一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用，使用含有离子液体的溶液来提取和溶解细胞中的膜蛋白质复合物，采用免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，并可利用蛋白质免疫印迹法或质谱分析方法检测。该方法既能提高膜蛋白质复合物的提取能力，又能维持膜蛋白质复合物的稳定性，具有胰酶兼容性。本发明专利技术可应用于健康和疾病生物体的细胞中的膜蛋白质复合物的分析中。

A Membrane Protein Complex Extraction Method Based on Ionic Liquids and Its Application

The present invention relates to a method for extracting membrane protein complexes based on ionic liquids and its application. Membrane protein complexes in cells are extracted and dissolved by solution containing ionic liquids, and target membrane protein complexes are obtained by immunoprecipitation method, and can be detected by protein immunoblotting or mass spectrometry. This method can not only improve the extraction ability of membrane protein complexes, but also maintain the stability of membrane protein complexes with trypsin compatibility. The present invention can be applied to the analysis of membrane protein complexes in cells of healthy and diseased organisms.

【技术实现步骤摘要】
一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用
本专利技术涉及一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，提高蛋白质复合物，尤其是膜蛋白质复合物的提取效率，并可应用于健康和疾病生物体的细胞中的膜蛋白质复合物样品的分析中。
技术介绍
膜蛋白质的种类繁多，多数膜蛋白质分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。膜蛋白质通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结构里面，很难溶解在水性缓冲液系统中，具有丰度低、疏水性强、复合物易解离等问题。膜蛋白质的强疏水性，使得构成复合物的蛋白质性质差异显著，因此在确保提取效率的同时，现有提取溶剂体系很难保持膜蛋白质复合物结构的稳定性。膜蛋白质助溶剂，包括有机溶剂、有机酸、尿素和十二烷基磺酸钠等，都会在不同程度上破坏通过相互作用形成的膜蛋白质复合物，因此很难真实、有效的反映出膜蛋白质复合物的组成。针对天然状态下膜蛋白质复合物难以提取的问题，通过发展基于新型溶剂体系的蛋白质复合物提取方法，提高蛋白复合物，尤其是膜蛋白质复合物的提取效率。近年来研究的离子液体是一种新兴的绿色溶剂，具有溶解能力强、热稳定性好、设计可控、极性可调等优点，作为有效的生物相容性介质，不仅可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：使用含离子液体的溶液对细胞进行裂解以获取膜蛋白质复合物，利用免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，利用蛋白质免疫印迹法或质谱分析方法进行目标膜蛋白质复合物获取的检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：使用含离子液体的溶液对细胞进行裂解以获取膜蛋白质复合物，利用免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，利用蛋白质免疫印迹法或质谱分析方法进行目标膜蛋白质复合物获取的检测。2.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：具体过程包括：(1)使用碱性缓冲溶液配制离子液体溶液，加入辅助添加剂，即为膜蛋白质复合物提取液；向细胞中加入膜蛋白质复合物提取液，并将细胞进行裂解，以提取和溶解细胞中的蛋白质复合物；(2)将步骤(1)中所得的样品溶液收集后离心，获取蛋白质复合物，弃去细胞沉淀；(3)将步骤(2)中获取的蛋白质复合物少量移取直接用于二喹啉甲酸法测浓度和蛋白质免疫印迹实验，检测对细胞中所含目标膜蛋白质复合物的提取效果；其余移取用于免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，再进行蛋白质免疫印迹实验或质谱分析检测膜蛋白质复合物的稳定性。3.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的细胞，包括健康生物体的细胞和疾病生物体的细胞。4.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的膜蛋白质复合物提取液中，离子液体为阳离子部分为烷基链部分含1-100个碳的伯胺类、仲胺类、叔胺类或季铵类阳离子；阴离子部分为F-、H2PO4-、HPO42-、PO43-、HSO4-、SO42-、Cl-、NO3-、Br-、ClO3-、HCOO-、CH3COO-、CH3CH2COO-或CH3CH2CH2COO-中的一种或两种以上；离子液体的质...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，褚宏伟，赵宝锋，孙瑞，杨开广，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21