富硒猴头菇菌丝体，制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供富硒猴头菇菌丝体，制备方法及其应用，富硒猴头菇菌丝体是将猴头菇在固体富硒PDA培养基培养后得到的菌丝接种于富硒液体种子液培养基，经振荡培养接种于装有液体培养基的摇瓶中，振荡培养，离心或过滤，烘干后得到的菌丝体有机硒含量在100 mg/kg菌丝以上的富硒猴头菇菌丝体。采用本发明专利技术的技术方案菌丝体产量在1.5 g/100mL以上，菌丝体有机硒含量在100 mg/kg菌丝以上，本发明专利技术将得到的富硒猴头菇菌丝体应用于制备治疗消化性溃疡、修复胃粘膜损伤的药物上。

Mycelium of Selenium-enriched Hericium erinaceus, its preparation method and Application

The invention provides the mycelium of Selenium-enriched Hericium erinaceus, the preparation method and the application thereof. The mycelium of Selenium-enriched Hericium erinaceus is obtained by inoculating the mycelium of Hericium erinaceus in the solid Selenium-enriched PDA culture medium into the Selenium-enriched liquid seed liquid culture medium, and inoculated in the shaking flask containing the liquid culture medium through oscillation culture, centrifugation or filtration, and the organic Selenium content of the mycelium obtained Selenium-rich Hericium erinaceus mycelium above hyphae. The technical scheme of the invention is that the mycelium yield is above 1.5 g/100mL and the organic selenium content of the mycelium is above 100 mg/kg. The mycelium of the selenium-enriched Hericium erinaceus obtained by the invention is applied to the preparation of medicines for treating peptic ulcer and repairing gastric mucosal damage.

【技术实现步骤摘要】
富硒猴头菇菌丝体，制备方法及其应用
本专利技术涉及一种富硒猴头菇菌丝体的制备方法及其抗胃粘膜损伤活性，用于治疗消化性溃疡以及相关的疾病，属于医药领域，国际专利分号分类为C08B37/60。
技术介绍
猴头菌（Hericiumerinaceus(RullexF.)Pers）属担子菌门、伞菌纲、红菇目、猴头菌科，它除了味道鲜美、营养丰富外，还具有降血糖、抗氧化和抗衰老、促进周围神经再生，抑制肿瘤细胞生长、增强免疫调节能力等功效，尤其对治疗胃溃疡及胃肠癌有显著作用。硒是人体的必须微量元素，在体内主要参与形成谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)、硫氧还蛋白还原酶（thioredoxinreductase,TrxR）、硒蛋白P（selenoproteinP，Selp），调节氧化应激、氧化还原状态及关键细胞活动。缺乏硒可能导致许多疾病如克山病、过度氧化应激造成的疾病等，并加重疾病的进程。我国大部分地区都属于缺硒区，因此要靠从日常饮食中摄入来补充硒。硒在自然界中主要以无机硒和有机硒存在，其中无机硒的安全范围很小，食用菌具有较强的富硒能力，能将无机硒转化为人体吸收和利用的有机硒。猴头菌作为味道、营养、功效倶佳的食用菌，自然是选择用来富硒培养的重要材料；食用菌深层发酵具有周期短、占地少、成本低、适合工业化生产、质量人为可控等优点，因此在食用菌生产中具有广阔的应用前景。但与其它食用菌如香菇、金针菇等相比，对猴头菇菌丝体进行富硒培养存在着产量低、耐硒能力差、富硒效率低等困难，因此目前对猴头菌的富硒培养大多仅限于子实体的培养。本专利技术通过解决富硒猴头菇深层发酵的技术性难题，获得富硒菌丝体，并进一步研究了菌丝体治疗胃溃疡活性，证明猴头菇富硒菌丝体能用于治疗胃溃疡以及相关疾病等。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是通过摇瓶液体培养和深层发酵罐培养获得富硒猴头菇菌丝体。所述的获得方法，将猴头菇菌种放入培养箱里活化，从平板上切取菌丝浓密，生长良好的菌种分别接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中，倒置培养至菌丝长满平板；从平板上切取菌块，接入液体种子液培养基中，震荡培养。将液体种子接种至装有含Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶中，震荡培养。离心或过滤取菌丝体，用蒸馏水冲洗，烘干，得摇瓶培养富硒猴头菇菌丝体。所述的获得发酵罐培养富硒猴头菇菌丝体所述方法获得猴头菇种子液后接入发酵罐培养。离心或过滤取菌丝体，用蒸馏水冲洗，烘干，得发酵罐培养富硒猴头菇菌丝体。具体方案如下：步骤一：将活化后的猴头菇菌种接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中，倒置培养至菌丝长满平板，从平板上切取菌块，接入含有Na2SeO3的液体种子液培养基中，在转速50-300rpm下震荡培养5-14d，得到富硒猴头菇菌丝体种子液；步骤二：将步骤一中的富硒猴头菇菌丝体种子液接种于Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶中，在温度为24-30℃，转速为50-300rpm下震荡培养培养时间5-14d，将得到的发酵液离心或过滤取菌丝体，用蒸馏水冲洗，烘干，得发酵培养的富硒猴头菇菌丝体。所述步骤一中，活化温度为24-30℃。所述步骤一中，活化时间为15-60min。所述步骤一中，平板倒置培养温度为24-30℃。所述步骤一中，种子液震荡培养温度为24-30℃。所述步骤一中，种子液震荡培养转速为50-300rpm。所述步骤一中，种子液震荡时间为5-14d。所述步骤一中，种子液中Na2SeO3的浓度为2-20μg/mL。所述步骤一中，种子液的成分包括马铃薯18-22%，葡萄糖0.8-1.5%，麦芽糖0.8-1.5%，MgSO40.1-0.2%，K2HPO40.05-0.2%，pH自然。进一步优选方案为，种子液成分为马铃薯20%，葡萄糖1%，麦芽糖1%，MgSO40.15%，K2HPO40.1%，pH自然。所述步骤二中，摇瓶发酵温度为24-30℃。所述步骤二中，摇瓶发酵时间为5-14d。所述步骤二中，摇瓶发酵转速为50-300rpm。所述步骤二中，摇瓶发酵培养液中Na2SeO3的浓度为2-20μg/mL。所述步骤二中，摇瓶发酵接种量为5-15%。所述步骤二中，发酵罐培养温度为24-30℃。所述步骤二中，发酵罐培养转速为50-300rpm。所述步骤二中，发酵罐培养时间为5-10d。所述步骤二中，发酵罐DO为20-80%。所述步骤二中，发酵培养基成分包括4-6.5%可溶性淀粉、4-6.5%黄豆粉、0.01-0.05%CaCl2、20-28mg/100mLVB1+VB2+VB6。进一步优选方案为发酵罐培养基成分为5.8%可溶性淀粉、5.8%黄豆粉、0.04%CaCl2、24mg/100mLVB1+VB2+VB6。所述方法中，发酵罐培养的接种量为5-15%。本专利技术目的之二是提供一种富硒且质量可控的猴头菇菌丝体在制备用于治疗消化性溃疡、与炎症相关的疾病药物中的应用。将上述方法制备得到的富硒猴头菇菌丝应用于胃粘膜损伤小鼠中，具有一定的作用，因此可应用于制备治疗消化性溃疡、与炎症相关疾病的药物。所述方法中，步骤二中菌丝体产量在1.5g/100mL以上。所述方法中，步骤二中菌丝体有机硒含量在100mg/kg菌丝以上。食用菌将无机硒转化成有机硒，主要是通过以下两种方式：（1）将无机硒同化成硒氨基酸，如硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸和硒代半胱氨酸，并进一步合成硒蛋白；（2）将无机硒同化合成硒多糖。本专利技术的技术方案，特点在于在固体培养基和液体培养基中均添加高浓度的硒使菌丝体的耐硒能力和无机硒转化能力不断增强，同时对种子培养基和发酵培养基配方进行优化，得到高产量的菌丝体和含量高的有机硒。附图说明图1为富硒猴头菇菌丝体减少乙醇所致小鼠胃粘膜面积的作用。其中，C空白组，M模型组，P阳性组，LD低剂量组，MD中剂量组，HD高剂量组。图2为富硒猴头菇菌丝体抑制乙醇所致小鼠胃粘膜损伤面积的效率。具体实施方式下面结合实施例，进一步说明本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。说明书及实施例中采用的化学试剂、层析柱等，如无特殊说明均按常规实验条件下进行操作，或按供应商提供的说明进行操作。实施例1：摇瓶培养富硒猴头菇菌丝体的制备方法。将猴头菇菌种放入培养箱里活化，30min后，从平板上切取1cm2菌丝浓密，生长良好的菌种分别接入含有6μg/mLNa2SeO3的PDA平板培养基中，28℃倒置培养至菌丝长满平板；从平板上切取1cm2菌块，接入液体种子液培养基中，25.8℃震荡培养7d，转速为150r/m。将液体种子接种至装有含12μg/mLNa2SeO3的发酵培养基的摇瓶中，25.8℃震荡培养7d，转速为150r/m。离心或过滤取菌丝体，用蒸馏水冲洗，烘干，得摇瓶培养富硒猴头菇菌丝体，产量达1.5g/100mL以上，菌丝体有机硒含量在100mg/kg。实施例2：发酵罐培养富硒猴头菇菌丝体的制备方法将猴头菇菌种放入培养箱里活化，30min后，从平板上切取1cm2菌丝浓密，生长良好的菌种分别接入含有6μg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.富硒猴头菇菌丝体，其特征在于：富硒猴头菇菌丝体是将猴头菇在固体富硒PDA培养基培养后得到的菌丝接种于富硒液体种子液培养基，经振荡培养接种于装有液体培养基的摇瓶中，振荡培养，离心或过滤，烘干后得到的菌丝体有机硒含量在100 mg/ kg菌丝以上的富硒猴头菇菌丝体。

【技术特征摘要】
1.富硒猴头菇菌丝体，其特征在于：富硒猴头菇菌丝体是将猴头菇在固体富硒PDA培养基培养后得到的菌丝接种于富硒液体种子液培养基，经振荡培养接种于装有液体培养基的摇瓶中，振荡培养，离心或过滤，烘干后得到的菌丝体有机硒含量在100mg/kg菌丝以上的富硒猴头菇菌丝体。2.根据权利要求1所述的富硒猴头菇菌丝体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：将活化后的猴头菇菌种接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中，24℃-30℃下倒置培养至菌丝长满平板，从平板上切取菌块，接入含有Na2SeO3的液体种子液培养基中，在转速50-300rpm下震荡培养5-14d，得到富硒猴头菇菌丝体种子液；步骤二：将步骤一中的富硒猴头菇菌丝体种子液接种于Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶中，在温度为24-30℃，转速为50-300rpm下震荡培养培养时间5-14d，将得到的发酵液离心或过滤取菌丝体，用蒸馏水冲洗，烘干，得发酵培养的富硒猴头菇菌丝体。3.根据权利要求2所述的富硒猴头菇菌丝体的制备方法，其特征在于，步骤一中，含有Na2SeO3的PDA平板培养基中，Na2SeO3的浓度为2-20μg/mL。4.根据权利要求2所述的富硒猴头菇菌丝体的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜宁，刘宥蘅，刘晓鹏，
申请(专利权)人：湖北民族学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42