脂肪酸结合蛋白4的小干扰RNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供了脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在用于诊断和/或愈后评估结核病试剂盒中的用途，以及所述脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的小干扰RNA在制备用于预防或治疗结核病的药物中的用途。本发明专利技术所述的FABP4在BCG感染的巨噬细胞RAW264.7细胞中高表达，且FABP4的小干扰RNA能够抑制巨噬细胞发生凋亡的功能，因此FABP4的小干扰RNA可以作为新型的药物作用靶点，对结核病的预防及治疗具有重要的意义。

Small interfering RNA of fatty acid binding protein 4 and its application

【技术实现步骤摘要】
脂肪酸结合蛋白4的小干扰RNA及其应用
本专利技术涉及生物技术医药领域，尤其是涉及一段抑制人或哺乳动物FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列以及以此核心序列为基础的针对FABP4的靶向干扰技术，具体涉及抑制FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列及其应用。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由细胞内双链小干扰RNA(smallinterferenceRNA，siRNA)引导的，通过细胞内RNA干扰原理识别具有同源序列的靶点mRNA后引起mRNA的降解或翻译抑制，从而抑制或降低mRNA编码蛋白表达水平的现象，其核心是一段21个核苷酸左右长度的具有靶向性的特异核酸序列，下面统称为核心序列。RNAi是广泛存在于大多数真核生物中，发生于转录后阶段的基因沉默现象。近年来，人们利用这一原理针对靶基因表达进行阻断，从而产生相应的功能缺失表型用于科学研究，或疾病治疗，形成RNAi技术。根据RNAi原理，既可以在体外直接合成以核心序列为基础的RNA双链(siRNA)转入细胞，也可以利用不同的DNA表达载体携带核心序列在体内表达形成短发夹状RNA(shRNA)，起到特异性识别与降解相应的靶基因mRNA，或封闭其翻译的效果。虽然RNAi技术提供了一种对任何基因进行靶向干预调控的手段，在生物医学基础研究和疾病治疗领域具有重要的应用价值和前景，但其前提是必需针对靶基因对象展开分析、预测和实验筛选，找到一段特异和有效的核心序列，然后以此核心序列为基础，通过如上所述的通用方法实施对靶基因在蛋白水平的表达干扰。结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，Mtb)感染所引起的可空气传播的严重传染性疾病。根据世界卫生组织在2018年全球结核病报告，2017年全球新增结合病例640万人，其中157万人死亡，死亡率接近25％，同时多重耐药、共患病等因素已显著的增强了结核病的危险性，人类健康正在面临巨大的挑战。巨噬细胞是结核分支杆菌的主要宿主细胞也是人体的重要免疫细胞之一，当结核分支杆菌入侵时，巨噬细胞会主动吞噬病菌并在内部与其发生复杂的相互作用。在这一过程中，巨噬细胞会通过编程性死亡，控制病原体在人体内的扩散。细胞凋亡作为重要的清除病原菌的手段，也是细胞程序性死亡的重要部分，通过“自杀”的方式将细胞自身与细菌完全清除，是细胞抵御外来感染，控制感染源扩散的重要方式。与此同时，作为胞内寄生菌，结核分支杆菌会分泌多种毒性因子，通过影响细胞凋亡的进程以达到免疫逃逸的目的。这一博弈过程繁复，至今尚未完全明晰。近期研究发现，在感染性疾病中，为满足巨噬细胞免疫功能执行过程中大量的物质与能量需求，巨噬细胞内部代谢通路会发生相应变化。相应的，代谢通路中的调控因子和代谢产物也会对免疫功能的执行产生影响。脂肪酸作为细胞的重要组成部分，其含量变化会影响细胞的代谢状态与免疫功能的执行。首先，当巨噬细胞极化成M2型时，需要大量的能量供应，脂肪酸作为基础的供能分子，在脂肪酸氧化过程中产生的乙酰辅酶A、NADH和FADH2，可以通过TCA循环为细胞提供大量能量。其次，脂肪酸作为重要的信号分子，可作为多种粒子通道和激酶的配体，对免疫细胞的免疫反应进行调节。在细胞内部，脂肪酸分子需要与蛋白质结合以降低其自身的细胞毒性。脂肪酸结合蛋白家族(Fattyacid-bindingproteins,FABPs)是在细胞内部执行脂肪酸结合功能的重要蛋白分子，能够影响细胞内部的脂肪酸的含量，调节细胞内部免疫代谢和信号传导。脂肪酸结合蛋白4(Fattyacid-bindingprotein4,FABP4),是在脂肪细胞和巨噬细胞中大量存在的载脂蛋白，当脂肪酸被摄入巨噬细胞后，FABP4会与之结合，并开始在细胞内的转运和信号传递工作。现有技术中未见FABP4表达水平的变化对结核病进行预测和诊断方面的报道，也未见干预FABP4表达水平对于结核病的治疗和预防作用。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一组针对FABP4的表达及功能的干扰RNA的核苷酸序列(siRNA)，能够靶向抑制FABP4的表达，并验证FABP的敲减对BCG感染引起的细胞凋亡，进而对结核病的临床诊断提供理论依据。优选的，所述试剂和包括特异性检测FABP4蛋白的抗体。本专利技术还提供了一种用于预防/治疗结核病的药物组合物，所述FABP4的小干扰RNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。为解决上述技术问题，本专利技术提供了用于抑制FABP4蛋白表达的siRNA,一种用于预防/治疗结核病的药物组合，所述药物组合含有如下任意一种物质：I、SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的RNA分子、生物活性功能片段或变体；II、编码I所示RNA分子的重组载体；III、编码I所示RNA分子的重组病毒；IV、编码I所示RNA分子的重组病毒载体。优选的，所述药物组合还包括药学上可接受的载体或辅料。优选的，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或几种。优选的，所述药物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。本专利技术第一方面提供了一种RNA调节制剂，所述RNA调节制剂能够在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰。在一些实施方式中，所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列或GenBank登录号CT010390.1所示的序列的同源序列；在一些实施方式中，所述活细胞是肺泡巨噬细胞；在一些实施方式中，所述活细胞是RAW264.7细胞；在一些实施方式中，所述RNA调节制剂是小干扰RNA，在一些实施方式中，所述小干扰RNA的序列的正义链和反义链分别选自SEQIDNO:1和SEQNO2所示的RNA序列。本专利技术第二方面提供了一种RNA调节复合物，所述RNA调节复合物能够将如专利技术第一方面所述的RNA调节制剂转染或运转进入所述靶细胞；在一些实施方式中，所述RNA调节复合物包括如专利技术第一方面所述的RNA调节制剂和脂质体。本专利技术第三方面提供了一种RNA调节复合物的制备方法，所述制备方法为将如专利技术第一方面所述的RNA调节制剂与脂质体混合，形成所述RNA调节复合物。本专利技术第四方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如专利技术第一方面所述的RNA调节制剂或专利技术第二方面所述的RNA调节复合物以及药学上可接受的载体或辅料；在一些实施方式中，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或几种；在一些实施方式中，所述药物组合物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。本专利技术第五方面提供了一种基因工程表达载体，所述基因工程表达载体能够表达在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰的小干扰RNA；在一些实施方式中，所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列或GenBank登录号CT010390.1所示的序列的同源序列；在一些实施方式中，所述活细胞是肺泡巨噬细胞，在一些实施方式中，所述活细胞是RAW264.7细胞；在一些实施方式中，所述小干扰RNA的序列的正义链和反义链分别选自SEQIDNO:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA调节制剂，所述RNA调节制剂能够在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰。

【技术特征摘要】
1.一种RNA调节制剂，所述RNA调节制剂能够在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰。2.如权利要求1所述的RNA干扰制剂，其特征在于，所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列或GenBank登录号CT010390.1所示的序列的同源序列；优选，所述活细胞是肺泡巨噬细胞；更优选，所述活细胞是RAW264.7细胞；优选，所述RNA调节制剂是小干扰RNA，更优选，所述小干扰RNA的序列的正义链与反义链分别选自SEQIDNO:1和SEQNO2所示的RNA序列。3.一种RNA调节复合物，所述RNA调节复合物能够将如权利要求1或2所述的RNA调节制剂转染或运转进入所述靶细胞；优选，所述RNA调节复合物包括如权利要求1或2所述的RNA调节制剂和脂质体。4.一种RNA调节复合物的制备方法，所述制备方法为将如权利要求1或2所述的RNA调节制剂与脂质体混合，形成所述RNA调节复合物。5.一种药物组合物，所述药物组合物包括如权利要求1或2所述的RNA调节制剂或权利要求3所述的RNA调节复合物以及药学上可接受的载体或辅料；优选，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或几种；优选，所述药物组合物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。6.一种基因工程表达载体，所述基因工程表达载体能够表达在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰的小干扰...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓光存，马臣杰，于嘉霖，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64