以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用制造技术

本申请公开了一种以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本申请为原发性肿瘤和转移性肿瘤的治疗提供了一种新的靶点，即TIPE2基因，通过抑制TIPE2基因表达，不仅能够抑制原发性肿瘤的生长，而且，能够抑制肿瘤细胞转移；因此，可以TIPE2基因为靶点制备治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的药物，为肿瘤的靶向药物治疗提供了一种新的方案和策略。

Application of TIPE2 Gene as Target in Preparation of Drugs for Tumor Treatment

This application discloses an application of TIPE2 gene as a target in the preparation of drugs for cancer treatment. This application provides a new target for the treatment of primary and metastatic tumors, i.e. TIPE2 gene. By inhibiting the expression of TIPE2 gene, it can not only inhibit the growth of primary tumors, but also inhibit the metastasis of tumor cells. Therefore, TIPE2 gene can be used as a target to prepare drugs for the treatment of primary or metastatic tumors, providing targeted drug therapy for tumors. A new scheme and strategy is proposed.

【技术实现步骤摘要】
以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用
本申请涉及肿瘤靶向治疗领域，特别是涉及一种以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
技术介绍
TIPE2，即肿瘤坏死因子a诱导的蛋白8-2，是TNFAIP8家族的一员。据报道，TIPE2是一个免疫负调控因子，选择性地高表达于胸腺、脾脏、淋巴结等免疫器官及炎症组织。TIPE2负调NF-κB和MAPK信号通路，抑制TCR介导的T细胞激活和TLR介导巨噬细胞先天免疫，起到抑制炎症发生、维持免疫稳态具有关键性作用。此外，TIPE2还表达于肿瘤细胞或肿瘤组织。临床标本检测发现肝癌、胃癌和非小细胞肺癌中TIPE2表达水平较低，但在肾细胞癌、结直肠癌症和甲状腺癌中TIPE2呈现高表达。研究发现，TIPE2能对肿瘤细胞内Ras、Rac信号通路起到负性调控作用。TIPE2可以直接与RalGDS、RacGTPases结合，抑制Ras、Rac介导的信号转导及后续一系列生物学行为。目前临床上肿瘤免疫疗法可供使用且有效的治疗靶点非常有效，主要有免疫检验点分子PD-1、PD-L1、CTLA-4或肿瘤抗原标志物HER2、VEGF、NY-ESO1等有限的分子。由于有效靶点的限制，使得临床上肿瘤免疫治疗的有效范围仅为20％的肿瘤，极大限制了肿瘤免疫治疗的应用范围，因此急需寻找新的肿瘤抗原标志物，为临床上治疗原发性或转移性肿瘤的免疫疗法提供新的作用靶点和治疗策略。
技术实现思路
本申请的目的是提供一种新的原发性肿瘤或转移性肿瘤的治疗靶点，即TIPE2基因，以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用。为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：本申请的一方面公开了一种以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其中，以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。需要说明的是，本申请经过研究发现，TIPE2基因缺失，不仅能够治疗原发性肿瘤，而且能够抑制肿瘤细胞转移，能够用于治疗转移性肿瘤。因此，可以TIPE2基因为靶点制备治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的药物；只要能够降低TIPE2基因的表达，就可以起到治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的效果。本申请的再一面公开了以TIPE2基因为靶点的肿瘤浸润白细胞在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其中，TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。本申请的应用特别指基于肿瘤浸润白细胞进行免疫疗法治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤。需要说明的是，本申请经过研究发现，TIPE2基因缺失的肿瘤浸润白细胞，能够增强抗肿瘤免疫反应，因此，同样可以TIPE2基因为靶点的肿瘤浸润白细胞制备治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的药物。本申请的再一方面公开了一种TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞。本申请的另一方面公开了本申请的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞的制备方法，包括以下步骤，采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；其中，肿瘤细胞生长为肿瘤组织块一般在2-3周内，即种植肿瘤细胞后2-3周内即可采取肿瘤组织块，本申请的一种实现方式中是种植后第16天采集的肿瘤组织块；消化完成后采用RPMI1640完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；其中，采用RPMI1640完全培养基终止消化就是直接用RPMI1640完全培养基加满离心管即可终止消化；本申请的一种实现方式中，细胞筛网为70μm筛网，经过研磨后肿瘤细胞全部通过细胞筛网悬浮于组织研磨液中；对组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；其中，4℃低速离心是指在4℃下进行较低速度的离心，该离心速度下，细胞仍然悬浮在溶液中，而较大的杂质则离心沉淀被去除，本申请的一种实现方式中低速离心的速度为60g；4℃高速离心是指在4℃下进行较高速度的离心，该离心速度下，细胞被离心沉淀，用于去除上清液，本申请的一种实现方式中高速离心的速度为1260g；将收集的沉淀细胞用RPMI1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的，将细胞的RPMI1640完全培养基重悬液加入按照试剂盒配制的分离液液面上，1260g、25℃离心后，用吸管吸取并收集离心管中出现的两层环状的乳白色细胞层；其中，小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒，本申请的一种实现方式中，具体采用的是购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司的LDS1090Z试剂盒，分离液液面或者梯度界面按照其说明书披露的常规方法制备，在此不做具体限定，1260g、25℃离心主要是为了达到更好的分离效果，该参数条件可以在试验允许的误差范围内调整；采用PBS溶液洗涤所收集的乳白色细胞层，1260g，4℃离心，弃上清，再采用PBS重悬，获得PBS细胞悬液，该PBS细胞悬液即本申请的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞。本申请中，1260g，4℃离心，其中1260g的离心速度是为了使细胞沉淀，而又不至于破裂；4℃的离心温度主要是使细胞处在一个较低温度下，减缓其生长代谢，使其能够更稳定的存在。本申请的一种实现方式中，给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植，其中所采用的肿瘤细胞为LLC小鼠肺癌细胞或B16F10小鼠黑色素肿瘤细胞；也就是说，种植LLC小鼠肺癌最终获得TIPE2基因敲除的肺癌肿瘤浸润白细胞，该肺癌肿瘤浸润白细胞对原发性或转移性的肺癌有很好的治疗效果；种植B16F10小鼠黑色素肿瘤细胞最终获得TIPE2基因敲除的黑色素肿瘤浸润白细胞，该黑色素肿瘤浸润白细胞对原发性或转移性的黑色素肿瘤有很好的治疗效果。优选的，在采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化之前，还包括将肿瘤组织块剪成小块，然后再进行消化。可以理解，将肿瘤组织块剪成小块可以更好的的进行消化，提高消化的质量和效率。优选的，酶混合液中含有50mg/mL的胶原酶I、50mg/mL的胶原酶IV、5mg/mL的透明质酸酶和1U/mL的脱氧核糖核酸酶。优选的，肿瘤细胞种植中，种植肿瘤细胞的量为每只小鼠2×106个肿瘤细胞。优选的，从小鼠身上取下肿瘤组织块，具体包括，将脱颈处死的小鼠浸泡于75％酒精中，随后将小鼠放置于无菌超净台上，用手术剪刀和镊子取下肿瘤组织块。本申请的再一面公开了本申请的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞在制备治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的药物中的应用。可以理解，本申请的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞具有很好的肿瘤抑制效果，能够抑制肿瘤生长和肿瘤细胞转移，因此，完全可以制备成相应的药物，用于治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤。其中，药物中还可以包括其它药学上可以接受的辅助成份或活性成份，在此不做具体限定。由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：本申请为原发性肿瘤和转移性肿瘤的治疗提供了一种新的靶点，即TIPE2基因，通过抑制TIPE2基因表达，不仅能够抑制原发性肿瘤的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；所述肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。

【技术特征摘要】
1.以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；所述肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。2.以TIPE2基因为靶点的肿瘤浸润白细胞在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；所述肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于；所述应用包括基于所述肿瘤浸润白细胞进行免疫疗法治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤。4.一种TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞。5.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，所述酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；消化完成后采用RPMI1640完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；对所述组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；将收集的沉淀细胞用RPMI1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的，将细...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，陈有海，鄢德洪，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44