The invention relates to a method for separating and purifying stevioside by strong anion exchange chromatography on silica gel matrix. Stevioside C, rebaudioside A and rebaudioside A are obtained simultaneously by liquid chromatography with leaves of Stevia rebaudiana or crude stevioside as raw materials, HP SAX silica gel matrix strong anion exchange chromatographic packing or homogeneous product chromatographic column as separation medium. The invention also relates to the application of the above method in the separation and purification of stevioside, rebaudioside C and rebaudioside. The method of the invention is simple and fast, and can be separated in a single time within 15 minutes. The purity of the purified product is higher than 99.0%, the repeatability is good and the operability is strong. The chromatographic separation medium can be cleaned with an arbitrary proportion of organic solvent aqueous solution or even 100% water to remove the impurities such as inorganic salts and pigments brought by the sample on the chromatographic column head, and the separation medium does not hydrolyze or collapse during the cleaning process. The separating medium has long service life and can be used repeatedly for a long time.
【技术实现步骤摘要】
一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法
本专利技术属于天然产物提取纯化技领域,特别涉及一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法。
技术介绍
甜菊糖苷是从菊科植物甜叶菊的叶子中提取出来的一类新型天然甜味剂,甜菊糖苷甜度为蔗糖的250~450倍,其中甜菊苷(St)的甜度约为蔗糖的300倍,瑞鲍迪苷A(RA)的甜度约为蔗糖的450倍,味感更佳。甜菊糖苷因食用后不被吸收,不产生热能,是重要的甜味替代剂和风味增强剂,广泛应用于食品、饮品、调味品的生产中。目前甜菊糖苷的提取纯化方法主要有大孔吸附树脂法、膜分离法、溶剂结晶法和色谱分离法等,这些方法均不能快速制备高纯度糖苷单体,因此一种制备高纯度糖苷单体的方法,有待于进一步探索。HP-SAX键合固定相是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质,通过使用高纯度键合试剂在硅胶上键合季铵强阴离子交换基团,具有季铵和苯基官能团的混合化学结构,这种强阴离子交换相与疏水相的混合模式特别适合特殊结构的亲水化合物的高效和高选择性的分离,色谱柱可以使用多种流动相,包括有机溶剂、水与有机溶剂(如甲醇和乙腈)的混合物、缓冲液(如磷酸盐)等,目前,未见采用硅胶基质强阴离子交换色谱同时分离纯化制备高纯甜菊糖苷技术研究的报道。综上可以看出,硅胶基质强阴离子交换色谱在甜菊糖苷制备纯化方面具有明显优势,在此背景下,专利技术人研究了一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法。
技术实现思路
本专利技术的第一目的是提供一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法,可以快速高效的分离纯化甜菊糖苷。本专利技术的第二目的是提供上述硅 ...
【技术保护点】
1.一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法,其特征在于:以甜叶菊叶片或甜菊糖苷粗品为原料,以HP‑SAX硅胶基质强阴离子交换色谱填料或同型成品色谱柱为分离介质,通过制备液相色谱法分离纯化,同时得到甜菊苷、瑞鲍迪苷C和瑞鲍迪苷A三种甜菊糖苷。
【技术特征摘要】
1.一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法,其特征在于:以甜叶菊叶片或甜菊糖苷粗品为原料,以HP-SAX硅胶基质强阴离子交换色谱填料或同型成品色谱柱为分离介质,通过制备液相色谱法分离纯化,同时得到甜菊苷、瑞鲍迪苷C和瑞鲍迪苷A三种甜菊糖苷。2.根据权利要求1所述的一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法,其特征在于:所述的HP-SAX硅胶基质强阴离子交换色谱填料是色谱分离介质粒径为5μm的高纯度硅胶基质季铵强阴离子交换基团键合填料。3.根据权利要求1所述的一种硅胶基质强阴离子交换色谱分离纯化甜菊糖苷的方法,其特征在于,具体步骤如下:步骤一、样品的前处理;步骤二、甜菊糖苷的分离纯化:(a)硬件准备:将HP-SAX硅胶基质强阴离子交换色谱填料装填到色谱柱中并测试其分离性能是否达标,达标后安装色谱柱;或将购买的HP-SAX成品色谱柱直接安装到制备液相色谱仪上,色谱柱21.2mm×250mm,5μm,启动制备液相色谱仪;(b)色谱柱的活化与平衡:依次用30倍柱体积pH7.0的150mmol/L磷酸钠溶液活化色谱柱,30倍柱体积去离子水清洗色谱柱,再用体积比为75/25的乙腈/水平衡色谱柱;(c)分离制备:将制备液相色谱仪的条件调节至准备状态,色谱柱温为35℃,流速为10mL/min,检测器波长210nm,馏分收集器为等待状态;将处理液过0.45μm滤膜后注入1mL至制备液相色谱仪,同时触发检测器与馏分收集器,按照各组分保留时间分别接收样品,收集起点及结束点为各峰半峰宽处;(d)后处理:在接收样品完毕后,将色谱柱反接,冲洗柱头。步骤三、测定三...
【专利技术属性】
技术研发人员:贾鹏禹,孙蕊,郑殿峰,冯乃杰,冯胜杰,
申请(专利权)人:黑龙江八一农垦大学,
类型:发明
国别省市:黑龙江,23
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