一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法技术

本发明专利技术涉及临床体外诊断试剂技术领域，特别涉及一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。该干化学试剂片依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，其它组分选自辅助底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种。本发明专利技术所述干化学试剂片制备的方法，检测结果准确性高，精密度好，特异性好，稳定性好，保存期长，操作简便，适用范围广，无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，在临床快速检测领域提供了极大的便利。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法
本专利技术涉及临床体外诊断试剂
，特别涉及一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。
技术介绍
随着人民生活水平的日益提高，人们越来越关注自身健康安全，离不开医疗临床分析检验，这些以化学分析和生化分析方法的检测从以前的手工实验的方法正在朝着全自动分析仪器自动分析检测和现场检测发展，极大地方便了分析操作人员的工作负担。分析检验按分析试剂类型可以分为液体试剂和干化学试剂两种方法。采用湿化学方法有足够的准确度和精密度，但需昂贵的仪器和专业技术人才，并且操作繁琐、不能快速测定出结果，不适合现场检验；而干化学试剂以其操作简便、测定快速、灵活以及无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，提供了极大的便利。“干化学”是与传统的“湿化学”相对比较而言的。它是以被检测样品中的液体作为反应媒介，待测物直接与固化于载体上的干粉试剂反应的一种方式。它与传统湿化学的最大区别就在于参与化学反应的媒介不同。随着生物化学中酶的分离、提纯存储等技术的发展，传感器、光度计的进步，以及计算机应用的普及，干化学技术在近20年里得到了长足的进步。比色方法的干化学试剂片发展较早，从开始的一层结构发展而来二层结构、三层结构和现在最新的多层结构。一层到三层结构干化学试剂片均是由滤纸、纤维素片、多孔胶膜等一类片层物质预先固定全部试剂，两层和三层经过堆叠、粘合、冲压等处理结合。这种结构只能对待测成分进行定性或半定量测定，而且测量线性范围不大，遇到有使用药物情况下会干扰实验结果。有许多分析测试中的试剂不能预先混合，而且复杂测试液需要预处理，这就限制了干化学试剂片应用领域。多层结构即干化学的多层膜试剂载体。以强生公司和富士公司为代表的多层膜干片法，利用感光胶片的涂层技术将试剂层、辅助试剂层、光漫射层和分布层等试剂涂布在透明支持层上，从支持层的反面测定光密度的变化。上述干化学试剂片虽能定量检测，但分布层或扩散层需用到有机试剂，对材料设备要求高，生产工艺复杂，并且对制备人员健康危害极大，污染环境。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。该干化学试剂片可现场快速检测，用于定量分析，重复性好。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种干化学试剂片，依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，其它组分选自底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种；显色层中的试剂包括色原和亲水性胶体。作为优选，缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在5.0～10.0；激活剂为氯化钠、氯化镁、硫酸镁、醋酸钡、氯化钾、亚铁氰化钾或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠中的一种或几种；生物酶为过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、尿酸酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸激酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、肌酐胺基水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、肌酐酶、尿素酶和碳酸酐酶中的一种或几种；表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。底物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、L-天门冬氨酸钠、磷酸肌酸、甘油、丙酮酸中的一种或几种。辅酶为焦磷酸硫胺素、NAD+、NADP+、五磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺、维生素H、维生素B7、乙酰辅酶A中的一种或几种。作为优选，螯合剂为EDTA、EGTA、磷酸三钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠；作为优选，保护剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇，牛血清白蛋白；作为优选，稳定剂为聚乙二醇-6000、聚乙二醇-20000、环糊精、水溶性淀粉。作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。作为优选，色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠中的一种或多种。作为优选，显色层中的试剂还包括表面活性剂。作为优选，显色层中的试剂还包括表面活性剂和生物酶。作为优选，扩散层包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂和颗粒物质。本专利技术采用亲水性高分子聚合物与颗粒物质作为扩散层，已达到即能使叠层不可分割成为一个整体，实现快速准确的定量分析检测，提高检测精确度、灵敏度，又简化制备过程。作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。作为优选，扩散层还包括缓冲体系、生物酶、底物、辅酶中的一种或几种。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：(1)操作过程简单，试剂无需配制，直接滴加样本检测。(2)试剂层干燥无水分，试剂片稳定性良好。(3)扩散层具有过滤功能，溶血、黄疸和脂浊样本对测定结果没有明显干扰。(4)检测结果重复性好、准确性高，可进行定量检测，线性范围宽。(5)制备过程简便，易操作，危害性、污染性小。实验表明，本专利技术所述干化学试剂片制备的方法，检测结果准确性高，精密度好，特异性好，稳定性好，保存期长，操作简便，适用范围广，无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，在临床快速检测领域提供了极大的便利。具体实施方式本专利技术公开了一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。(一)定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片本专利技术提供了一种定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、激活剂、螯合剂和稳定剂；各组分用量为：显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体和表面活性剂。作为优选，试剂层中，缓冲体系为MOPS或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～7.5；激活剂为氯化钠；螯合剂为EDTA；稳定剂为聚乙二醇-6000。作为优选，缓冲体系的pH值在7.1～7.3。作为优选，试剂层中各组分用量为：作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干化学试剂片，其特征在于，依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；所述试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，所述其它组分选自底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种；所述显色层中的试剂包括色原和亲水性胶体。

【技术特征摘要】
1.一种干化学试剂片，其特征在于，依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；所述试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，所述其它组分选自底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种；所述显色层中的试剂包括色原和亲水性胶体。2.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在5.0～10.0；所述激活剂为氯化钠、氯化镁、硫酸镁、醋酸钡、氯化钾、亚铁氰化钾或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠中的一种或几种；所述生物酶为过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、尿酸酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸激酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、肌酐胺基水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、肌酐酶、尿素酶和碳酸酐酶中的一种或几种；所述表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；所述底物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、L-天门冬氨酸钠、磷酸肌酸、甘油、丙酮酸中的一种或几种；所述辅酶为焦磷酸硫胺素、NAD+、NADP+、五磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺、维生素H、维生素B7、乙酰辅酶A中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述螯合剂为EDTA、EGTA、磷酸三钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠；所述保护剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇，牛血清白蛋白；所述稳定剂为聚乙二醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：王菁菁，崔建华，董理，
申请(专利权)人：吉林省汇酉生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22