苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基技术

本发明专利技术苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基，属于植物组织培养技术领域。培养方法包括：(1)选取苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗；(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗转接到含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基中进行生根培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L；所述生根培养基未经高温灭菌。本发明专利技术具有以下有益效果：在生根培养基中加入抑菌剂神仙水，既保证组培苗正常生长，又具有杀菌、抗菌功能，而且不会对组培苗生根过程造成危害。

Open Culture Method and Medium for Rooting Stage of Apple Dwarf Rootstock Tissue Culture Seedlings

The invention relates to an open culture method for rooting stage of Apple dwarfing rootstock tissue culture seedling and the medium used, belonging to the technical field of plant tissue culture. The culture methods include: (1) selecting Apple Dwarf Rootstock P3 tissue culture seedlings and apple dwarf rootstock MARK tissue culture seedlings; (2) transferring the selected Apple Dwarf Rootstock P3 tissue culture seedlings and apple dwarf rootstock MARK tissue culture seedlings to the rooting medium containing 0.01%-0.015% fairy water for rooting culture, the culture temperature is 25 ~ 2 (?) C, and the light time is 12 h/d; the composition of the rooting medium is 1/2MS. IBA2.0mg/L, sugar 30g/L and agar 6g/L were added to the rooting medium, which was not sterilized at high temperature. The invention has the following beneficial effects: adding the bacteriostatic immortal to the rooting medium can not only ensure the normal growth of tissue culture seedlings, but also have the functions of sterilization and antimicrobial, and will not cause harm to the rooting process of tissue culture seedlings.

【技术实现步骤摘要】
苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基。
技术介绍
传统组培过程繁杂的技术环节，都是围绕防止污染而制定的，控制污染成了组培中的首要技术，不能把污染率降低到可以接受的范围，也就意味着这项工艺不能进行下去，而影响污染的因素多种多样，如外植体的种类，取材的季节、时间、预处理方法，消毒药剂的种类，浓度，消毒时间以及消毒方法，培养基和器皿的灭菌，操作人员、工作坏境的要求等都与污染密切相关，因此，使得污染问题十分复杂，很难防治，成为限制组培产业化的重要原因之一。
技术实现思路
组培过程中的污染，主要表现为培养基的污染。营养丰富的培养基为细菌、真菌提供了适宜的滋生场所，因此，只要将培养基改造成既保证植物组织正常生长，又具有杀菌、抗菌功能的培养基，菌类一旦失去滋生场所，就不会对组培过程造成危害。解决了污染问题，使组培过程脱离严格的无菌坏境，从根本上简化组培环节，进行开放式组织培养是完全可能的，而关键是找到一种能够添加到培养基的抑菌剂。不经高压灭菌，使培养基成分免遭破坏，接种免超净工作台；还可利用不耐热的一次性航空杯等代替组培瓶，方便运输，从而简化组培环节，降低组培成本，提高组培效率，建立一套完整可行的开放式组织培养模式。抑菌剂的种类很多，如多菌灵，大蒜素，青霉素，百菌清，神仙水，山农一号等。由于苹果组培苗未进行过开放式培养，此试验的主要目的是探究苹果生根开放式培养的可能性，通过观察记录苹果组培苗在开放式培养过程中的污染情况、生长情况、生根情况，找到合适的抑菌剂和容器。本专利技术的目的在于公开了苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法。本专利技术的第二个目的在于公开了用于上述开放式培养方法的培养基。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，包括下述步骤：(1)选取苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗；(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗转接到含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基中进行生根培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L；所述生根培养基未经高温灭菌。0.01％～0.015％是神仙水在生根培养基中的浓度。上述技术方案所述的苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，其中：盛放生根培养基的容器为航空杯。用于苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法的培养基，其中：所述培养基为含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L；所述生根培养基未经高温灭菌。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术通过在生根培养基中加入抑菌剂神仙水，保证植物组织正常生长，又具有杀菌、抗菌功能。菌类一旦失去滋生场所，就不会对组培过程造成危害。2、本专利技术通过在生根培养基中加入抑菌剂神仙水，解决了污染问题，使组培过程脱离严格的无菌坏境，从根本上简化组培环节，进行开放式组织培养是完全可能的，而关键是找到一种能够添加到培养基的抑菌剂。不经高压灭菌，使培养基成分免遭破坏，接种免超净工作台；还可利用不耐热一次性航空杯等代替组培瓶，方便运输，从而简化组培环节，降低组培成本，提高组培效率，建立一套完整可行的开放式组织培养模式。附图说明：1、图1为苹果矮化砧木P3组培苗在含有0.01％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。2、图2为苹果矮化砧木MARK组培苗在含有0.01％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。3、图3为苹果矮化砧木P3组培苗在含有0.015％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。4、图4为苹果矮化砧木MARK组培苗在含有0.015％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。5、图5为苹果矮化砧木P3组培苗在山农一号(0.01％)饭盒中的苗情。6、图6为苹果矮化砧木P3组培苗在山农一号(0.01％)航空杯中的苗情。7、图7为苹果矮化砧木P3组培苗在神仙水(0.015％)饭盒中的苗情。具体实施方式：为使本专利技术的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本专利技术苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基作进一步的说明。实施例1：苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法：(1)选取苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗；(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗转接到含有0.01％神仙水的生根培养基中进行生根培养；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L；所述生根培养基未经高温灭菌；盛放生根培养基的容器为航空杯。苹果矮化砧木P3组培苗的开放培养生长情况见图1所示。苹果矮化砧木MARK组培苗的开放培养生长情况见图2所示。实施例2：苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法：本实施例的过程与实施例1相同，区别在于：神仙水的浓度为0.015％。苹果矮化砧木P3组培苗的开放培养生长情况见图3所示。苹果矮化砧木MARK组培苗的开放培养生长情况见图4所示。以下通过具体试验例对本专利技术的开放式培养方法和所用培养基具有的有益效果作进一步的说明。试验例1：一、试验材料：1、材料：苹果矮化砧木P3和MARK组培苗。来自北京市海淀区植物组织培养技术实验室组培瓶苗。2、抑菌剂：山梨酸钾，南通奥凯生物技术开发有限公司；山农一号，济南普朗特生物科技有限公司三型；神仙水，北京振泰园艺设施有限公司。3、容器：一次性航空杯、一次性塑料饭盒。二、试验方法：1、抑菌剂筛选试验：选取基本一致的组培瓶苗转接到含不同抑菌剂的生根培养基(所述生根培养基的组成为1/2MS培养基中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L)中，生根培养基不进行高温消毒；其中生根培养基中含有的抑菌剂浓度分别为：山梨酸钾2.5％、山农一号0.01％、山农一号0.015％、神仙水0.01％和神仙水0.015％。每种抑菌剂处理5瓶、每瓶6株，共计处理30株，重复3次，以不加抑菌剂正常高温消毒的生根培养基为对照。2、容器筛选试验：每次试验选不同类型容器各5个进行生根培养基的配制，重复3次。3、观察记录：每周观察记录组培苗的生长情况、植株高矮、叶片大小及颜色、污染情况和生根时间等内容；四周后统计生根情况，重点统计生根条数和根的长度。4、抗菌培养基的制备：培养基煮好后，根据不同培养目的，加入不同浓度的抑菌剂，然后，分装到一次性航空杯和一次性塑料饭盒，航空杯用PE保鲜膜封口，饭盒用盖子封口。5、在相对干净的接种室内，用75％的酒精将接种台面和手擦干净，揭开封口膜一角，用已灭菌的接种器具，把组培瓶苗接种到含不同抑菌剂的生根培养基，然后再将杯口封严即可。6、将已接好的植物材料置于培养架培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；培养过程中，及时清理污染的组培苗，减少污染源。三、结果与分析：1、不同抑菌剂对组培苗污染和生根的影响：在开放式培养过程中，不同抑菌剂对苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗的污染和生根情况均有影响。1.1不同抑菌剂对苹果矮化砧木P3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，包括下述步骤：(1)选取苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗；(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗转接到含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基中进行生根培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g/L；所述生根培养基未经高温灭菌。

【技术特征摘要】
1.苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，包括下述步骤：(1)选取苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗；(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木P3组培苗和苹果矮化砧木MARK组培苗转接到含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基中进行生根培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；所述生根培养基的组成为1/2MS中加入IBA2.0mg/L、糖30g/L和琼脂6g...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘兰英，张秦，张军民，李春玲，
申请(专利权)人：北京市海淀区植物组织培养技术实验室，北京海花生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11