仔猪肠黏膜保护剂及其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种仔猪肠黏膜保护剂的制备方法，包括利用新鲜猪粪便制备粪菌悬液，配制载锌壳聚糖悬液，将载锌壳聚糖悬液于搅拌下缓慢加入至粪菌悬液中，于持续搅拌条件下，放置于冰上反应3～8分钟；反应结束后调节pH至7.0～7.4；得仔猪肠黏膜保护剂；粪菌悬液与载锌壳聚糖悬液的体积比为98:2～99.5:0.5。该仔猪肠黏膜保护剂能用作仔猪的口服液，可增强仔猪肠黏膜保护性自噬，提高抗氧化蛋白水平，降低炎症反应，改善肠黏膜功能，同时具有补锌效果和防止腹泻的作用。

Protective agent for intestinal mucosa of piglets and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
仔猪肠黏膜保护剂及其制备方法及应用
本专利技术涉及一种仔猪肠黏膜保护剂及其制备方法及应用。
技术介绍
现代化、规模化的养猪生产，饲养密度过大，生长速度过快，猪群往往处于高度的应激状态，导致肠道菌群失调，引起一系列肠道疾病的发生。因此在目前我国养猪生产中，维持仔猪肠道健康十分重要。肠道黏膜不仅是营养物质消化吸收的主要部位，也是机体最大的保护屏障，它能阻止肠道内病原和抗原物质的侵入，保护动物健康。肠黏膜表面拥有多样化菌群，这些菌群通过调节免疫系统及介导定植抗性在抗感染中起到关键的保护作用。肠黏膜和菌群之间存在着复杂的交互网络，其密切交流受菌群代谢分泌物和信号的驱动，进而对宿主免疫和生理产生影响。肠道菌群的生态结构复杂，具有一定的自我修复能力，并受多种因素影响。营养素、抗生素、环境和生活方式等改变都会引起天然肠道菌群的改变，进而影响机体功能。粪菌移植是证明微生物群在许多疾病中的作用的具体证据，最近已成为生物医学和临床医学的研究热点。粪菌移植可以广泛治疗胃肠道类疾病，如难治性/复发性艰难梭菌感染和炎症性肠病等。粪菌移植可通过植入、修复、并重建正常的肠道功能菌群来治疗与肠道菌群失调有关的疾病。目前，畜禽养殖业上鲜有粪菌移植相关的报道。锌作为功能多样的矿物质微量元素之一，可以促进动物的生长发育，参与机体的新陈代谢等过程，是保证组织、器官和系统正常功能最重要的微量元素。锌还参与体内上百种酶的合成，是一些重要酶的组成成分，与机体的免疫，抗氧化，生长密切相关。锌在生产上能预防治疗腹泻，提高生长性能，是一种广泛使用是饲料添加剂，但无机锌的大量使用造成了资源浪费和环境污染，影响畜产品品质和人类健康。壳聚糖是甲壳素脱乙酰基的产物，壳聚糖在动物体内具有良好的生物相溶性和可降解性，因壳聚糖具有抗菌、增强机体免疫力，抗氧化及促生长等作用，在生物学领域被广泛研究应用。另外，壳聚糖可改善肠道微生态环境。仔猪日粮中添加壳聚糖能提高免疫机能，降低腹泻率，促进仔猪生长。载锌壳聚糖具备壳聚糖和锌二者优良特性，既有抑菌抗菌作用，又有免疫调节作用，且载锌壳聚糖相较无机锌的吸收率和利用率更高，减少了资源浪费和环境污染。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种仔猪肠黏膜保护剂及其制备方法及应用。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种仔猪肠黏膜保护剂的制备方法，包括步骤1)的利用新鲜猪粪便制备粪菌悬液，还包括如下步骤：2)、配制载锌壳聚糖悬液：将载锌壳聚糖粉碎后(粉碎至30～50目)，按照1g/2～4ml的料液比，在粉碎后的载锌壳聚糖中加入蒸馏水进行搅拌，得载锌壳聚糖悬液；3)、将载锌壳聚糖悬液于搅拌下缓慢加入至粪菌悬液中，于持续搅拌条件下，放置于冰上反应3～8分钟；反应结束后调节pH至7.0～7.4；得仔猪肠黏膜保护剂；所述粪菌悬液与载锌壳聚糖悬液的体积比为98:2～99.5:0.5。说明：pH值的调节方式属于常规技术，例如可利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl进行调节。所述仔猪肠黏膜保护剂(液态制剂)分装于无菌离心管，-80℃保存；冻存的仔猪肠黏膜保护剂使用前于37℃水浴解冻。作为本专利技术的仔猪肠黏膜保护剂的制备方法的改进：所述步骤3)中，搅拌的转速为100～200r/min。作为本专利技术的仔猪肠黏膜保护剂的制备方法的进一步改进：所述步骤3)中，缓慢加入的时间为1～2分钟。本专利技术还同时提供了利用上述法制备而得的仔猪肠黏膜保护剂。本专利技术还同时提供了仔猪肠黏膜保护剂的用途：用作仔猪的口服液，可增强仔猪肠黏膜保护性自噬，提高抗氧化蛋白水平，降低炎症反应，改善肠黏膜功能，同时具有补锌效果和防止腹泻的作用。在本专利技术中：粪菌悬液的制备技术同申请号为201710439896.7所述(优选实施例1)；载锌壳聚糖，为按照申请号200910097725.6《一种有机锌饲料添加剂及其制备方法和用途》制备而得的有机锌饲料添加剂(优选实施例4)。本专利技术的仔猪肠黏膜保护剂(液态制剂)的使用方法为：将新鲜制备的仔猪肠黏膜保护剂或冻存的仔猪肠黏膜保护剂于37℃水浴解冻后，通过经口灌服、灌肠等方法，对三元或二元杂交受体仔猪进行肠黏膜保护剂的移植。本专利技术具有如下技术优势：本专利技术采用经严格筛选的我国健康地方猪种的粪便，分离得到的粪菌悬液与载锌壳聚糖悬液混合制得仔猪肠黏膜保护剂，整合了粪菌移植和载锌壳聚糖的多重优势，可增强仔猪肠黏膜保护性自噬，提高抗氧化蛋白水平，降低炎症反应，改善肠黏膜功能。因此，本专利技术制得的仔猪肠黏膜保护剂改善肠道健康，减少仔猪腹泻，促进仔猪生长，具有广阔的应用前景。该方法制作过程简单，生产材料易得，生产成本低廉，适合推广实施。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1、一种仔猪肠黏膜保护剂的制备方法，包括以下步骤：1)、利用新鲜猪粪便制备粪菌悬液：按照201710439896.7《粪便菌群移植技术及其应用》的实施例1制备而得。2)、配制载锌壳聚糖悬液：载锌壳聚糖，为按照200910097725.6《一种有机锌饲料添加剂及其制备方法和用途》的实施例4制备而得的有机锌饲料添加剂。将载锌壳聚糖粉碎后(粉碎至30～50目)，按照1g/3ml的料液比，在粉碎后的载锌壳聚糖中加入蒸馏水进行搅拌，得载锌壳聚糖悬液；3)、仔猪肠黏膜保护剂的制备：按2:98的比例(体积比)，将载锌壳聚糖悬液于搅拌(200r/min)下缓慢加入至(缓慢加入的时间为1～2分钟)制备好的粪菌悬液中，于持续搅拌(200r/min)条件下放置于冰上反应8分钟，调节反应后混合液的pH至7.0，所得的仔猪肠黏膜保护剂分装于无菌离心管，-80℃保存。实验1、仔猪肠黏膜保护剂的使用：将实施例1所得的新鲜制备的仔猪肠黏膜保护剂通过经口灌服的方法，对三元杂交受体仔猪进行肠黏膜保护剂的移植。选用同日出生的“杜×长×大”三元杂交新生仔猪12窝，随机分成2组(每组6个重复)。试验组新生仔猪分别于1～15d隔天灌服2ml的本专利技术肠黏膜保护剂，对照组灌服等量无菌生理盐水，饲养管理按常规进行，试验期27天(断奶前一天)。试验结束后，分别从各组随机选取6头(每个重复2头)，共12头猪进行屠宰试验。屠宰前自由饮水，禁食12h，宰前称重。结果表明：与对照组相比，试验组仔猪日增重均提高12.8％(P<0.05)，肠黏膜FoxO信号通路中的FoxO1、FoxO3及自噬相关蛋白GABARAP、LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg7蛋白表达增加46.9％(P<0.05)、38.3％(P<0.05)、63.1％(P<0.05)、135.4％(P<0.05)、100.5％(P<0.05)，抗氧化蛋白SOD2表达增加55.2％(P<0.05)，炎症因子IFN-γ、IL-1β、NF-κBp65蛋白表达量显著降低32.1％(P<0.05)、36.5％(P<0.05)、31.4％(P<0.05)。综上所述，本专利技术的肠黏膜保护剂可调节新生仔猪肠黏膜蛋白表达以及通过增强FoxO信号通路促进黏膜保护性自噬，增强肠黏膜抗炎抗氧化能力。说明：将上述-80℃保存3个月后的冻存仔猪肠黏膜保护剂于37℃水浴解冻后，按照上述方式进行移植实验，所得结果基本等共同于上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.仔猪肠黏膜保护剂的制备方法，包括步骤1)的利用新鲜猪粪便制备粪菌悬液，其特征在于还包括如下步骤：2)、配制载锌壳聚糖悬液：将载锌壳聚糖粉碎后，按照1g/2～4ml的料液比，在粉碎后的载锌壳聚糖中加入蒸馏水进行搅拌，得载锌壳聚糖悬液；3)、将载锌壳聚糖悬液于搅拌下缓慢加入至粪菌悬液中，于持续搅拌条件下，放置于冰上反应3～8分钟；反应结束后调节pH至7.0～7.4；得仔猪肠黏膜保护剂；所述粪菌悬液与载锌壳聚糖悬液的体积比为98:2～99.5:0.5。

【技术特征摘要】
1.仔猪肠黏膜保护剂的制备方法，包括步骤1)的利用新鲜猪粪便制备粪菌悬液，其特征在于还包括如下步骤：2)、配制载锌壳聚糖悬液：将载锌壳聚糖粉碎后，按照1g/2～4ml的料液比，在粉碎后的载锌壳聚糖中加入蒸馏水进行搅拌，得载锌壳聚糖悬液；3)、将载锌壳聚糖悬液于搅拌下缓慢加入至粪菌悬液中，于持续搅拌条件下，放置于冰上反应3～8分钟；反应结束后调节pH至7.0～7.4；得仔猪肠黏膜保护剂；所述粪菌悬液与载锌壳聚糖悬液的体积比为98:2～99.5:0.5。2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩新燕，马馨，张雨琛，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33