The invention discloses a preparation method of a brown planthopper Vg polypeptide and a polyclonal antibody thereof. The amino acid sequence of the Vg polypeptide is NPASNSESNQRSSH. The preparation steps of the polyclonal antibody are as follows: (1) antigenic epitope analysis of the Vg protein of brown planthopper; (2) design and synthesis of the Vg polypeptide of brown planthopper; (3) cross-linking of synthetic polypeptide with carrier protein; (4) preparation of rabbit anti-brown planthopper Vg polypeptide antibody; (5) collection and isolation of the serum containing the antibody, purification of the antibody, that is to obtain the anti-brown planthopper Vg polypeptide antibody. The polyclonal antibody of brown planthopper Vg polypeptide obtained by the invention has good specificity and high purity, can specifically bind with the brown planthopper Vg protein, and can be used for the related research of brown planthopper Vg protein, such as the analysis of its characteristics, functions, expression profile and content.
【技术实现步骤摘要】
一种褐飞虱Vg多肽及其多抗制备方法
本专利技术涉及一种多肽及其抗体制备方法,这种抗体主要用于天然蛋白抗原的检测,具体是一种兔抗褐飞虱Vg多肽多克隆抗体的制备方法。
技术介绍
Vg全称为vitellogenin,为卵黄原蛋白,在昆虫卵子发生等生殖过程中发挥着至关重要的作用。褐飞虱是农业重要害虫,对褐飞虱的Vg进行研究或检测对于褐飞虱的防治具有重要意义。
技术实现思路
(1)本专利技术的目的在于提供一种Vg多肽,其序列为:NPASNSESNQRSSH。(2)本专利技术的另一目的在于提供一种特异性好、纯度高、可与组织或细胞中天然Vg蛋白特异识别的Vg多肽多克隆抗体及其制备方法。(3)所述的Vg多肽多克隆抗体通过以下技术方案实现:步骤一:在合成所述多肽序列时,在其N端增加一个半胱氨酸,方便与载体蛋白偶联,用多肽自动合成仪合成Vg修饰多肽,纯化后与载体蛋白KLH偶联,形成Vg修饰多肽-KLH复合蛋白;步骤二:将乳化后的Vg修饰多肽-KLH复合蛋白在兔背部皮下注射,初次免疫后,进行3次加强免疫;步骤三:收集、分离得到含有兔抗褐飞虱Vg修饰多肽抗体的血清;步骤四:将抗血清通过Vg多肽亲和层析柱进行肽亲和纯化,得到Vg多肽抗体;步骤五:对Vg多肽抗体进行效价检测;步骤六:通过WesternBlot对Vg多肽抗体的特异性进行鉴定。附图说明图1为WesternBlot图,图中免疫印迹的目的条带大小在200kDa左右,与Vg蛋白的理论分子量(227.8kDa)大小一致。具体实施方式下面结合具体实施例,进一步阐述本专利技术。应理解,这些实施例仅用于解释本专利技术,而不用于限制本专利技 ...
【技术保护点】
1.一种Vg多肽,其特征在于:氨基酸序列为NPASNSESNQRSSH。
【技术特征摘要】
1.一种Vg多肽,其特征在于:氨基酸序列为NPASNSESNQRSSH。2.一种兔抗褐飞虱Vg多肽的抗体制备方法,其特征在于:按权利要求1所述Vg多肽序列合成修饰多肽,将合成的修饰多肽与载体蛋白交联形成复合蛋白,用复合蛋白免疫动物,取免疫动物的血制备抗血清,从血清中分离纯化抗体。3.根据权利要求2所述的一种兔抗褐飞虱Vg多肽的抗体制备方法,其特征在于:所述修饰多肽为在权利要求1的氨基酸序列尾端增加一个半胱氨酸残基,所述载体蛋白为匙...
【专利技术属性】
技术研发人员:郑荣儿,许益鹏,俞晓平,
申请(专利权)人:中国计量大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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