核桃乳真伪性的PCR-HRM分子鉴定方法技术

本发明专利技术筛选得到了psba‑trnH作为鉴定核桃乳的最适DNA条形码。基于此，设计了针对核桃的特异性引物对，制备了相关试剂盒，并利用它们对核桃乳的真伪性进行鉴定。本发明专利技术的鉴定方法准确快速，应用范围广，具有良好市场应用前景。

PCR-HRM Molecular Identification of True and False Walnut Milk

【技术实现步骤摘要】
核桃乳真伪性的PCR-HRM分子鉴定方法
本专利技术涉及领域分子鉴定领域，尤其涉及鉴定核桃乳的DNA条形码基因及核桃真伪性的分子鉴定方法。
技术介绍
核桃乳不仅具有纯天然的植物蛋白原材料、不失核桃仁原有营养成份和增强大脑记忆功能的特点，还是蛋白质、维生素B、尼克酸以及多种微量元素的良好来源，在我国一直属于畅销产品[1-2]。然而，核桃乳掺杂使假现象层出不穷，手段和方式不断翻新，检测和鉴定困难重重，因过敏源成分不明对消费者的人身健康构成威胁，影响了食品安全和贸易秩序。目前食品真伪性的鉴定主要依赖于蛋白质和DNA序列分析[3-4]。核桃乳作为深加工食品，经高温等流程，DNA破坏严重，不适合蛋白质分析[5]。DNA条形码技术是利用一段或几段标准DNA序列实现动物、植物和真菌物种快速鉴定的方法，以一对通用引物扩増标准序列，通过序列内碱基的多样性可以对己知和未知成分进行识别，具有范围广、特异性好、灵敏度高、操作简便的优点[6-8]。常用于植物DNA条形码的基因有ITS、rbcl、trnl、paba-trnH，它们被认为是潜在的优秀的植物DNA条形码候选序列。目前，DNA条形码技术已广泛应用于食本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定核桃乳真伪性的PCR‑HRM分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从待鉴定核桃乳样本中分离提取DNA；（2）以步骤（1）所得DNA和标准品核桃DNA为模板，采用SEQ ID NOs:7和8的引物对进行荧光定量PCR扩增；（3）对荧光定量PCR的扩增曲线图进行高分辨率熔解曲线（HRM）分析，单一物种扩增后的熔解曲线为单峰，而掺假样品会出现不同熔解温度的明显双峰。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定核桃乳真伪性的PCR-HRM分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从待鉴定核桃乳样本中分离提取DNA；（2）以步骤（1）所得DNA和标准品核桃DNA为模板，采用SEQIDNOs:7和8的引物对进行荧光定量PCR扩增；（3）对荧光定量PCR的扩增曲线图进行高分辨率熔解曲线（HRM）分析，单一物种扩增后的熔解曲线为单峰，而掺假样品会出现不同熔解温度的明显双峰。2.权利要求1的方法，进一步包括如下步骤：（4）荧光定量PCR扩增产物进一步用凝胶电泳验证判断，单一条带的是核桃乳纯样本；两条条带恰好也对应熔解曲线双峰的样本，是掺假样本。3.一种鉴定核桃乳真伪性的PCR-HRM分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从待鉴定核桃乳样本中分离提取DNA；（2）以步骤（1）所得DNA和标准品核桃DNA为模板，采用SEQIDNOs:7和8的...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁艳菲，姜广泽，朱诚，陈成统，王飞娟，孙骏威，江琼，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33