本发明专利技术公开一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇‑金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法。其利用金纳米团簇与阿霉素的特异性相互作用后发生强烈光致电子转移，导致金纳米团簇的荧光发生猝灭，从而实现阿霉素的测定。阿霉素测定的线性范围为0.05~2μmol/L，最低检测限为0.005μmol/L。该检测新方法所用的金纳米团簇制备简便易得，具有操作简便、检测时间短、灵敏度高、特异性强等优点，易于推广使用。
【技术实现步骤摘要】
基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法
本专利技术基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇荧光材料，提供一种新型阿霉素（多柔比星）快速及超灵敏的检测方法，属于分析化学和纳米
技术介绍
众所周知阿霉素是蒽醌类化合物，广泛用于治疗白血病、乳腺癌等的治疗。虽然阿霉素已被证明是一种有效药物，但它的治疗指数低，长期用药或者剂量稍大便会引发一些严重的副作用，包括骨髓抑制和心脏毒性。许多的分析方法，包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、质谱、电化学方法等，都被报道可用于阿霉素的检测。但是，这些方法都存在某些缺陷，比如昂贵的仪器和有毒的试剂，复杂的前处理过程，重现性差，以及响应时间长等。因此，开发简单、准确、灵敏、快速测定阿霉素的方法相当重要。金纳米团簇（goldnanoclusters,AuNCs）是一种新型的荧光纳米材料，其具有尺寸小、无毒、水溶性好、光稳定性好、Stokes位移大、比表面积大、制备条件温和、表面易于修饰以及荧光性质随尺寸可调等突出优点，是近年来的研究热点，其已被广泛应用于催化、传感检测、纳米标记、医学成像和光电子学等领域。本专利技术以羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇荧光材料作为荧光探针，提供了一种简便、灵敏的阿霉素检测的新方法。
技术实现思路
鉴于上述的现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法。其中包括利用阿霉素与羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇之间强烈的光致电子转移作用，猝灭金纳米团簇的荧光，实现对阿霉素快速、灵敏检测，并且用于实际样品的检测。为了实现上述检测方法的目的，本专利技术采用以下技术方案：一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征是利用金纳米团簇与阿霉素的特异性相互作用后发生强烈光致电子转移，导致金纳米团簇的荧光发生猝灭，从而实现阿霉素的测定；所述的金纳米团簇由以下步骤制成的：将1mL浓度为0.4mol/L氢氧化钠溶液和1.6mL浓度为20mg/mL氯金酸预先混合，而后加入7.4mL浓度为50mg/mL羧化壳聚糖溶液和10mL浓度为0.1mol/L的二硫苏糖醇溶液，摇匀后置于37℃水浴锅中恒温反应8小时得到羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇；将反应后的金纳米团簇用截留分子量3500的透析袋在双蒸水中透析24小时，得到纯化后的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇。所述的一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征是能根据荧光光谱的最大发射波长645nm处的荧光强度来判断阿霉素的浓度。所述的一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征阿霉素的测定步骤如下：取0.1mL羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇溶液加入到1.9mL含不同浓度阿霉素的浓度为20mmol/L，pH=6.0的磷酸盐缓冲液中，混合均匀；反应结束后测定其在645nm处的激发波长为285nm的荧光强度值F；根据空白荧光强度值F0与含有阿霉素的荧光强度F的比值（F0/F）绘制标准曲线进行定量；阿霉素测定的线性范围为0.05~2μmol/L，最低检测限为0.005μmol/L。本专利技术所述的一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇快速测定血清样品中阿霉素的方法，其特征是包括如下步骤：取0.1mL羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇溶液加入到1.9mL人血清样品溶液中，混合均匀，反应结束后测定其在645nm处的激发波长为285nm的荧光强度值F；结合阿霉素测定的标准曲线计算阿霉素的含量，人血清样品的加标回收率在95.7~102.5%，相对标准偏差为1.12~1.62%。所述的金纳米团簇由以下步骤制成的：将1mL浓度为0.4mol/L氢氧化钠溶液和1.6mL浓度为20mg/mL氯金酸预先混合，而后加入7.4mL浓度为50mg/mL羧化壳聚糖溶液和10mL浓度为0.1mol/L的二硫苏糖醇溶液，摇匀后置于37℃水浴锅中恒温反应8小时得到羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇；将反应后的金纳米团簇用截留分子量3500的透析袋在双蒸水中透析24小时，得到纯化后的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇。具体地说，本专利技术采用下述技术方案：（一）金纳米团簇的制备将1mL氢氧化钠（0.4mol/L）和1.6mL氯金酸（20mg/mL）预先混合，加入7.4mL羧化壳聚糖溶液（50mg/mL），混匀，随后加入10mL二硫苏糖醇（0.1mol/L），37℃水浴孵育8小时。取出反应液，用截留分子量为3500的透析袋在双蒸水中透析24小时，得到纯化后的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇。制备过程中使用的所有玻璃器皿均经过王水浸泡，并用双蒸水彻底清洗，晾干。（二）阿霉素的测定将0.1mL步骤（一）制备的金纳米团簇溶液加入到1.9mL含不同浓度阿霉素的磷酸盐缓冲液（20mmol/L，pH=6.0）中，混合均匀后测定其在645nm处的荧光强度值F（激发波长为285nm）。根据F0（空白）与F（含有阿霉素）的比值（F0/F）绘制标准曲线进行定量。阿霉素测定的线性范围为0.05~2μmol/L，最低检测限为0.005μmol/L。本专利技术的优点：（1）本专利技术利用羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇与阿霉素特异性相互作用后发生光致电子转移，使得金纳米团簇的荧光受到抑制，从而表现出荧光光谱特征的变化，可以用于阿霉素的含量检测。（2）本专利技术所使用的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇，其制备过程简单快速，量子产率高。（3）本专利技术对样品的处理要求低，对阿霉素的检测特异性高，方法简便、快速。（4）本专利技术检测阿霉素的检测线性范围为0.05~2μmol/L，检测的灵敏度高，检测限为0.005μmol/L，优于或者接近于其他检测方法的灵敏度。此外，加标回收率在95.7%~102.5%之间，可用于实际样品检测。本专利技术的测定方法，可以通过荧光分光光度计测定出样本中阿霉素的浓度水平，测试灵敏度高，特异性好，精确度好。检测过程简便，稳定性好，具有操作简便、检测时间短、灵敏度高、特异性强等优点，易于推广使用。附图说明图1为羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的荧光发射光谱图。图2为羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇与浓度为5μmol/L的阿霉素发生作用后的荧光发射光谱图。图3为羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇与浓度为5μmol/L的阿霉素发生作用前（A）和后（B）在紫外灯照射下的外观对照图。图4为反应时间对阿霉素猝灭羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇荧光强度的影响图。纵坐标表示F0（空白）与F（含有阿霉素）的比值。图5为体系pH值对阿霉素猝灭羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇荧光强度的影响图。纵坐标表示F0（空白）与F（含有阿霉素）的比值。图6为不同浓度阿霉素存在时羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇荧光发射光谱图。阿霉素浓度由上到下依次为0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5和5.0μmol/L。图7为阿霉素测定的标准曲线图，纵坐标表示F0（空白）与F（含有阿霉素）的比值。图8为阿霉素检测的干扰性实验，对比了除阿霉素外的13种不同的干扰物质，纵坐标表示F0（空白）与F（含干扰物质）的比值关系图。横坐标0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇‑金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征是利用金纳米团簇与阿霉素的特异性相互作用后发生强烈光致电子转移，导致金纳米团簇的荧光发生猝灭，从而实现阿霉素的测定；所述的金纳米团簇由以下步骤制成的：将1 mL浓度为0.4 mol/L氢氧化钠溶液和1.6 mL浓度为20 mg/mL氯金酸预先混合，而后加入7.4 mL浓度为50 mg/mL羧化壳聚糖溶液和10 mL浓度为0.1 mol/L的二硫苏糖醇溶液，摇匀后置于37℃水浴锅中恒温反应8小时得到羧化壳聚糖/二硫苏糖醇‑金纳米团簇；将反应后的金纳米团簇用截留分子量3500的透析袋在双蒸水中透析24小时，得到纯化后的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇‑金纳米团簇。
【技术特征摘要】
1.一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征是利用金纳米团簇与阿霉素的特异性相互作用后发生强烈光致电子转移，导致金纳米团簇的荧光发生猝灭，从而实现阿霉素的测定；所述的金纳米团簇由以下步骤制成的：将1mL浓度为0.4mol/L氢氧化钠溶液和1.6mL浓度为20mg/mL氯金酸预先混合，而后加入7.4mL浓度为50mg/mL羧化壳聚糖溶液和10mL浓度为0.1mol/L的二硫苏糖醇溶液，摇匀后置于37℃水浴锅中恒温反应8小时得到羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇；将反应后的金纳米团簇用截留分子量3500的透析袋在双蒸水中透析24小时，得到纯化后的羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇。2.根据权利要求1所述的一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征是能根据荧光光谱的最大发射波长645nm处的荧光强度来判断阿霉素的浓度。3.根据权利要求1或2所述的一种基于羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇的阿霉素荧光检测方法，其特征阿霉素的测定步骤如下：取0.1mL羧化壳聚糖/二硫苏糖醇-金纳米团簇溶液加入到1.9mL含不同浓度阿霉素的浓度为20mmol/L，pH=6.0的磷酸盐缓冲液中，混合均匀；反应结束后测定其在645nm处的激发波长为285nm的...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，邓豪华，黄开源，彭花萍，何宏星，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。