以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用制造技术

本申请公开了以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用，其中，以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。本申请的应用中，TIPE2基因缺失的肿瘤MDSC，一方面，能够预防并抑制肿瘤发生和生长，并且，能够抑制已有的肿瘤的生长速度；另一方面，能够增强抗肿瘤的免疫反应；可以用于制备肿瘤预防或治疗的新靶向药物。

The Application of Tumor MDSC Targeted by TIPE2 Gene in the Preparation of Drugs to Prevent or Treat Tumors

This application discloses the application of tumor MDSC targeting TIPE2 gene in the preparation of drugs for cancer prevention or treatment, in which TIPE2 gene targeting includes gene knockout, gene knockout or chemical drugs to reduce the expression of TIPE2 gene. In the application of this application, MDSC with TIPE2 gene deletion, on the one hand, can prevent and inhibit the occurrence and growth of tumors, and also can inhibit the growth rate of existing tumors; on the other hand, it can enhance the anti-tumor immune response; it can be used to prepare new targeted drugs for cancer prevention or treatment.

【技术实现步骤摘要】
以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用
本申请涉及肿瘤靶向治疗领域，特别是涉及一种以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。
技术介绍
TIPE2，即肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8-2，是TNFAIP8家族的一员。据报道，TIPE2是一个免疫负调控因子，选择性地高表达于胸腺、脾脏、淋巴结等免疫器官及炎症组织，对抑制炎症发生、维持免疫稳态具有关键性作用。TIPE2负调NF-κB和MAPK信号通路，抑制TCR介导的T细胞激活和TLR介导巨噬细胞先天免疫，起到抗炎的作用。其表达水平下调往往伴随着乙型肝炎、系统性红斑狼疮、糖尿病肾炎、实验性中风、儿童免疫性哮喘、动脉粥样硬化等炎症性疾病的发生。髓系来源的抑制性细胞(缩写MDSC)是肿瘤微环境的主要组成部分。这类细胞的主要特点是具有强大的免疫抑制活性。在荷瘤宿主中，MDSC在骨髓中产生，然后迁移到外周淋巴器官和肿瘤中，有助于形成肿瘤微环境。最近的研究表明MDSC在肿瘤和外周淋巴器官中具有不同的功能和命运。髓系细胞的分化和功能异常是癌症的一个标志。MDSC能加速肿瘤进程，主要通过提高肿瘤细胞的存活、促进血管再生、促进肿瘤细胞侵袭至健康组织和加速转移来实现。MDSC由骨髓(缩写BM)中共同的髓系祖细胞分化而来。MDSC的发育受到两类复杂的信号网络的调控。一类信号促进聚集这类未成熟髓系细胞，而另一类则提供病理性激活这类细胞的信号。肿瘤环境下骨髓髓系细胞组成被证实已经发生改变，这是因为大量研究表明在荷瘤宿主的骨髓中聚集了MDSC。MDSC的病理性激活是髓系细胞受到持续较低强度的肿瘤信号刺激的结果，其特征是具有相对较低的吞噬活性，持续产生活性氧簇(ROS)、一氧化氮(NO)和大量抗炎细胞因子。这与在清除细菌和病毒情况下髓系细胞的激活截然不同，清除细菌和病毒情况下的特征是：迅速激活吞噬功能，引发呼吸爆发，释放促炎细胞因子。炎症消失后，恢复正常的髓系发生。MDSC具有与中性粒细胞和单核细胞不同的生化和基因组特征。这些特征包括：表达大量的NADPH氧化酶(Nox2)，导致增加产生超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)和过氧硝酸盐(PNT、ONOO-)形式的活性氧簇(ROS)；上调表达精氨酸酶1(arg1)和一氧化氮合成酶2(nos2)基因，分别使精氨酸酶1(Arg1)和一氧化氮(NO)的产生量增加；上调激活转录调控因子C/EBPβ和STAT3；下调转录因子IRF8活性以及增加产生S100A8/9蛋白质。另外最近的研究也表明miR-142-3p也对MDSC具有特异性的调控作用。由于这些不同特征减弱了MDSC分化为包括巨噬细胞、树突状细胞和成熟的中性粒细胞在内的成熟髓系细胞的能力。过量产生的ROS、NO、Arg1和抑制性细胞因子决定了MDSC的免疫抑制活性。MDSC来源于骨髓造血祖细胞和不成熟髓细胞，正常生理情况下能够分化发育为成熟的中性粒细胞、树突状细胞和巨噬细胞，因此促进MDSC的分化成熟是靶向MDSC肿瘤免疫治疗的一项策略。而合理剔除已扩增及活化的MDSC更是尤为重要的治疗策略。因MDSC至今尚未有区别于IMC和成熟中性粒细胞的特异性表面标志，给MDSC靶向剔除策略带来困难。如Gr-1也表达在成熟中性粒细胞表面，抗Gr-1抗体清除MDSC的同时，功能性中性粒细胞也相应被清除，导致机体抗感染等免疫防御功能降低。因此，寻找新的既能有效限制MDSC免疫抑制功能，又能最大程度地降低其副作用的治疗靶点是临床上靶向MDSC的肿瘤免疫治疗应用成败的关键。
技术实现思路
本申请的目的是提供一种新肿瘤预防或治疗的靶点，以及该靶点在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：本申请的一方面公开了一种以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；其中，以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。需要说明的是，本申请经过研究发现，TIPE2基因缺失的肿瘤MDSC，能够抑制新种植的肿瘤细胞的生长，具有预防肿瘤的效果；并且能够治疗并抑制已经存在的肿瘤细胞；因此，TIPE2基因缺失的肿瘤MDSC能够用于制备预防或治疗肿瘤的药物。其中TIPE2基因缺失可以通过基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达实现。还需要说明的是，本申请的一种实现方式中，制备了TIPE2基因缺失的小鼠肺癌的肿瘤MDSC，即TIPE2基因确实的肺癌肿瘤MDSC，证实其能够有效的抑制肺癌肿瘤生长，具有很好的抗肺癌效果。可以理解，以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物时，采用相应的肿瘤MDSC即可制备治疗或预防相应肿瘤的药物，在此不做具体限定。优选的，本申请的应用特别指，基于肿瘤MDSC进行细胞免疫疗法预防或治疗肿瘤。本申请的另一方面公开了一种以TIPE2基因为靶点在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；其中，以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。需要说明的是，本申请经过研究发现，TIPE2基因缺失其本身对于肿瘤有抑制作用，因此，可以TIPE2基因为靶点制备预防或治疗肿瘤的药物。本申请的另一方面公开了一种TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC。本申请的另一方面公开了本申请的TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC的制备方法，包括以下步骤，采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；其中，肿瘤细胞生长为肿瘤组织块一般在2-3周内，即种植肿瘤细胞后2-3周内即可采取肿瘤组织块；消化完成后采用完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；其中，采用完全培养基终止消化就是直接用完全培养基加满离心管即可终止消化；本申请的一种实现方式中，细胞筛网为70μm筛网，经过研磨后肿瘤细胞全部通过细胞筛网悬浮于组织研磨液中；对组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；其中，4℃低速离心是指在4℃下进行较低速度的离心，该离心速度下，细胞仍然悬浮在溶液中，而较大的杂质则离心沉淀被去除，本申请的一种实现方式中低速离心的速度为60g；4℃高速离心是指在4℃下进行较高速度的离心，该离心速度下，细胞被离心沉淀，用于去除上清液，本申请的一种实现方式中高速离心的速度为1260g；将收集的沉淀细胞用RPMI1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的，将细胞的RPMI1640完全培养基重悬液加入按照试剂盒配制的分离液液面上，1260g、25℃离心后，用吸管吸取并收集离心管中出现的两层环状的乳白色细胞层；其中，小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒，本申请的一种实现方式中，具体采用的是购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司的LDS1090Z试剂盒，分离液液面或者梯度界面按照其说明书披露的常规方法制备，在此不做具体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。

【技术特征摘要】
1.以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于；所述应用包括基于所述肿瘤MDSC进行细胞免疫疗法预防或治疗肿瘤。3.以TIPE2基因为靶点在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。4.一种TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC。5.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，所述酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；消化完成后采用完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；对所述组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；将收集的沉淀细胞用RPMI1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，陈有海，鄢德洪，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44