用于处理痰样本的组合物制造技术

本公开内容涉及一种用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的组合物及其用途。所述组合物包含麝香草酚、直链或支链的醇、离散剂、还原剂、洗涤剂和缓冲剂，其pH值为8.5至10。还公开了一种用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的方法。

Compositions for the treatment of sputum samples

【技术实现步骤摘要】
用于处理痰样本的组合物
本专利技术属于用于处理生物样本(例如含细菌的样本)的领域。在该领域内，本专利技术涉及用于处理痰样本的组合物和方法。
技术介绍
从复杂的生物混合物(例如临床样本)中分离生物物质(例如核酸或蛋白质)具有相当重要的意义，特别是对于诊断目的。生物样本制备用于诊断应用的实例包括制备并随后检测病毒或细菌靶标。特别是在临床环境中，这种技术通常需要操作高致病性材料，例如活细菌细胞，其可能对进行制备的人带来显著的感染风险。因此，将各病原体灭活作为安全措施可能是重要的。在许多情况下，这种灭活可以通过常见的制备步骤来实现，其中在采取进一步富集所讨论的分析物的措施之前，将病毒颗粒或细菌细胞裂解使得各内容物释放。用于大多数常见的病毒颗粒和细菌细胞的标准裂解方法是公认的并且是本领域技术人员已知的。然而，为了成功灭活，某些病原体需要更严格的处理，包括结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTBC)的物种，在下文中也被称为“分枝杆菌”。这些细菌被相对较厚且复杂的细胞壁包裹，表现出比大多数其他临床相关细菌中的对应物明显更高的坚韧性。诊断分枝杆菌通常所需的样本带来了另外的挑战。通常在痰中检测出MTBC物种，痰本身是比许多其他临床样本类型(例如血浆)需要更复杂处理的苛刻样本基质。原痰往往是高黏性物质，通常在处理之前需要进行液化。本领域中采用的相关方法包括，例如，US862782教导了使用一种包含多种表面活性剂、离液剂、缓冲剂、洗涤剂及其他组分的组合物。如下文所述，实际应用表明分枝杆菌的灭活并不总是最佳的。本公开内容描述了一种用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的改进方法。
技术实现思路
在第一方面，公开了一种用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的组合物。该组合物用于液化痰，否则这通常难以操作，特别是对于常见的液体操作系统(例如吸移管)。该组合物还允许分枝杆菌(如果样本中存在的话)的灭活。其活性成分包括麝香草酚、直链或支链的醇、离液剂、还原剂、洗涤剂和缓冲剂。该组合物的pH值为8.5至10。本文中公开的另一方面是一种用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的方法。简而言之，将痰与本文所述的组合物接触并混合，然后在足以液化痰并使分枝杆菌灭活的条件下进行孵育。本文公开的另一方面是如本文所述的组合物用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的用途。具体实施方式本文所述的第一方面是用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的组合物，该组合物包含以下组分：-麝香草酚-直链或支链的醇-离液剂-还原剂-洗涤剂-缓冲剂，其中组合物的pH值为8.5至10。结核病(TB)是由上述结核分枝杆菌复合群(MTBC)的物种引起的细菌感染。TB仍然是一个主要的全球健康问题，排名在十大死因之内，结核分枝杆菌的耐药菌株的出现成为世界范围内越来越大的威胁。TB的诊断是通过从临床样本中收集结核分枝杆菌来确认，对于肺结核是从呼吸道样本(例如痰)。如上所述，这些样本在生物安全性上、由于样本粘度高而在自动化工作流程中的进一步处理上以及由于样本固有干扰物质含量高而在诊断测试的兼容性上构成了重大挑战。目前，没有充分平衡所有上述挑战的可用的商业试剂。本文所述的组合物允许使结核分枝杆菌复合群杆菌有效灭活高达5E+07CFU/mL，液化呼吸道样本，并且与可用于分子诊断的自动化样本提取工作流程兼容，且试剂稳定性等于或大于18个月。“痰”是通过咳嗽从下呼吸道(支气管和肺)排出的浓稠的粘液或痰；不是唾液。通常，痰包括相当大量的糖蛋白痰。在样本采集过程中，样本从下呼吸道而不是从上呼吸道获取。未经处理的痰样本在本文中也被称为“原痰”。在本文所述的一些实施方案中，痰样本为原痰样本。或者，可以将从患者收集的痰用例如常见的缓冲剂(例如Tris、柠檬酸盐等)稀释。这种缓冲剂通常基本上不会有助于改变痰样本难处理的特性，即痰仍然可能在稀释剂内保持成粘稠且基本上不混溶的物质。在这种情况下，为了使痰适于通过常规液体操作装置和方法的进一步处理，会需要添加组合物(例如本文公开的组合物)。本文公开的组合物，在一些实施方案中为水溶液，包含多种具有不同功能活性的化学化合物，其允许患者样本液化(通过还原剂还原富含黏蛋白的呼吸道样本的二硫键来消化样本基质)和通过洗涤剂、离液剂、直链或支链的醇和作为天然抗微生物剂的具有强抗微生物特性的麝香草酚利用细菌细胞壁损伤、蛋白质变性和其他机制来使结核分枝杆菌灭活。临床相关的生物物质(特别是分枝杆菌核酸)的完整性基本上得到保持，使得其可以进行下游分析。试剂的pH值为8.5至10，使得其通过pH依赖性构象变化在核酸稳定性和样本固有物质(例如黏蛋白)的干扰特性之间做出平衡。“麝香草酚”(2-异丙基-5-甲基苯酚)是一种伞花烃的天然单萜苯酚衍生物，存在于百里香油中，从百里香(Thymusvulgaris，常见的百里香)和多种其他植物中提取成白色结晶物质。它仅微溶于中性pH水中，但高度溶解于醇和其他有机溶剂中。由于苯酚部分的去质子化，它也可溶于强碱性水溶液中。麝香草酚可以以不同浓度存在于本文所述的组合物中。在一些实施方案中，其以0.75％、1％或1.5％至2％、3.5％或5％的浓度(w/v)使用。在一个更具体的实施方案中，麝香草酚以约1％(w/v)的浓度存在。如专利技术人所示，在使MTBC成员灭活的上下文中，麝香草酚作为本文公开的组合物的一部分被证明是非常有效的。“直链或支链的醇”也有助于使可能存在于痰样本中的分枝杆菌灭活，特别是与麝香草酚组合。在本文所述的上下文中有用的直链或支链的醇是例如链长为至多10个碳原子的短链烷醇。其可以是伯醇、仲醇或叔醇。在一些具体的实施方案中，它可以是仲醇。在一些更具体的实施方案中，烷醇链具有1-5个碳原子，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇，或者其任何支化衍生物。在一些更具体的实施方案中，烷醇选自丙醇及其衍生物。在一个更具体的实施方案中，烷醇是异丙醇。异丙醇是具有化学式C3H8O的化合物。其是一种无色且易燃的具有强烈气味的化合物。作为连接羟基的异丙基，异丙醇是最简单的仲醇实例，其中带有羟基的1个碳原子连接另外两个碳原子。直链或支链的醇可以以20％、30％或45％至50％、60％、70％或80％(v/v)的浓度存在于本文所述的组合物中。在一些实施方案中，浓度为45％至60％。在一些更具体的实施方案中，浓度为60％。“离液剂”是通常扰乱溶液中水分子的有序结构及分子内和分子间的非共价结合力的物质。其可以为样本制备过程做出一些贡献。此外，离液剂有助于破坏生物膜，例如质膜或细胞器膜(如果存在的话)。离液剂的非限制性实例为胍盐(如硫氰酸胍、盐酸胍、氯化胍或异硫氰酸胍)、尿素、高氯酸盐(例如高氯酸钾)、其他硫氰酸盐或者碘化钾或碘化钠。在本文所述的一些实施方案中，离液剂为胍盐。在一些更具体的实施方案中，离液剂为硫氰酸胍(GuSCN)。离液剂可以以0.5M、1M或1.2M至2M、3.5M或5M的浓度存在于本文所述的组合物中。在一些更具体的实施方案中，浓度可以为1.2M至2M。在又一些更具体的实施方案中，浓度可以为约1.6M。如本文中所用的“还原剂”也可以有助于不期望的组分变性。特别地，如本领域众所周知的，还原剂裂解分子间和分子内的二硫键(其对许多蛋白质的三级结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的组合物，所述组合物包含以下组分：‑麝香草酚‑直链或支链的醇‑离液剂‑还原剂‑洗涤剂‑缓冲剂，其中，所述组合物的pH值为8.5至10。

【技术特征摘要】
2017.12.22 EP 17210184.21.用于处理怀疑含有分枝杆菌的痰样本的组合物，所述组合物包含以下组分：-麝香草酚-直链或支链的醇-离液剂-还原剂-洗涤剂-缓冲剂，其中，所述组合物的pH值为8.5至10。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述醇为异丙醇。3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述离液剂选自硫氰酸胍、盐酸胍、氯化胍或异硫氰酸胍、尿素、高氯酸盐例如高氯酸钾、其他硫氰酸盐或者碘化钾或碘化钠。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述还原剂选自二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇和TCEP(三(2-羧乙基)膦)。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述洗涤剂为非离子洗涤剂。6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述非离子洗涤剂选自吐温-20、NonidetP40、CHAP、Brij系列成员或TritonX-100。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂选自三(羟甲基)氨基甲烷(Tris/Trizma)、柠檬酸盐、2-(N-吗啉代)乙磺酸、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、1,3-双(三(羟甲基)甲基氨基)丙烷、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOP...

【专利技术属性】
技术研发人员：C比尔，S兰奇，PH罗彻尔，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH