一种东方栓菌的快速人工栽培方法技术

涉及一种东方栓菌的快速人工栽培方法，通过进行母种培养，液体种子培养，原种培养，栽培种培养，菌丝发菌，催菇，子实体采收等，实现东方栓菌的快速人工代料栽培。通过对野生东方栓菌进行组织分离获得的东方栓菌纯培养菌种，通过实验确立的人工代料栽培模式，拓展了除野生子实体之外的东方栓菌子实体的来源，并脱离了东方栓菌对野外寄主的依赖，提高了东方栓菌的培养速度以及栽培效率，增加了东方栓菌的子实体产量。另一方面，东方栓菌作为一种具有极高药用价值的大型木腐真菌，亟待各种生物学功能的开发与利用，必然应当建立在人工大规模栽培的基础上。本发明专利技术涉及技术简易可靠，原料来源广泛，培养方法简单易行，拓展了可栽培大型真菌栽培的种类，提高了经济效益，利于推广。

A Rapid Artificial Cultivation Method of Thrombosa Orientalis

The invention relates to a rapid artificial cultivation method of T. orientalis, which realizes rapid artificial substitution cultivation of T. orientalis by carrying out mother seed cultivation, liquid seed cultivation, original seed cultivation, cultivation seed cultivation, mycelial germination, mushroom stimulation and fruiting body harvesting, etc. Pure culture strain of Hypospadia orientalis obtained by tissue isolation of wild Hypospadia orientalis. The artificial cultivation mode established by experiments expanded the source of Hypospadia orientalis fruiting body except wild fruiting body, and broke away from the dependence of Hypospadia orientalis on field hosts, increased the cultivation speed and efficiency of Hypospadia orientalis, and increased the production of Hypospadia orientalis fruiting body. \u3002 On the other hand, as a large-scale wood-rot fungus with high medicinal value, Trombidium orientalis urgently awaits the development and utilization of various biological functions, which must be based on large-scale cultivation. The invention relates to simple and reliable technology, wide source of raw materials, simple and feasible cultivation method, expanding cultivation types of cultivatable large fungi, improving economic benefits and facilitating popularization.

【技术实现步骤摘要】
一种东方栓菌的快速人工栽培方法
本专利技术涉及食用菌栽培及其应用领域，具体涉及一种东方栓菌的快速人工栽培方法。
技术介绍
东方栓菌（Trametesorientalis），阔叶树白腐真菌，属于担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，栓菌属。成熟子实体无柄，菌盖半圆形扁平，新鲜时柔韧，老熟后变坚硬，有瘤状突起，少见环带，米黄色或淡青灰色，至浅棕灰色或烟灰色，有深色环纹，表面常有菌盖同色小疣，初期有绒毛，渐变光滑，2～13cm×4～26cm，厚3～10mm，边缘钝。菌肉木栓质，污白色至淡青灰色，厚3～6mm。菌管与菌肉同色，长3～13mm；管口白色，圆形或近多角形，平均每毫米3个，壁厚薄不定，孢子无色，光滑，长椭圆型，有尖，5～8μm×2~3μm。菌丝厚壁，少分枝，子实体内菌丝少见横隔以及锁状联合，基质内菌丝有横隔及锁状联合，粗2.5～5.5μm。东方栓菌具有良好的药用价值，可用于肺结核以及支气管炎等呼吸道炎症，普通外伤消炎，以及风湿类病症。尤其值得注意的是，早在1973年日本的伊藤ひろと等人即发现，东方栓菌的子实体中的多糖提取物，对小白鼠肉瘤以及艾氏腹水瘤的抑制率为80%~100%。近年来YiZheng等人又发现，东方栓菌的水溶性多糖具有免疫调节活性，也是一种具有相当潜力的新型抗癌药物。东方栓菌是我国北方一个少数民族治疗子宫肿瘤的药材。《中国抗肿瘤大型药用真菌图鉴》介绍了东方栓菌的抗肿瘤作用。东方栓菌的子实体的来源往往需要野外采集获得。东方栓菌野生是一年生，长在森林中阔叶树的枯枝上，在全国都有分布，但是量不大。目前尚没有人工栽培的先例。本专利技术主要提供了一种东方栓菌快速人工栽培方法。所用东方栓菌菌种（编号TAJLG20180120）是经野生子实体分离纯化而得，该菌种抗杂能力很强。本专利技术专利的栽培方法简便，生产效率高，适于大规模推广应用。
技术实现思路
一种东方栓菌的快速人工栽培方法，包括菌种分离、母种扩大培养、原种制备、栽培种制备、发菌、出菇诱导、子实体采收等步骤，详述如下：菌种分离，选取形状正常的野生的新鲜东方栓菌子实体，清理去表面以及基部的杂物后，以70%乙醇消毒表面以后，以无菌解剖刀切开，选区菌肉与菌管交界处的菌丝小块，放置于改良PDA培养基平板表面，置于25°C恒温培养箱中避光培养5d至菌丝出现，挑取菌丝接种于改良PDA培养基斜面上，置于25°C恒温培养箱中避光培养5d至菌丝形成菌落，对菌落进行显微观察并与野生子实体进行DNA比对后，将确认为东方栓菌菌丝的斜面进行无菌检查后移至4°C冰箱中避光保藏，编号TAJLG20180120。母种扩大培养，使用改良PDA培养基（ComprehensivePotatoesMedium，SPDA）平板，具体配方为土豆200g（浸汁），蔗糖20g，酵母粉3g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1.5g，MnSO40.05g，FeSO4·7H2O0.05g，VB10.05mg，琼脂16g，蒸馏水1000mL。5%NaOH以及5%HCl调节pH至6.4，121°C高压蒸汽灭菌30min。取4°C冰箱中保藏东方栓菌试管母种，置于25°C恒温培养箱中活化48h后，分别以接种铲铲取0.5mm2见方小块，接种于改良PDA培养基斜面表面后，置于25°C恒温培养箱中避光培养10d至菌丝长满斜面。液体种子扩大培养，使用改良PDA液体培养基。具体配方为土豆200g（浸汁），蔗糖20g，酵母粉3g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1.5g，MnSO40.05g，FeSO4·7H2O0.05g，VB10.05mg，蒸馏水1000mL，5%NaOH以及5%HCl调节pH至6.4。配好定容后，分装250mL三角瓶，每瓶90mL，8层纱布封口后，121°C高压蒸汽灭菌30min。取已扩大的东方栓菌试管母种，以接种铲铲取0.5mm2见方小块，接种于改良PDA液体培养基，每瓶3小块，置于25°C恒温旋转摇床，160r∙min-1中避光培养7d至菌丝成细碎菌丝球为止。固体原种制备，使用小麦粒固体培养基。具体配方为裸麦97%（预先以5%石灰水泡胀隔夜，以清水冲洗至无石灰粉沫为止，沥干），石膏2%，蔗糖1%。分装500mL聚乙烯塑料瓶（自带透气封口盖），每瓶450g，封口后，121°C高压蒸汽灭菌90min。待菌种瓶彻底冷却后，以无菌甘油注射器吸取制备好的液体种子30mL，注入菌种瓶麦粒表面。菌种瓶瓶口向上，置于培养室中，维持温度15~25°C，相对湿度60~80%RH，避光培养3~5周视气温而定）至菌丝发满为止。栽培种制备与发菌，使用棉籽壳麸皮固体培养基。具体配方为：①棉籽壳80%，麸皮16%，石膏2%，石灰1%，蔗糖1%，含水量75%；②阔叶树木屑77%，麸皮20%，石膏1%，石灰1%，蔗糖1%，含水量75%；按上述配方配制好后，分装18×35cm聚丙烯折角袋，每袋1000g，套环封口后，121°C高压蒸汽灭菌100min。菌袋彻底冷却后，以镊子掰取3×3cm制备好的固体原种一块，埋入菌袋木屑表面。菌袋横卧，置于培养室培养架上（每层菌袋不得超过4叠），维持温度15~25°C，相对湿度60~80%RH，避光培养3~5周（视气温而定）至菌丝发满为止。出菇诱导，菌丝发满后的栽培种，置于25~30°C，相对湿度80~90%RH，散射光400~800Lux的环境中，使用锋利的刀片，将菌袋沿长轴纵划5~6cm小口，间隔5cm，每侧一组，见示意图1。划好小口的菌袋分开摆放，左右间隔15cm，上下间隔视培养架上下层间隔而定不做要求，菌棒长轴朝向与本地夏季盛行风向垂直，摆放好后2~4d（视气温而定），可见气生菌丝钻出菌袋上的出菇小口，此时应使用雾状水喷淋菌袋表面催菇。待10~15d（视气温而定）白色瘤状原出现于菌袋出菇小口（划痕）后，每天喷雾状水与培养室空中与地面，早晚各一次，不可再向菌袋喷水。子实体采收，经过10~20d（视气温而定）待子实体长大至直径6~8cm大小，尚未开始大规模弹射担孢子时，即要进行采收。使用锋利的刀片或竹刀沿菌袋长轴将子实体贴袋壁割下，即完成采收。采收后应用小刀剔除菌袋出菇口附近残存原基与老化菌皮，重新回归上述出菇诱导。子实体可采收2~4次。栽培种可使用棉籽壳代替阔叶树木屑（壳斗科为佳）以及经过堆积陈化的针叶树木屑，其他配方不变。其中使用棉籽壳与阔叶树木屑者产量相当，使用陈化针叶树木屑者产量较低且出菇较迟。本专利技术的特点，第一使用了经由组织分离得到的东方栓菌菌种，纯培养的菌种能够排除杂菌污染并有极高的遗传稳定性，提高了大规模栽培的稳定性和重复性。第二，斜面扩大以及使用液体摇瓶发酵对东方栓菌进行扩繁，通过固体培养基进行再增菌，三级制种模式能够对东方栓菌进行快速放大，能较容易的提高生产规模并缩短生产周期，并对种质的稳定性贡献良多。第三，使用棉籽壳代替木屑作为栽培种原料，使得东方栓菌的栽培脱离了野生木质基质，扩大了生产用的原料来源，减少了对林业资源的依赖，也降低了大规模生产的相对成本。第四，通过营养丰富的代料栽培，提高了东方栓菌生长过程中的营养水平，使得子实体产量相对于野生条件下在质量与数量上都有提高。第五，采用了催菇措施，使得东方栓菌子实体的发生与生长在时间与空间上准确可控，降低了子实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种东方栓菌的快速人工栽培方法，包括菌种分离、母种扩大培养、原种制备、栽培种制备、发菌、出菇诱导、子实体采收等步骤，其具体特点详述如下：（1）菌种分离：野生的新鲜东方栓菌子实体使用组织分离法于改良PDA培养基平板表面获得纯培养；（2）母种扩大培养：母种的继代（扩大）培养在改良PDA培养基斜面上进行，改良PDA培养基（Comprehensive Potatoes Medium，SPDA）具体配方为土豆200 g（浸汁），蔗糖20 g，酵母粉3 g，KH2PO4 2 g，MgSO4·7H2O 1.5 g，MnSO4 0.05 g，FeSO4·7H2O 0.05g，VB1 0.05 mg，琼脂16 g，蒸馏水1000 mL；5% NaOH以及5% HCl调节pH至 6.4，121°C高压蒸汽灭菌30 min；（3）原种的培养：固体原种制备，使用小麦粒固体培养基；具体配方为裸麦97%（预先以5%石灰水泡胀隔夜，以清水冲洗至无石灰粉沫为止，沥干），石膏2%，蔗糖1%；（4）栽培种的培养与发菌：栽培种制备与发菌使用棉籽壳麸皮固体培养基；具体配方为棉籽壳80%，麸皮16%，石膏2%，石灰1%，蔗糖1%，含水量75%；按上述配方配制好后，分装18×35cm聚丙烯折角袋，每袋1000g，套环封口后，121°C高压蒸汽灭菌100 min；菌袋彻底冷却后，以镊子掰取3×3cm制备好的固体原种一块，埋入菌袋木屑表面；菌袋横卧，置于培养室培养架上（每层菌袋不得超过4叠），维持温度15~25°C，相对湿度60~80%RH，避光培养3~5周（视气温而定）至菌丝发满为止；（5）催菇：催菇方法为25~30°C，相对湿度80~90%RH，散射光400~800Lux的环境中，使用锋利的刀片，将菌袋沿长轴纵划出菇小口，划好后菌袋分开摆放，左右间隔15cm，菌棒长轴朝向与本地夏季盛行风向垂直，摆放好后2~4d（视气温而定），使用雾状水喷淋菌袋表面催菇。...

【技术特征摘要】
1.一种东方栓菌的快速人工栽培方法，包括菌种分离、母种扩大培养、原种制备、栽培种制备、发菌、出菇诱导、子实体采收等步骤，其具体特点详述如下：（1）菌种分离：野生的新鲜东方栓菌子实体使用组织分离法于改良PDA培养基平板表面获得纯培养；（2）母种扩大培养：母种的继代（扩大）培养在改良PDA培养基斜面上进行，改良PDA培养基（ComprehensivePotatoesMedium，SPDA）具体配方为土豆200g（浸汁），蔗糖20g，酵母粉3g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1.5g，MnSO40.05g，FeSO4·7H2O0.05g，VB10.05mg，琼脂16g，蒸馏水1000mL；5%NaOH以及5%HCl调节pH至6.4，121°C高压蒸汽灭菌30min；（3）原种的培养：固体原种制备，使用小麦粒固体培养基；具体配方为裸麦97%（预先以5%石灰水泡胀隔夜，以清水冲洗至无石灰粉沫为止，沥干），石膏2%，蔗糖1%；（4）栽培种的培养与发菌：栽培种制备与发菌使用棉籽壳麸皮固体培养基；具体配方为棉籽壳80%，麸皮16%，石膏2%，石灰1%，蔗糖1%，含水量75%；按上述配方配制好后，分装18×35cm聚丙烯折角袋，每袋1000g，套环封口后，121°C高压蒸汽灭菌100min；菌袋彻底冷却后，以镊子掰取3×3cm制备好的固体原种一块，埋入菌袋木屑表面；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李淑芳，陈晓明，高隽，
申请(专利权)人：天津市林业果树研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12