利要求6所述的方法，其中所述结合剂是抗体或抗体片段，或抗Itga-2RNAi分子。8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是通过结膜下注射施用。9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中与对照管相比，VG抑制至少10％。10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中淋巴管瓣的数目与未处理的对照相比减少至少10％。11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中淋巴管的数目与未处理的对照是可比的。12.一种预防或治疗有需要的哺乳动物中的角膜瓣生成(VG)的方法，其包括将有效量的包含抗Itga-9抗体的治疗剂施用于所述哺乳动物。13.如权利要求12所述的方法，其中所述角膜VG是由移...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈璐，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US