本发明专利技术涉及一种缺氧缺血性脑损伤诊断靶点及应用。新生儿缺氧缺血性脑病是儿童神经系统损伤的常见原因之一，目前没有有效的诊断方法，本申请对缺氧缺血性脑损伤模型进行circRNA转录组测序，运用生物信息学分析，发现了9个与缺氧缺血性脑损伤非常相关的circRNA，并进行了验证，本申请为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了潜在生物标志物，为其临床基因检测奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
一种缺氧缺血性脑损伤诊断靶点及应用
本专利技术属于疾病检测领域，具体涉及缺氧缺血性脑损伤分子诊断靶点及其应用。
技术介绍
新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是儿童神经系统损伤的常见原因之一，该病是由于围产期窒息缺氧所引起的脑损伤，凡是造成母体和胎儿间的血液循环和气体交换障碍，使血氧浓度降低者均可造成窒息，窒息严重者可造成永久性神经功能损害。目前临床表现是诊断HIE的主要依据，同时具备以下4条者可确诊：1)有明确的可导致胎儿宫内窘迫的异常产科病史，以及严重的胎儿宫内窘迫表现(胎心小于100次/min，持续5min以上；和/或羊水III度污染)，或者在分娩过程中有明显的窒息；2)在出生时出现重度的窒息，指Apgar评分在1min小于等于3分，进而延续至5min时评分仍然小于等于5分，和/或患儿在出生时脐动脉血气分析结果显示pH小于7.00；3)患儿在出生后不久会出现神经系统的症状，并持续至1d以上，例如：患儿意识的改变(兴奋过度、嗜睡、昏迷)，肌张力增高或减弱的改变，吸吮反射的减弱或消失、拥抱反射减弱或消失等原始反射活动的异常，患儿病情严重时会出现惊厥，脑干征(呼吸节律改变、瞳孔改变、对光反应迟钝或消失)和前囱张力增高；4)排除电解质紊乱、产伤和颅内出血等原因引发的抽搐、代谢遗传性疾病以及宫腔感染和其他由于先天性疾病所引发的脑损伤。但是上述诊断无法及时有效的进行孕期诊断。环状RNA(circularRNA，circRNA)是一类通过反向剪接将3’和5’末端连接起来形成的环形RNA分子，主要参与转录及转录后基因表达的调节。按照剪接来源的不同，circRNA可分为内含子来源环状RNA以及外显子来源环状RNA。目前研究表明circRNA可能在疾病的发生和发展中发挥着重要的作用，有望成为某些疾病过程的潜在的生物标志物。专利技术人对缺氧缺血性脑损伤模型进行circRNA转录组测序以期发现用于该病诊断的生物标志物，通过对测序数据的生物信息学分析，发现了9个与缺氧缺血性脑损伤非常相关的circRNA，并进行了RT-PCR验证，本申请为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了潜在生物标志物，为临床基因检测奠定研究基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。术语“同源”是主要是指序列上的同源，也就是用来说明两个或多个RNA或DNA序列具有相同的祖先。同源的序列一般有相似的功能。一般来说，当相似程度高于50％时，常推测检测序列和目标序列可能是同源序列；当相似性程度低于20％时，就难以确定其是否具有同源性。优选的，序列与SEQIDNO.1具有95％、96％、97％、98％或99％以上序列同源性。更优选的，circRNA序列为SEQIDNO.1。本专利技术的目的在于提供一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的基因的表达水平。进一步，circRNA调控的基因选自下列miRNA中的一种或几种：rno-let-7a-2-3p、rno-miR-103-1-5p、rno-miR-1199-3p、rno-miR-125a-5p、rno-miR-125b-5p、rno-miR-127-5p、rno-miR-138-1-3p、rno-miR-146b-3p、rno-miR-181c-3p、rno-miR-182、rno-miR-1843b-5p、rno-miR-188-5p、rno-miR-194-3p、rno-miR-1956-3p、rno-miR-212-5p、rno-miR-219b、rno-miR-25-3p、rno-miR-26a-3p、rno-miR-26b-3p、rno-miR-30b-3p、rno-miR-30c-1-3p、rno-miR-30d-3p、rno-miR-31b、rno-miR-324-5p、rno-miR-326-5p、rno-miR-328a-3p、rno-miR-328b-3p、rno-miR-343、rno-miR-347、rno-miR-349、rno-miR-351-5p、rno-miR-3542、rno-miR-3544、rno-miR-3551-5p、rno-miR-3573-3p、rno-miR-3586-3p、rno-miR-3594-5p、rno-miR-370-3p、rno-miR-380-5p、rno-miR-423-5p、rno-miR-431、rno-miR-433-3p、rno-miR-483-3p、rno-miR-487b-5p、rno-miR-488-5p、rno-miR-497-3p、rno-miR-500-5p、rno-miR-504、rno-miR-551b-3p、rno-miR-6322、rno-miR-6323、rno-miR-6326、rno-miR-665、rno-miR-668、rno-miR-674-5p、rno-miR-676、rno-miR-742-5p、rno-miR-764-5p、rno-miR-880-3p、rno-miR-92a-2-5p、rno-miR-92a-3p、rno-miR-93-5p。进一步，circRNA在缺氧缺血性脑损伤样本中高表达。本专利技术中的核酸杂交技术包括但不限于原位杂交(ISH)、微阵列或Northern杂交。优选的，采用二代测序技术、三代测序技术、探针杂交技术、基因芯片技术或荧光定量PCR技术检测样本中circRNA及其调控的基因的表达水平。优选的，试剂含有与circRNA杂交的探针或扩增circRNA的特异性引物。一种缺氧缺血性脑损伤检测荧光定量PCR试剂盒，试剂盒采用特异的引物检测SEQIDNO.1的表达水平。进一步，引物序列为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。其中所述的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.2，下游引物序列为SEQIDNO.3。所述内参引物为GAPDH内参引物。所述的试剂盒还包含RNA抽提试剂。优选Reagent进行样本RNA提取。本专利技术的目的在于提供上述试剂在制备缺氧缺血性脑损伤诊断制剂中的应用。优选的，样本为脑组织或外周血。更优选的，样本为大鼠的脑组织。本申请的优点：1、本申请为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了新的分子诊断标志物。2、检测发现本申请提供的circRNA在缺氧缺血性脑损伤中特异性高表达，检测准确率较高，提供了一种更加快速、准确的检测方法。定义：环状RNA(circularRNA，circRNA)，亦称环形RNA，是最近几年研究确认的一种新型的非编码RNA(noncodingRNA，ncRNA)分子。根据RNA构成的不同，环状RNA可分为三类：外显子环状RNA(exoncircularRNA，ecircRNA)、内含子环状RNA(circularintronicRNAs,ciRNAs)和外显子-内含子circRNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，其特征在于，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的基因的表达水平，circRNA序列与SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性。
【技术特征摘要】
1.一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，其特征在于，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的基因的表达水平，circRNA序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，circRNA调控的基因选自下列miRNA中的一种或几种：rno-let-7a-2-3p、rno-miR-103-1-5p、rno-miR-1199-3p、rno-miR-125a-5p、rno-miR-125b-5p、rno-miR-127-5p、rno-miR-138-1-3p、rno-miR-146b-3p、rno-miR-181c-3p、rno-miR-182、rno-miR-1843b-5p、rno-miR-188-5p、rno-miR-194-3p、rno-miR-1956-3p、rno-miR-212-5p、rno-miR-219b、rno-miR-25-3p、rno-miR-26a-3p、rno-miR-26b-3p、rno-miR-30b-3p、rno-miR-30c-1-3p、rno-miR-30d-3p、rno-miR-31b、rno-miR-324-5p、rno-miR-326-5p、rno-miR-328a-3p、rno-miR-328b-3p、rno-miR-343、rno-miR-347、rno-miR-349、rno-miR-351-5p、rno-miR-3542、rno-miR-3544、rno-miR-3551-5p、rno-miR-3573-3p、rno-miR-3586-3p、rno-miR-3594-5p、rno-miR-370-3p、rno-miR-380-5p、rno-miR-423-5p、rno-miR-431、rno-miR-433-3p、rno-miR-483-3p、rno-miR-487b...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽君，崔红，赵贺华，张囡，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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