非洲猪瘟病毒(ASFV)是接触传染性病原体，通常导致家猪的致命病毒性疾病。对非洲猪瘟(ASF)的控制已受到不可获得疫苗的阻碍。已经从自然存在的、适应细胞培养的或遗传修饰的活减毒ASFV衍生了实验性疫苗；但是，这些疫苗只有在保护免于同源病毒时才是成功的。我们通过缺失特异性毒性相关的9GL(B119L)和UK(DP96R)基因，从高毒性的ASFV Georgia 2007(ASFV‑G)分离株衍生了重组Δ9GL/ΔUK病毒。在体内，甚至在相当高的剂量下(10
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】保护免受亲本病毒Georgia2007分离株攻击的合理开发的非洲猪瘟减毒病毒毒株专利技术背景专利
本专利技术涉及构建用于高毒性的Georgia2007分离株ASFV-G的重组非洲猪瘟病毒(ASFV)活减毒候选毒株疫苗。所述疫苗包含ASFV-GΔ9GLΔUK修饰的病毒，一种通过缺失9GL(B119L)基因和UK(DP96R)基因的大部分来修饰的重组ASFV-G。相关领域描述非洲猪瘟(ASF)是猪的接触传染性病毒疾病。病原体ASF病毒(ASFV)是一种大型包膜病毒，其含有大约19万碱基对的双链DNA基因组。ASFV在基因组结构和复制策略方面与其它大型的双链DNA病毒共享，所述病毒包括痘病毒科(Poxviridae)、虹彩病毒科(Iridoviridae)和藻DNA病毒科(Phycodnaviridae)(Costard等人2009.Phil.Trans.RoyalSoc.B364：2683-2696)。在家猪中的ASFV感染通常是致命的，并且表征为发热、出血、共济失调和严重抑郁。但是，感染进程是不同的，从高度致死到临床症状不明显，这取决于宿主表征和具体的病毒毒株(Tulman等人2009.Curr.Top.Microbiol.Immunol.328：43-87)。目前，所述疾病在超过20个撒哈拉以南非洲国家流行。在欧洲，ASF仍在撒丁岛(意大利)流行，并且自2007年起已经在高加索地区宣布了新的爆发，其影响了格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯。近期还在乌克兰、白俄罗斯、立陶宛、拉脱维亚和波兰报道了孤立的爆发，造成了进一步传染至邻国的风险。流行病毒，ASFVGeorgia2007/1，是一种属于基因型II的高毒性分离株(Chapman等人2011.EmergingInfect.Dis.17：599-605)。目前，没有可用于ASF的疫苗，并且疾病爆发通过动物检疫和屠宰进行控制。使用受感染细胞的提取物、受感染的猪外周血白细胞的上清液、纯化和灭活的病毒颗粒、受感染的戊二醛固定的巨噬细胞或洗涤剂处理的受感染的肺泡巨噬细胞对动物进行疫苗接种的尝试均没有诱导保护性的免疫力(Coggins，L.1974.Prog.Med.Virol.18：48-63；Forman等人1982.Arch.Virol.74：91-100；Kihm等人1987.In：AfricanSwineFever，Becker，Y.(ed)，MartinusNijhoff，Boston，pp127-144；Mebus，C.A.1988.Adv.VirusRes.35：251-269)。发展的同源保护免疫力使得猪在病毒感染中存活。在使用ASFV的中等毒性或减毒变体的急性感染下存活的猪发展出了对同源病毒攻击的长期抵抗力，但是对异源病毒攻击则很少(Hamdy和Dardiri.1984.Am.J.Vet.Res.45：711-714；Ruiz-Gonzalvo等人1981.In：FAO/CECExpertConsultationinASFResearch，Wilkinson，P.J.(ed)，Rome，pp206-216)。当使用同源亲本病毒攻击时，使用含有特异性ASFV毒性相关基因的工程改造缺失的活减毒ASF病毒免疫的猪受到了保护。特别地，从病原体ASF病毒(MalawiLil-20/1、Pretoriuskop/96/4、E70和Georgia2007)的基因组单独缺失UK(DP69R)、23-NL(DP71L)、TK(A240L)或9GL(B119L)基因显著减弱了猪中的病毒，并且使用这些减毒病毒免疫的动物受到保护而免于同源病毒的攻击(Moore等人1998.J.Virol.72：10310-10315；Lewis等人2000.J.Virol.74：1275-1285；等人1996.J.Virol.70：8865-8871；Zsak等人1998.J.Virol.72：1028-1035)。这些观察构成了描绘针对ASFV的有效的活减毒病毒的合理开发的仅有的实验证据。具体地，在高毒性ASFV分离株MalawiLil-20/1、Pretoriuskop/96/4和Georgia2007(Lewis等人，同上；Neilan等人2004.Virol.319：337-342；O’Donnell等人2015.J.Virol.89：8556-8566)中缺失9GL(B119L)导致这些病毒在猪中完全减毒。以相当高的病毒剂量通过肌内注射将MalawiLil-20/1Δ9GL或Pretoriuskop/96/4Δ9GL或E70ΔUK突变体施用至猪并没有诱导临床体征，而全部动物都在感染中存活。此外，使用这些病毒对猪诱肌内接种导了免于毒性亲本病毒攻击的保护(Zsak等人1998，同上；Lewis等人，同上；O’Donnell等人，同上)。这些观察构成了描绘针对ASFV的有效的活减毒病毒的合理开发的仅有的实验证据。因为目前没有ASFV疫苗可以获得，因此对于开发可以诱导免于疾病的致命表现的任何类型的保护的任何实验性疫苗都具有极大的兴趣。专利技术概述我们已经开发了新型的重组突变体ASFV-GΔ9GL/ΔUK病毒，一种ASFV-G(非洲猪瘟病毒-Georgia2007分离株)的修饰。根据该发现，本专利技术的目的是提供新型的突变体ASFV-GΔ9GL/ΔUK病毒，其导致亲本ASFV-G的9GL(B119L)基因和UK(DP96R)基因的大部分的缺失。ASFV-GΔΔ9GL/ΔUK(SEQIDNO：3)的核苷酸序列不同编码野生型ASFV-G的核苷酸序列(SEQIDNO：1)。ASFV-G(野生型)9GL编码119个氨基酸的蛋白(SEQIDNO：2)并且ASFV-G(野生型)UK编码95个氨基酸的蛋白(SEQIDNO：25)，其不同于通过突变体核苷酸序列ASFV-GΔ9GL/ΔUK(SEQIDNO：3)编码的突变体9GL和UK蛋白。61个氨基酸的突变体9GL多肽(SEQIDNO：4)由野生型9GL多肽(SEQIDNO：2)的第11氨基酸至第68氨基酸的缺失产生，并且10个氨基酸的突变体UK多肽(SEQIDNO：26)由野生型UK多肽(SEQIDNO：25)的第1氨基酸至第85氨基酸的缺失产生。本专利技术另外的一个目的是提供包含可存活的ASFV-GΔ9GL/ΔUK病毒的免疫原性组合物。本专利技术另外一个目的是提供当使用致病ASFV-G攻击时有效保护动物免于临床ASF疾病的合理设计的活减毒SFV-GΔ9GL/ΔUK疫苗。本专利技术进一步的目的是提供遗传标志物疫苗，其可以潜在地区分疫苗接种的动物和被ASFV-G感染的动物。本专利技术的另一个目的是提供通过施用有效量的合理设计的活减毒ASFV-GΔ9GL/ΔUK疫苗保护动物免于ASFV-G的方法。本专利技术另外的目的是提供用于将被ASFV-G感染的动物与使用所述合理设计的活减毒ASFV-GΔ9GL/ΔUK疫苗进行疫苗接种的动物区别的方法，其包括用于区分接种疫苗的动物和被野生型感染的动物的遗传DIVA策略。本专利技术的其它目的和优点将通过随后的描述变得显而易见。附图简述图1A和图1B显示了ASFV-G9GL(B119L)基因编码的多肽(图1A)和ASFV-GUK(DP96本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组ASFV‑G(非洲猪瘟病毒‑Georgia 2007分离株)突变体，所述突变体ASFV‑G Δ9GL/ΔUK病毒包含编码突变体ASFV‑G Δ9GL/ΔUK多肽的cDNA，其中所述突变体cDNA包含两个缺失，173个核苷酸的缺失导致突变体9GL蛋白比ASFV‑G的未突变的野生型9GL蛋白少58个氨基酸，第11至第68氨基酸被缺失，并且255个核苷酸的第二个缺失导致突变体UK蛋白比ASFV‑G的未突变的野生型UK蛋白少85个氨基酸，第1至第85氨基酸被缺失。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.01 US 15/200,4071.一种重组ASFV-G(非洲猪瘟病毒-Georgia2007分离株)突变体，所述突变体ASFV-GΔ9GL/ΔUK病毒包含编码突变体ASFV-GΔ9GL/ΔUK多肽的cDNA，其中所述突变体cDNA包含两个缺失，173个核苷酸的缺失导致突变体9GL蛋白比ASFV-G的未突变的野生型9GL蛋白少58个氨基酸，第11至第68氨基酸被缺失，并且255个核苷酸的第二个缺失导致突变体UK蛋白比ASFV-G的未突变的野生型UK蛋白少85个氨基酸，第1至第85氨基酸被缺失。2.根据权利要求1的突变体cDNA，其中所述cDNA是SEQIDNO：3。3.一种疫苗组合物，其包含根据权利要求1或权利要求2的重组突变体ASFV-GΔ9GL/ΔUK病毒。4.一种用于保护猪免于非洲猪瘟病毒-Georgia2007分离株(ASFV-G)的方法，其包括向猪施用有效量的活减毒ASFV-...
【专利技术属性】
技术研发人员：曼努埃尔·V·博尔卡，道格拉斯·P·格雷多，劳伦·G·胡林卡帕特森，吉列尔莫·R·里斯卡蒂，薇薇安·K·奥唐纳，
申请(专利权)人：美国农业部，康涅狄格大学，
类型：发明
国别省市：美国,US
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