一种白芨多糖提取物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及制药领域，公开了一种白芨多糖提取物及其制备方法，制备方法为：将白芨药材粉碎、过筛，制成白芨粉末；将白芨粉末加入水中，超声提取，离心、滤过后，制得白芨水提液；将白芨水提液浓缩后加入乙醇沉淀，取沉淀洗涤后干燥，即得白芨粗多糖；将所述白芨粗多糖加蒸馏水溶解，离心，取上清液依次进行微滤和超滤，浓缩、醇沉后取沉淀洗涤并干燥，即得白芨多糖提取物。本发明专利技术先用超声提取法，破坏白芨粉末细胞壁，利于白芨多糖充分溶出，在超声水提醇沉法制备白芨粗多糖的基础上，采用微滤‑超滤联合纯化，制备白芨多糖提取物，该法可以有效去除蛋白质、淀粉等杂质，制得的白芨多糖提取物纯度高、蛋白质含量低，且不含淀粉等非活性多糖。

A polysaccharide extract from Scutellaria baicalensis and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种白芨多糖提取物及其制备方法
本专利技术涉及制药领域，尤其是涉及一种白芨多糖提取物及其制备方法。
技术介绍
白芨为兰科多年生草本植物白芨Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，本品质黏味涩、为收涩止血之要药，临床多用于肺胃出血之证。其主要药效部位为白芨胶(白芨多糖)，具有抗炎、促凝血、抗氧化等药效作用。同时，白芨多糖具较好的组织相容性、生物黏附性、生物降解性、对黏膜无刺激性，且资源丰富、廉价易得，具有生物黏附载体材料的特性。白芨多糖为中药白芨中提取的一种水溶性杂多糖，又称白芨胶、白芨甘露聚糖。其分子量分布较宽，平均分子量为10-20kD。目前白芨多糖的提取工艺主要有水提取法、水提醇沉法、连续逆流提取法、纤维素酶解法等。以上单一的水提法都要经过高温处理，在高温处理的过程会造成白芨药材中淀粉会随多糖同时溶出，从而造成所制备的白芨多糖中含有大量的淀粉；而纤维酶酶解法在制备过程中虽然不会有淀粉等非活性多糖溶出，但在提取过程中又同时引入了蛋白质等杂质，而蛋白质和淀粉都是大分子结构在后期的纯化过程中很难除去，从而限制了白芨多糖的综合开发，如CN108251469A及CN107522794A等关于酶法提取白芨多糖的资料中，未在提取过程中涉及除去纤维素酶或果胶酶的方法及操作。由于多糖提取时多采用水为溶剂，对其进行浓缩时较为费时费力，且无较好的解决方法。本专利采用超滤将其纯化的同时，也对白芨溶液进行了一定程度的浓缩，大大节省了人力物力，且其浓缩过程温度较低，不会破坏多糖的结构及活性，较大程度保留了白芨多糖“药辅合一”的特性，为白芨多糖后续开发及研究奠定了一定的基础。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术中白芨多糖提取过程中蛋白质及淀粉等杂质难以去除，降低白芨多糖的提取纯度的问题，提供一种白芨多糖的提取方法，降低提纯后的白芨多糖中的蛋白质及淀粉含量，提高白芨多糖的纯度。且本专利技术采用微滤-超滤联合进行多糖的纯化，超滤在纯化多糖的同时对多糖溶液进行一定程度的浓缩，大大节省了人力物力，且其浓缩温度较低，不会破坏多糖的结构及活性，较大程度保留了白芨多糖“药辅合一”的特性，为白芨多糖后续开发及研究奠定了一定的基础。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种白芨多糖提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)将白芨药材粉碎、过筛，制成白芨粉末；(2)将所述白芨粉末，用水超声提取，离心、滤过后，即得白芨水提液；(3)将所述白芨水提液浓缩后加入乙醇沉淀，取沉淀洗涤后干燥，即得白芨粗多糖；(4)将所述白芨粗多糖加蒸馏水溶解，离心，上清液依次进行微滤和超滤，超滤液经浓缩、醇沉后，取沉淀洗涤并干燥，即得白芨多糖提取物。本专利技术先采用超声提取法，可以利用外界超声波以及强力搅拌的机械力破坏白芨的细胞壁，使白芨多糖提取过程中细胞壁间的阻力减小，包裹在细胞壁内的白芨多糖可充分释放出来，提高白芨多糖的提取率。然后再利用水提醇沉法提取白芨粗多糖，提取出的白芨粗多糖再经过微滤-超滤联合纯化，去除蛋白质和淀粉等杂质。在超滤的过程中，不仅纯化了白芨多糖，还对其微滤液起到浓缩的效果，大大缩短了时间，提高了效率，得到的白芨多糖纯度达到89％以上，蛋白质含量低，且不含淀粉等非活性多糖。是一种白芨多糖提取效率高、选择性好，且对白芨多糖破坏性小的白芨多糖提取方法。作为优选，步骤(1)中的白芨药材粉碎后过40-100目筛。作为优选，步骤(2)中在超声提取之前先加入以白芨多糖微球为载体的固定化纤维素酶进行水解，固定化纤维素酶的制备方法如下：a)用0.5-3％的乙酸溶液溶解白芨粉末，得到1-5％的白芨多糖乙酸溶液；b)在白芨多糖乙酸溶液中加入与白芨多糖质量比为5:1-2:1的Fe3O4粉末，超声后得到水相白芨多糖-Fe3O4溶液；c)在搅拌状态下依次将液体石蜡和质量比为4:1-3:1的司班80和吐温80加入容器中，分散均匀后逐滴加入上述水相白芨多糖-Fe3O4溶液，高速搅拌形成稳定乳液体系后，加入2-6％的戊二醛溶液反应1-4h；d)分别用石油醚、乙醇、蒸馏水反复洗涤产物，在外界磁场作用下收集，干燥后得到磁性白芨多糖微球；e)在上述磁性白芨多糖微球中加入磷酸缓冲溶液和浓度为10-30mg/mL的纤维素酶溶液，吸附反应0.5-3h；f)吸附结束后在加入95％硫酸铵溶液沉淀0.5-3h；g)沉淀结束后加入2-6％的戊二醛溶液，20-30℃下交联反应5-10h；h)离心分离后，用蒸馏水和醋酸缓冲溶液反复洗涤产物，得到具有磁性的固定化纤维素酶。本专利技术制备出以白芨多糖微球为载体的固定化纤维素酶，在超声提取之前先加入固定化纤维素酶进行水解，可以使白芨的细胞壁分解，使白芨多糖更好的释放出来，提高白芨多糖的提取率。且固定化的纤维素酶以具有磁性的白芨多糖微球为载体，在提取后可以利用其本身能被磁场吸附的能力，将其从提取液中除去，此法简单易行，效率高，又不会大量破坏其中多糖等有益成分。采用固定化纤维素酶，分解白芨细胞壁后经过固定化的纤维素酶作为固体可以从溶液中回收，避免加入游离酶反应后引入难以分离的蛋白质杂质。又因为白芨多糖分子中存在氨基，表面的氨基可以和蛋白质分子表面的羧基、羟基、巯基等反应，可将蛋白质分子吸附在表面，通过化学试剂进行共价、交联反应，使蛋白质分子固定，从而实现酶的固定。采用白芨多糖微球作为固定化纤维素酶的载体，可以成功将纤维素酶固定化的同时，在白芨多糖提取过程中又不会引入新的杂质。在乳化剂和交联剂的作用下，将磁性无机粒子Fe3O4与有机高分子白芨多糖结合，形成以白芨多糖为壳、磁性粒子Fe3O4为核的具有一定磁性及球状结构的白芨多糖微球，使白芨多糖微球具有磁性，采用磁性白芨多糖微球作为载体固定化后的纤维素酶可以利用Fe3O4在磁场中受到的磁力，直接在外界磁场作用下回收，回收操作简单便捷，不会引入新的杂质。一般情况下纤维素酶在固定化后，酶的活性容易降低，而本专利技术先用沉淀剂形成酶聚集体，再用双功能试剂将其交联，形成具有一定空间结构的比较稳定的聚集体，制备出具有良好催化活性、操作稳定性和磁响应性的磁性固定化纤维素酶聚集体，将其用在白芨多糖的提取中，活性较好，回收率高，对温度、pH的稳定性好，且具有良好的储藏稳定性。作为优选，步骤(2)中水与白芨粉末的质量比为90:1-5:1，超声提取时间为0.5-9h。作为进一步优选，步骤(2)中水与白芨粉末的质量比为70:1-20:1，超声提取时间为1-7小时。作为再进一步优选，步骤(2)中水与白芨粉末的质量比为70:1-30:1，超声时间为3-5小时，反应温度为30℃-50℃。作为优选，步骤(3)中加入乙醇后醇沉浓度为40-80％，在4-30℃下静置12-72h，过滤，将沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，在20-100℃下干燥。作为进一步优选，步骤(3)中加入乙醇后醇沉浓度为50-70％。，在6-15℃下静置15-42h，过滤，将沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，在30-50℃下干燥。作为再进一步优选，步骤(3)中加入无水乙醇后乙醇浓度为55％-65％，在8-10℃静置15-24小时，过滤，将沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，在35-45℃下干燥。作为优选，步骤(4)中，浓缩方法为减压浓缩、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白芨多糖提取物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）将白芨药材粉碎、过筛，制成白芨粉末；（2）将所述白芨粉末，用水超声提取，离心、滤过后，即得白芨水提液；（3）将所述白芨水提液浓缩后加入乙醇沉淀，取沉淀洗涤后干燥，即得白芨粗多糖；（4）将所述白芨粗多糖加蒸馏水溶解，离心，上清液依次进行微滤和超滤，超滤液经浓缩、醇沉后，取沉淀洗涤并干燥，即得白芨多糖提取物。

【技术特征摘要】
1.一种白芨多糖提取物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：（1）将白芨药材粉碎、过筛，制成白芨粉末；（2）将所述白芨粉末，用水超声提取，离心、滤过后，即得白芨水提液；（3）将所述白芨水提液浓缩后加入乙醇沉淀，取沉淀洗涤后干燥，即得白芨粗多糖；（4）将所述白芨粗多糖加蒸馏水溶解，离心，上清液依次进行微滤和超滤，超滤液经浓缩、醇沉后，取沉淀洗涤并干燥，即得白芨多糖提取物。2.根据权利要求1所述的一种白芨多糖提取物的制备方法，其特征是，步骤（1）中的白芨药材粉碎后过40-100目筛。3.根据权利要求1所述的一种白芨多糖提取物的制备方法，其特征是，步骤（2）中在超声提取之前先加入以白芨多糖微球为载体的固定化纤维素酶进行水解，所述固定化纤维素酶的制备方法如下：a)用0.5-3%的乙酸溶液溶解白芨粉末，得到1-5%的白芨多糖乙酸溶液；b)在白芨多糖乙酸溶液中加入与白芨多糖质量比为5:1-2:1的Fe3O4粉末，超声后得到水相白芨多糖-Fe3O4溶液；c)在搅拌状态下依次将液体石蜡和质量比为4:1-3:1的司班80和吐温80加入容器中，分散均匀后逐滴加入上述水相白芨多糖-Fe3O4溶液，高速搅拌形成稳定乳液体系后，加入2-6%的戊二醛溶液反应1-4h；d)分别用石油醚、乙醇、蒸馏水反复洗涤产物，在外界磁场作用下收集，干燥后得到磁性白芨多糖微球；e)在上述磁性白芨多糖微球中加入磷酸缓冲溶液和浓度为10-30mg/mL的纤维素酶溶液，吸附反应0.5-3h；f)吸附结束后在加入95%硫酸铵溶液沉淀0.5-3h；g)沉淀结束后加入2-6%的戊二醛溶液，20-30℃下交联反应5-10h；h)离心分离后，用蒸馏水和醋酸缓冲溶液反复洗涤产物，得到具有磁性的...

【专利技术属性】
技术研发人员：石森林，何三民，吴瑾瑾，徐菲拉，冯超，胡锦祥，陈烨，来银芳，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33