一种玉米种子超低温保存的改进方法技术

在超低温下保存植物种子是能够实现种子长期保存的方法。本发明专利技术实现了在PEG4000和甘油，还有羟丙甲基纤维素，氯化钠进行简单处理后的种子，通过特殊的处理手法和步骤，可以高效的在超低温状态下进行植物种子的长期保存，并且通过本方法对比常规的超低温保存方法，能够在种子解冻后获得高活力，高出芽率的种子。

An improved method for cryopreservation of maize seeds

Preservation of plant seeds at ultra-low temperature is a method to achieve long-term seed preservation. The invention realizes the long-term preservation of plant seeds after simple treatment with PEG4000 and glycerol, hydroxypropyl methyl cellulose and sodium chloride. Through special treatment methods and steps, the seeds can be efficiently stored at ultra-low temperature. Compared with the conventional ultra-low temperature preservation method, the seeds with high vitality and high germination rate can be obtained after thawing.

【技术实现步骤摘要】
一种玉米种子超低温保存的改进方法
本方法涉及到一种植物种子超低温保存的技术，通过改进的超低温保存方法和处理手段，能够最大限度的增大植物种子冷冻复苏后的存活力。
技术介绍
种子的超低温保存，是指利用液氮等其它技术和冷源，使得种子在超低温下新陈代谢基本停止，遗传与裂变不发生的情况下的种子低温保存技术。在超低温下保存的生物资源相比于其它保存方法，不有强烈的组织破坏性，而且也不污染环境，免于病虫害的侵扰，具有保存物质的持久性，稳定性等一系列的优点。经过超低温下保存的种子资源，其化学成分不变，遗传组分也无任何改变，经过解冻后可以直接运用于下游的各种育种的分子生物学实验，非常的方便。但是利用超低温下保存玉米种子资源，也存在着种子资源超低温解冻后存活率低，发芽率低，出芽后适应期长，生长速度慢等一系列问题。为了更好的进行玉米各品种的资源研究，以及启动进行玉米各品种资源鉴定和资源保护的研究。发展新的改进方法，寻找一种有效而且价廉的方法，在超低温下进行有效的玉米种子保存技术，解决种子超低温保存后的出芽复苏率低的问题已经迫在眉睫。为此，我们实验室经过各种实验优化程序，找到了一种适宜玉米种子在超低温下保存的最佳和最便宜的途径。经过多次各种实验条件验证，有优良效果并且显著的提高了超低温解冻之后的种子的出芽率，存活率，以及种子出芽后的生长速度。
技术实现思路
目的是为了更好的保存植物的种子，解决在超低温保存植物种子的过程中，如何进一步增大种子复苏后活力，出芽率等等问题。附图说明经过我们的冻存步骤特殊处理的濮玉5号玉米种子，相比对于传统的冻存濮玉5号玉米种子的方法，具有明显更优良的适应环境的表现。在同样的复活步骤处理的过程中，经过特殊冻存步骤处理后的种子，发芽率高，其早期的生长也比传统处理方法生长更快，生长也更旺盛。保存种子出芽效果对比图，图1没有改进直接冻存后的种子出芽情况，图2改进后经过保护方法处理后的冻存种子出芽情况。种子出芽率和已发芽的种子一周的株高长度(单位cm，α＝0.01极为显著差异)具体实施方式对于传统的冻存方法，是将种子在低温下进行直接保存。本实验室发展出了一套精细的简单处理玉米种子冻存方法与流程，可以显著的增加冻存后复苏的效果。配置聚乙二醇PEG4000和甘油混合的保存液若干量，至少需要能装下所需要的种子。两者的浓度比例为1∶1。经过多次试验，我们确定采用混合的保护液配方，更有利于超低温保护种子。另外，配制羟丙甲基纤维素氯化钠无菌水缓冲液，浓度为羟丙甲基纤维素0.5％，氯化钠为0.5M/L。将种子先至于无菌的聚乙二醇PEG和甘油混合的保存液中5分钟，然后再至于无菌的羟丙甲基纤维素氯化钠缓冲液中浸泡5分钟。这个方法实施的具体过程是1在控制温度为25度，湿度为60％的小房间中，准备一盆装有37度的预热的无菌水，在此温度下准备玉米种子若干。37度的预热的无菌水提前配制且预热，无菌的聚乙二醇PEG和甘油1∶1混合的保存液也要事先混合配制好，还有无菌的羟丙甲基纤维素氯化钠缓冲液0.5％(含氯化钠为0.5M/L)也都提前配制并且37度预热。2准备一个空的灭菌超低温保存管，当然需要管的体积要足够大，足以装下玉米的种子3选择饱满而且稍微红晕的玉米种子，在超净台中，将玉米种子用双氧水灭菌消毒，然后再用无菌水冲洗玉米种子3遍待用。4将装有灭菌超低温保存管的种子置于37度预热的无菌水中再孵育5分钟左右5将装有灭菌超低温保存管的种子浸入无菌的聚乙二醇PEG4000和甘油1∶1混合的保护液中，在溶液中反复翻动，确保保护液和管中的种子接触充分，在保护液中也孵育5分钟。6将装满保护液的种子盖子密封好，然后在涡旋震荡已，震荡3分钟，在超净工作台中再倒掉聚乙二醇PEG4000和甘油的保护液。7将装有灭菌超低温保存管的种子从保护液中取出，然后再将管子置于无菌的羟丙甲基纤维素氯化钠缓冲液中浸泡5分钟，装满溶液后再盖好盖子。8将装有灭菌超低温保存管的种子，再放入程序降温盒中，然后先放入零下-80度的冰箱中，冰冻6个小时。9将装有灭菌超低温保存管的种子，从零下-80的冰箱中取出后，直接置于液氮中保存。这个过程中，一定要确保有足够的液氮，可以淹没管子到一定深度。或者将玉米种子直接置于液氮冰箱中，而不经过零下80度冰箱的这一步，但只要上述步骤能够有效的按流程走，该方法也能长期保存植物种子。10定期检查，并且给液氮罐添加液氮，种子将可以在液氮中长期保存。11种子解冻，将种子从液氮中取出后，迅速置于37度无菌预热的羟丙甲基纤维素0.5％，氯化钠为0.5M/L的溶液中，不停的搅拌活化处理。12种子活力复苏检测待得种子冷冻溶解以后，将种子置于MS基本培养基中再无菌培养2周，然后观察种子的出芽率，成活情况，以及一周生长高度等指标。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改进的植物种子超低温保存的方法，在这个改进方法中，一种混合聚乙二醇PEG4000和甘油的浓度比例为1∶1保护液配在植物超低温冻存前处理植物种子5分钟，确保种子一定要能够浸没在保护液中。

【技术特征摘要】
1.一种改进的植物种子超低温保存的方法，在这个改进方法中，一种混合聚乙二醇PEG4000和甘油的浓度比例为1∶1保护液配在植物超低温冻存前处理植物种子5分钟，确保种子一定要能够浸没在保护液中。2.根据权利要求书1中所叙，经过37度水预热冲洗后的种子，置于聚乙二醇PEG4000和甘油的浓度比例为1∶1保护液处理过的植物种子中孵育处理5分钟，再经过浓度为羟丙甲基纤维素0.5％，氯化钠为0.5M/L的溶液孵育处理5分钟，最后保存的时候，羟丙甲基纤维素氯化钠溶液和种子混合一起保存。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：中禾生物种业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44